【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及甜菊糖苷制备，具体涉及一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法。
技术介绍
1、甜菊糖苷是一种由各种萜烯苷组成的混合物，其具有相同的甜菊糖苷元核心，并具有连接到c13和c19的各种糖基，目前已鉴定出十余种萜烯苷的结构，天然甜菊叶中的大部分糖苷是莱鲍迪甙a(2％～10％)、甜菊苷(2％～10％)和莱鲍迪甙c(1％～2％)，例如莱鲍迪甙b、d、e和f、甜菊双苷和甜茶苷等其它糖苷以低含量(低于1％)存在于甜菊叶中。而杜克苷a与甜茶苷就属于甜菊糖中稀有糖苷的两种组分。
2、目前国际上主要专注于甜菊糖中stv、ra等单一组分的提纯方法的研究，因此提取ra、stv后的大量结晶母液糖需要处理。如果能够利用甜菊糖苷结晶母液糖为原料,继续分离提取出杜克苷a和甜茶苷，则能充分地利用原料且能够获得口感更好的产品，但是目前对于分离制备杜克苷a和甜茶苷的研究很少。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，该方法以结晶母液糖为原料，制得了高纯的杜克苷a以及甜茶苷，大大提高了结晶母液糖的利用率，减少了能源的消耗。
2、为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：
3、一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，包括以下步骤：
4、s1：常压树脂柱富集：
5、将结晶母液糖溶于水后进入到大孔吸附树脂内进行吸附，进样至出甜，然后水洗
6、s2：中低压色谱柱分离：
7、将上述含杜克苷a和甜茶苷的解析液蒸干除去溶剂之后得到含杜克苷a和甜茶苷的混合糖，之后采用高醇溶液将混合糖进行溶解后，依次经串联的多个中低压色谱柱进行分离，然后采用不同浓度的乙醇溶液对单个色谱柱分别进行梯度洗脱，分别收集含杜克苷a的洗脱液以及含甜茶苷的洗脱液；
8、s3：杜克苷a的纯化：
9、将上述含杜克苷a的洗脱液蒸干除去溶剂后制得杜克苷a粗品，然后以甲醇溶液作为结晶溶剂对杜克苷a进行一次结晶处理，之后将结晶料液过滤，得到的滤饼采用甲醇溶液进行二次结晶处理，之后将结晶料液过滤，得到的沉淀干燥后，即得高纯杜克苷a；
10、s4：甜茶苷的纯化：
11、将上述一次结晶处理时的结晶母液与含甜茶苷的洗脱液混合后蒸发浓缩处理，得到的浓缩液采用乙酸乙酯与正丁醇的混合溶剂进行多次萃取，合并萃余相，蒸发除去溶剂制得高纯甜茶苷。
12、作为上述技术方案的改进，步骤s1中，所述大孔吸附树脂为lx-28、lk-1300sd、lx-t83、69m、dm30、spd-009中的一种，进样时料液体积为树脂体积的0.15-0.2bv，料液的流速小于1bv/h。
13、作为上述技术方案的改进，步骤s1中，水洗时水的体积为树脂体积的1-2bv，水的流速为1-2bv/h。
14、作为上述技术方案的改进，步骤s1中，梯度解析时解析剂的体积为树脂体积的1-2bv，解析剂的流速为2-3bv/h。
15、作为上述技术方案的改进，步骤s2中，所述高醇溶液的浓度为90-95wt％的乙醇溶液，采用高醇溶液对混合糖进行溶解时控制溶解后溶液的固含量为5-20wt％。
16、作为上述技术方案的改进，步骤s2中，中低压色谱柱中的填料为正相分离填料或反相分离填料，所述正相分离填料为硅胶以及具有nh2、aps、cn、cps基团的键合相填料；所述反相分离填料为碳十八柱(c18/ods)、碳八柱(c8/mos)、碳四柱(c4/butyl)、苯基柱(c6h5/phenyl)中的一种或多种；进一步的，所述中低压色谱柱为ymc-pack cn色谱柱。
