可溶性人M-CSF受体及其应用制造技术

提供了可溶性人Ｍ－ＣＳＦ受体，以及含有该受体的药物组合物，含有该药物组合物的试剂盒，以及诊断和治疗Ｍ－ＣＳＦ相关疾病和病症，如溶骨性疾病患者的骨流失的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能够结合M-CSF的人M-CSF受体的自然产生的可溶性片段， 采用该可溶性片段进行治疗的方法，以及通过检测患者样品内该可溶性片段来 诊断疾病和症状的方法。
技术介绍
预计每年会发生140万新癌症病例，并预计每年有60万人死于癌症。随 着检测和治疗的发展，许多患者能存活很长时间。从2002年1月1日起，预 计有1010万癌症存活者，约占总患者的3.4%。在这些癌症存活者中，最常见 的癌症部位是乳腺(22%)、前列腺(18°/。)、结肠直肠(10%)和妇科(10%)。通常，如果未在发展早期检出癌症则其发病率和死亡率将显著上升。治疗 方法的确定通常与癌症被诊断出时的阶段有关。因此，在治疗期间迫切需要灵 敏而精确的方法来诊断、分级、预测预后、以及监测癌症进展或消退。巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF或CSF-1)调节巨噬细胞及其前体和破骨细 胞及其前体的存活、增殖和分化。M-CSF活性通过调节M-CSF及其膜结合受 体(M-CSFR)基因表达的机制以及受体介导的胞吞作用、代谢加工和下游信号 传导的抑制作用而受到严格控制。M-CSF在基质细胞、成骨细胞和其他细胞内表达。它还在乳腺、子宫和卵 巢肿瘤细胞内表达。在这些肿瘤中的表达程度与良好和不良预后相关(Kacinski Ann. Med.27: 79-85 (1995); Smith等，Clin. Cancer Res. 1: 313-25 (1995))。 相比管内(侵袭前)癌症，在乳腺癌中，侵袭性肿瘤细胞普遍表达M-CSF(Scholl 等，J.Natl. Cancer Inst. 86: 120-6(1994))。此外，M-CSF显示可促进乳房肿瘤 进展成恶性肿瘤(Lin等，J. Exp. Med. 93: 727-39(2001))。人膜结合M-CSF受体由c-fms原癌基因编码，它是一种在骨髓和分化的血 液单核细胞中表达的蛋白质酪氨酸激酶跨膜受体(I型膜蛋白)。M-CSF受体属于Tyr蛋白激酶家族和CSF-1/PDGF受体亚家族。它包含5个Ig样C2型(免疫 球蛋白样)结构域、1个跨膜结构域和具有两个激酶结构域的胞内中断的Src相 关结构域。M-CSF通常与其受体结合以发挥其生物效应。M-CSF与c-fins结合 导致受体均二聚化，激活胞质激酶结构域，进而导致其他细胞蛋白质的自磷酸 化和磷酸化。这些事件引发了包括JAK/STAT、 P13K和ERK途径在内的信号 转导途径的级联，从而导致各种细胞反应有丝分裂、细胞因子的分泌、膜褶 皱、以及调节M-CSFR的转录。(Hamilton J.A.， J Leukoc Biol.， 62(2): 145-55 (1997); Hamilton J， A.， I廳uno Today., 18(7): 313-7(1997); Fixe和Praloran， Cytokine 10: 32-37 (1998))。专利技术概述本专利技术的材料和方法满足的上述需求和本领域的其他相关需求。在本专利技术 的一个方面中，由于发现了人M-CSF(CSF-l)受体的自然产生的可溶性片段(缺 乏跨膜结构域)，从而能够重组产生这种自然产生的片段以用于需要中和 M-CSF活性的治疗用途。在相关实施方式中，本专利技术提供了包含上述多肽和第二种多肽的融合蛋 白，其中上述多肽和第二种多肽相连从而不会损害上述多肽的正常生物活性。 示例性的融合蛋白包括免疫球蛋白Fc融合体。在本专利技术的还有另一实施方式中，提供了包含可溶性M-CSF受体的特定 自然产生形式或融合蛋白的药物组合物，以及用这种药物组合物治疗癌症或与 破骨细胞活性升高相关的代谢性骨病。另一方面，本专利技术提供诊断癌症的方法，该方法包括以下步骤(a)分析 患者流体样品中可溶性M-CSF受体的水平，其中，高于某阈值的可溶性M-CSF 受体的水平与存在癌症相关，而低于所述阈值的水平表明该患者不太可能患有 癌症。