一种提高样本分类准确性的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种通过联合检测样本中ＹＫＬ４０和ＭＡＳＰ２蛋白来提高样本分类准确性的方法，其包括：测定样本中ＹＫＬ－４０和ＭＡＳＰ２的含量；以ＹＫＬ４０和ＭＡＳＰ２蛋白含量的比值为变量，根据不同的阈值对癌症诊断的灵敏度和特异性绘制出ＲＯＣ曲线，并计算曲线下面积ＡＵＣ；按照ＡＵＣ值、灵敏度和特异性将样本进行分类。本发明专利技术还公开了一种用于检测样本中ＹＫＬ４０和ＭＡＳＰ２的试剂盒。

Method and kit for improving accuracy of sample classification

The invention discloses a method to improve the classification accuracy of the sample, through the combined detection of YKL40 and MASP2 protein in the sample includes: to determine the content of sample in YKL 40 and MASP2 to YKL40 and MASP2; the ratio of protein content as variables, according to the sensitivity and specificity of different threshold for cancer diagnosis drawing ROC curve, and calculate the area under the curve of AUC; according to AUC value, the sensitivity and specificity of the classification of samples. A kit for detecting YKL40 and MASP2 in a sample is also disclosed.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学
具体地说，本专利技术涉及一种提高样本分类准确性的方法、 以及一种用于检测样本中YKL40和MASP2蛋白的试剂盒。
技术介绍
肝癌(HCC)是一种常见的且致命的恶性肿瘤。据统计，每年约新增500,000肝癌患者， 并且近500,000人死于该疾病(参见Parkin, D. M., Bray， F., Ferlay, J.， and Pisani, P. (2001) Estimating the world cancer burden: Globocan 2000. Int J Cancer 94, 153-156.)。现有的肝癌诊断 手段包括超声波检测和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein， AFP)检测，两者通常结合使用(参见 Spangenberg， H. C., Thimme， R., and Blum, H. E. (2006) Serum markers of hepatocellular carcinoma. Semin Liver Dis 26， 385-390.)。当以甲胎蛋白为生物标志物通过ROC曲线进行肝 癌诊断时，其检测阳性阈值通常为20ng/ml (参见陈季武、范培昌，快速检测甲胎蛋白的免 疫层析试条的研制，《分析科学学报》，2002年第4期第273-276页)。超声和甲胎蛋白联 合检测的灵敏度和特异性分别是50-85%和70-90%，但它的假阳性和假阴性率高达40% (参 见Tu, D. G.， Wang, S. T., Chang, T. T.， Chiu， N. T., and Yao, W. J. (1999) The value of serum tissue polypeptide specific antigen in the diagnosis of hepatocellular carcinoma. Cancer 85, 1039-1043; Buscarini, L., Sbolli, G., Cavanna, L., Civardi, G., Di Stasi, M., Buscarini, E.， and Fornari, F. (1987) Clinical and diagnostic features of 67 cases of hepatocellular carcinoma. Oncology 44， 93-97.)。因此，人们迫切需要科技工作者开发出检测更方便、灵敏度和特异性 更高、而且准确率高的肝癌诊断手段。YKL-40是人类软骨糖蛋白39(HcGP-39)(或称为类几丁质酶蛋白，chitinase 3-like 1)的 简写，又简写为CHI3L1、 YKL40。人们经研究发现，血清中YKL-40的水平与许多疾病状况 比如在骨关节炎、原发性大肠癌、乳腺癌、复发的卵巢癌有关，因而可用于一些疾病的诊断、 预后评估、治疗效果监测及病情发展监测。例如，可用于卵巢癌的诊断和预后(参见程明 刚，等。血清YKL-40在卵巢癌患者诊断和预后中的应用。《广东医学》2008年29巻2期第 255-256页)。耶鲁大学医学院研究人员在2007年11月15日出版的《新英格兰医学期刊》 (The New England Journal of Medicine)上发表文章称，临床试验结果表明该分子可能在决定4严重哮喘病生理反应时发挥重要作用，与常人相比，哮喘病患者的YKL-40循环血清会更多，同时也与哮喘的严重程度有关。(参见生物通网址http:〃www.ebiotrade.com/newsf/2007-l 1/20071116165039.htm)。美国圣迭戈加州大学Johansen 等称，YKL-40是独立于癌胚抗原(CEA)和乳酸脱氢酶的生物标志物，普通人群血清YKL-40 水平高者，其胃肠道肿瘤患病风险增加2.7倍，且诊断为胃肠道肿瘤后预后欠佳(参见中国 医学论坛报网络版。网址http:〃www.cmt.com.cn/article/080221/a08022 lb0301.htm)。人们还 发现，血清YKL-40水平还可作为肝纤维化指标(参见Johansen, J. S., Christoffersen, P.， Moller, S., Price, P. A., Henriksen， J. H., Garbarsch, C.， and Bendtsen， F. (2000) Serum YKL-40 is increased in patients with hepatic fibrosis. Journal of hepatology 32, 911-920.)。然而，迄今未检 索到关于YKL-40检测应用于肝癌诊断的报道。MASP2是甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 (mannan-binding lectin associated serineprotease-2)的縮写，与人的免疫缺损病有关，在机体的固有性免疫防御中发挥重要作 用(参见蔡学敏，等。人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达， 《免疫学杂志》，2007年03期第235-238页)。其在肝癌诊断中的应用尚未有报道。本专利技术人的研究表明，MASP2基因是一种在肝脏中特异表达的基因。经过大量的研究， 本专利技术人意外地发现这两种蛋白都与肝癌症状有关，其中YKL-40在肝癌患者血清中的含量 明显高于正常样本，而MASP2在肝癌患者体内的表达量则低于正常样本。于是，我们提出 一个假说将一种癌症中高表达的蛋白(这个蛋白可以不是对某一癌症特异，可以在不同的 癌症中都高表达)和一个组织或器官特异表达蛋白在该组织或器官的低表达(由于癌症造成 执行组织或器官特异功能的特异蛋白的下调)联系起来，可以作为诊断癌症的联合生物标记 物，提高癌症检测的灵敏度和特异性。我们以YKL-40和MASP2这两种蛋白为例，看它们可 否作为肝癌临床应用的生物标志物、以及其联合检测可否提高疾病诊断和预后的准确性。
技术实现思路
基于上述发现，本专利技术的首要目的在于提供一种通过联合检测样本中YKL40和MASP2 蛋白来提高样本分类准确性的方法。本专利技术的另一目的在于提供一种用于检测样本中YKL40和MASP2蛋白的试剂盒。本专利技术的又一目的在于提供一种通过联合检测样本中癌症高表达蛋白和组织或器官特异 表达蛋白来提高样本分析敏感度的方法。本专利技术的再一目的在于提供一种用于检测样本中癌症高表达蛋白和组织或器官特异表达 蛋白的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术手段一种提高样本分类准确性的方法，其特征在于，联合检测样本中的蛋白YKL-40和 MASP2。上述联合检测包括(1) 检测样本中YKL-40和MASP2的含量；(2) 对测得的YKL-40和MASP2含量进行数学分析；以及(3) 根据数学分析结果，对测定样本进行分类。 一种上述方法在疾病包括癌症的诊断、预后评估、治疗效果监测及病程监测中的应用。 一种用于检测样本中YKL40和MASP2蛋白的试剂盒，其包含(1 )能够结合YKL40和MASP2的抗体；以及(2)当YKL40禾口/或MASP2结合于(1)中限定的抗体时，能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高样本分类准确性的方法，其特征在于，联合检测样本中的蛋白ＹＫＬ－４０和ＭＡＳＰ２。

