【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及一种使用生物孔检测和/或分析靶聚合物、尤其是靶多核苷酸的方法。本专利技术还涉及一种用于执行该方法的新系统。该方法具有很多用途。特别地，该方法可以用于诊断、多态性检测和v(d)j组库分析。
技术介绍
1、目前，广泛的应用需要快速且廉价的聚合物(例如，dna或rna)测序和识别技术。现有技术缓慢且昂贵，主要是因为它们依赖扩增技术来产生大量多核苷酸，并且需要大量专业荧光化学品来进行信号检测。
2、生物孔(和其他纳米孔)作为用于聚合物和各种小分子的直接电生物传感器具有巨大的潜力。特别地，最近已经关注到纳米孔作为潜在的dna测序技术。
3、当跨越纳米孔施加电位时，在分析物(诸如核苷酸)短暂驻留在桶中达某个时间段的情况下，电流发生变化。核苷酸的纳米孔检测给出了已知特征和持续时间的电流变化。在链测序方法中，单条多核苷酸链穿过孔并得出核苷酸的身份。链测序可以涉及使用分子煞车来控制多核苷酸通过孔的运动。
4、固态孔已被用于使用含有cas9的探针来识别靶dna序列(yang等人,nanolett.201...
【技术保护点】
1.一种确定样品中靶聚合物的存在或不存在的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述复合物的所述聚合物引导的效应蛋白部分通过所述孔的转位产生电效应，所述电效应和与所述复合物的转位通过所述孔的所述靶聚合物部分相关的电效应相比为(i)更长、(ii)更明显和(iii)更复杂中的一者或多者。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(c)包括跨越所述膜施加电位差并测量流过所述孔的电流。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述复合物的所述聚合物引导的效应蛋白部分通过所述孔的转位产生电流效应，所述电流效应和与所述复合物的转位...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种确定样品中靶聚合物的存在或不存在的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述复合物的所述聚合物引导的效应蛋白部分通过所述孔的转位产生电效应，所述电效应和与所述复合物的转位通过所述孔的所述靶聚合物部分相关的电效应相比为(i)更长、(ii)更明显和(iii)更复杂中的一者或多者。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(c)包括跨越所述膜施加电位差并测量流过所述孔的电流。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述复合物的所述聚合物引导的效应蛋白部分通过所述孔的转位产生电流效应，所述电流效应和与所述复合物的转位通过所述孔的所述靶聚合物部分相关的电流效应相比为(i)更长、(ii)更明显和(iii)更复杂中的一者或多者。
5.根据权利要求2或4所述的方法，其中更复杂的电或电流效应包括(i)不一致效应、(ii)噪声和(iii)电步进事件中的一者或多者。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中在与所述聚合物引导的效应蛋白相关的所述电或电流效应之前和/或之后观察到与所述靶聚合物相关的所述电或电流效应。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶聚合物为靶多核苷酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述靶多核苷酸为双链的或包含双链区域和/或为dna、dna/rna杂交体或rna。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述引导聚合物为引导多核苷酸并且所述聚合物引导的效应蛋白为多核苷酸引导的效应蛋白。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述引导多核苷酸为引导rna并且所述多核苷酸引导的效应蛋白为rna引导的效应蛋白。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述rna引导的效应蛋白为rna引导的核酸内切酶或者其中rna引导的核酸内切酶的核酸酶活性被禁用的所述rna引导的核酸内切酶。
12.根据权利要求11所述的方法，其中：
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述cas为cas9。
14.根据权利要求7至13中任一项所述的方法，其中所述引导多核苷酸包含与所述靶聚合物中的序列结合的核苷酸序列和与所述多核苷酸引导的效应蛋白结合的核苷酸序列。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述引导多核苷酸为包含与所述靶多核苷酸中的序列结合的crrna和tracrrna的引导rna。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述引导rna为sgrna。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述引导聚合物、所述聚合物引导的效应蛋白或在存在时的所述靶聚合物具有能够与所述膜偶联的锚。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述锚包含胆固醇。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括使所述样品和所述孔与两个或更多个引导聚合物接触，所述两个或更多个引导聚合物中的每一个(i...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉科马·尼尚萨·贾亚辛格，伊丽莎白·杰恩·华莱士，理查德·亚历山大·古铁雷斯，米歇尔·安妮·邓斯通，布拉德利·艾伦·斯派塞，
申请(专利权)人：牛津纳米孔科技公开有限公司，
类型：发明
国别省市：
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