在本专利技术的另一示例性实施方式中，提供了测定癌症患者预后的方法， 该方法包括以下步骤(a)分析患者流体样品中可溶性M-CSF受体的水平，其 中，高于某阈值的可溶性M-CSF受体水平表明该患者可能具有不良预后，而 低于所述阈值的水平表明该患者可能具有良好预后。再在另一实施方式中，提 供了监测癌症患者的癌症疗法的方法，该方法包括以下步骤(a)先分析患者流体样品中可溶性M-CSF受体的水平，再开始用某癌症疗法进行治疗；和(b) 开始用该癌症疗法治疗后分析所述流体样品，其中，开始用该癌症疗法治疗后 可溶性M-CSF受体的水平降低表明该患者正在接受治疗有效剂量的癌症疗法。本专利技术认为，可对任何癌症实施任何上述方法，这些方法包括诊断、预 后或监测癌症疗法。示例性的癌症包括乳腺癌、肺癌、肾癌、多发性骨髓瘤、 甲状腺癌、前列腺癌、腺癌、包括白血病和淋巴瘤在内的血细胞恶性肿瘤；头 颈癌；胃肠癌，包括食管癌、胃癌、结肠癌、肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、胰 腺癌、肝癌、胆管或胆囊的癌症；雌性生殖道的恶性肿瘤，包括卵巢癌、子宫 内膜癌、阴道癌和宫颈癌；膀胱癌；脑癌，包括成神经细胞瘤；肉瘤、骨肉瘤； 以及皮肤癌，包括恶性黑色素瘤或鳞状上皮细胞癌。在本专利技术的另一实施方式中，提供了监测雌性月经周期的方法，该方法包 括以下步骤(a)分析雌性患者流体样品中可溶性M-CSF受体的水平，其中， 高于某阈值的可溶性M-CSF受体的水平表明该患者可能受孕，而低于所述阈 值的水平表明该患者可能不会受孕。在相关的实施方式中，提供了包括类似步 骤的检测雌性子宫内膜增殖的方法，其中，高于某阈值的可溶性M-CSF受体 的水平与子宫内膜异常增殖，例如子宫内膜异位相关，而低于该阈值表明该患 者的子宫内膜增殖状态可能正常。可用涉及癌症或子宫内膜增殖的任何上述方法分析的示例性流体样品包 括尿、血浆或血清。在相关实施方式中，本专利技术还提供了处理器、计算机可读存储器以及某种 例程，该例程储存在计算机可读存储器上并适合在处理器上执行以进行任何上 述方法和/或生成可溶性M-CSF受体的检测水平输出值和认为是"正常"的阈 值或阈值水平范围，因此该"正常"范围之外的水平与一种或多种上述症状相 关。本专利技术还提供了包含执行类似功能的程序或例程的计算机可读介质。合适 的计算机系统、环境和/或配置的例子包括个人计算机、服务器计算机、手提式 或膝上型装置、多处理器系统、微处理器系统、机顶盒、可编程的消费者电子 设备、网络PC、小型计算机、大型计算机、包括任何上述系统或装置的分布 式计算环境、或本领域已知的任何其他系统。再在另一本专利技术实施方式中，提供了试剂盒，其中装有(a)特异性结合可溶性M-CSF受体的第一抗体；和(b) M-CSF受体含量已知的M-CSF受体标 准品。在相关方面，在上述提供的试剂盒中，第一抗体连接于可检测标记。在 还有另一方面，所述可检测标记是酶。再在另一方面，所述试剂盒中还装有能 释放可检测信号的所述酶的底物。在另一相关方面，上述试剂盒中还装有结合 可溶性M-CSF受体的第二抗体。再在另一相关方面，上述试剂盒中还装有结 合所述第一抗体的第二抗体。再在另一相关方面，上述试剂盒中还装有结合可 溶性M-CSF受体的第二抗体。在本专利技术的其他实施方式中，所述可溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断癌症的方法，所述方法包括以下步骤：　（ａ）分析患者流体样品中可溶性Ｍ－ＣＳＦ受体的水平，其中，高于某阈值的可溶性Ｍ－ＣＳＦ受体的水平与存在癌症相关，而低于所述阈值的水平表明该患者不太可能患有癌症。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C刘，M多特—莱因哈德，J库尼奇，M卡瓦诺，
申请(专利权)人：诺华有限公司，爱克索马技术有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]