【技术特征摘要】
1.一种提高样本分类准确性的方法，其特征在于，联合检测样本中的蛋白YKL-40和MASP2。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述联合检测包括(1) 检测样本中YKL-40和MASP2的含量；(2) 对测得的YKL-40和MASP2含量进行数学分析；以及(3) 根据数学分析结果，对测定样本进行分类。3. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述YKL-40和MASP2的含量分别测定。4. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述数学分析为绘制ROC曲线，其中以YKL40 与MASP2蛋白含量的比值为变量，根据不同的阈值绘制出ROC曲线，并计算曲线下面积 AUC;并且按照期望的灵敏度和特异性，对测定样本进行分类。5. 如权利要求1~4中任一项所述的方法，其特征在于，所述YKL-40和MASP2中的至 少一个的含量使用ELISA技术完成。6. 如权利要求1 4中任一项所述的方法，其特征在于，所述样本选自于由全血、血浆、 血清、尿液、脑脊液、唾液、和眼泪所构成的组。7. 如权利要求l所述的方法，其特征在于，用于癌症的诊断、预后评估、治疗效果监测 及病程监测。8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述癌症是肝癌。9. 一种用于实施如权利要求1~8中任一项所述方法的试剂盒，其包含(1) 能够结合YKL40和MASP2的抗体；以及(2) 当YKL40禾Q/或MAS...

【专利技术属性】
技术研发人员：林标扬，
申请(专利权)人：林标扬，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]