重组细胞致死性扩张毒素CdtB、其表达载体及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种能原核表达ｃｄｔＢ基因的原核表达质粒ｐＥＴ－１５ｂ－ｃｄｔＢ构建方法，并经转化大肠杆菌感受态细胞ＴＯＰ１０和ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导，体外诱导表达蛋白ＣｄｔＢ，该蛋白有望作为蛋白药物应用于肿瘤等疾病的治疗。并且本发明专利技术是克服现有的包涵体蛋白纯化过程中存在的问题，提供一种无需昂贵仪器，只需纯手工即可完成，且方法简便、耗时少、成本低、活性好，产品复性率可达８０％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体地说涉及一种重组cdtB新序列原核表达载体 构建及其蛋白纯化、复性方法。
技术介绍
CdtB是细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin， CDT)家族的一个 成员，细胞致死性扩张毒素是一种新近发现的、由伴放线放线杆菌( Jc'wo6ad〃ws a/womycefewco/n/tora， ^4fl)产生的细胞毒'f生因子之一。伴放线放线杆菌04a)是侵袭性牙周炎的主要致病菌之一，在各型牙周炎中尤 以侵袭性牙周炎为最重，此型牙周炎具有发病年龄早、病变进展快、易造成牙周 组织迅速破坏而导致牙齿松动脱落等特点，而且有明显的家族聚集性，对于牙周 炎病因学的研究确认细菌是牙周炎发生的始动因子，而伴放线放线杆菌fl)作 为局限型4旻袭'f生牙周炎(Localized aggressive periodontitis, LAgP )的主要致病 菌，可产生一系列毒力因子使其易于定植、破坏宿主组织、抑制组织修复和干扰 宿主免疫防御功能，对疾病的发生发展意义重大。细胞致死性扩张毒素(CDT) 是新近被发现的由G-致病菌产生的一种毒素，该毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组细胞致死性扩张毒素ｃｄｔＢ，其核苷酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所述。

【技术特征摘要】
1.重组细胞致死性扩张毒素cdtB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述。2. 重组细胞致死性扩张毒素cdtB，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所迷。3. 重组细胞致死性扩张毒素cdtB的表达载体pET-15b-cdtB。4. 重组细胞致死性扩张毒素cdtB的制备方法，其特征在于制备步骤为 a. 目的基因cdtB的合成设计上游引物5，陽CCGCTCGAGATGCAATGGGTAAAGCAATT陽3，，带限制性内切酶 Xho I酶切位点，下游引物 5'-CGCGGATCCTTAGCGATCATGAACAAAACT-3，， 带限制性内切酶BamH I酶切位点；分别以伴放线放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans, Aa) ATCC 29522、 29523为模板，PCR扩增cdtB基因，PCR条件是94°C 30 s， 55°C 30 s, 72°C lminx 30个循环，72°C延伸8min, PCR产物长度为852 bp;b. 双酶切cdtB基因与带有6xffis标签的载体pET-15b,连接构建重组载体pET-15b-cdtB，转化宿主菌，构建cdtB基因工程菌，所述双酶切采用的是BamHI和Xho I ，所述宿主菌为大肠杆菌；c. 培养cdtB基因工程菌，体...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐艳，李璐，杨迷芳，王晓茜，段君兰，
申请(专利权)人：南京医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]