17、作为上述技术方案的改进，步骤s2中，采用中低压色谱柱进行分离时的上样量与中低压色谱柱中填料的用量比为1g：(0.001-0.03)ml，上样时料液的流速小于1bv/h。
18、作为上述技术方案的改进，步骤s2中，梯度洗脱时采用的乙醇溶液的浓度分别为95-98wt％、85-90wt％、75-80wt％、65-70wt％，洗脱时乙醇溶液的流速为1-2bv/h，分别收集尾部色谱柱以及与尾部色谱柱相邻的色谱柱用85-90wt％乙醇溶液洗脱时的洗脱液，即为含杜克苷a的洗脱液；分别收集尾部色谱柱以及尾部色谱柱相邻的色谱柱用75-80wt％乙醇溶液洗脱时的洗脱液，即为含甜茶苷的洗脱液。
19、作为上述技术方案的改进，步骤s2中，除尾部色谱柱以及与尾部色谱柱相邻的色谱柱外，其他串联的色谱柱分别采用浓度为95-98wt％、85-90wt％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱液与步骤s1中15-25wt％、35-45wt％乙醇溶液解析时的解析液合并干燥重新作为结晶母液糖使用。
20、作为上述技术方案的改进，步骤s3中，一次结晶处理时甲醇溶液中甲醇和水的体积比为3：(1-2)，一次结晶处理时甲醇溶液与杜克苷a粗品的用量比为(2-5)ml：1g，一次结晶处理时的温度为室温，时间为20-30h。
21、作为上述技术方案的改进，二次结晶处理时甲醇溶液中甲醇与水的体积比为3：(1-2)，二次结晶处理时甲醇溶液与滤饼的用量比为(5-10)ml：1g；二次结晶处理时的温度为室温，时间为20-30h。
22、由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：
23、本专利技术以结晶母液糖为原料，依次通过常压树脂柱初步富集和中低压色谱法进行分离，在中低压色谱分离时采用串柱进样吸附以及分柱洗脱的方式进行处理，有效将杜克苷a以及甜茶苷进行分离出来，最后分别利用重结晶以及萃取纯化的方法得到了高纯的杜克苷a和甜茶苷，实现了两种稀有糖苷的有效分离与提纯。
24、本专利技术通过优化工艺条件，首先采用大孔吸附树脂将杜克苷a和甜茶苷进行富集，并采用不同浓度的解析剂进行梯度解析，得到富集有甜茶苷以及杜克苷a的解析液，之后采用串联的中低压色谱柱进行吸附处理，最后采用不同浓度的乙醇溶液分别对单个中低压色谱柱进行洗脱，分别得到含甜茶苷的洗脱液以及含杜克苷a的洗脱液，实现了杜克苷a与甜茶苷的有效分离。大孔吸附树脂解析时的其他解析废液可作为原料继续使用，大大提高了杜克苷a和甜茶苷的回收率，减少了能源的消耗。本专利技术的方法稳定，人工操作简单，可回收大量溶剂，而且制得的杜克苷a和甜茶苷的纯度高。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S1中，所述大孔吸附树脂为LX-28、LK-1300SD、LX-T83、69M、DM30、SPD-009中的一种，进样时料液体积为树脂体积的0.15-0.2BV，料液的流速小于1BV/h。
3.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S1中，水洗时水的体积为树脂体积的1-2BV，水的流速为1-2BV/h；和/或梯度解析时解析剂的体积为树脂体积的1-2BV，解析剂的流速为2-3BV/h。
4.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S2中，所述高醇溶液的浓度为90-95wt％的乙醇溶液，采用高醇溶液对混合糖进行溶解时控制溶解后溶液的固含量为5-20wt％。
5.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S2中，中
6.根据权利要求5所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：所述中低压色谱柱为YMC-Pack CN色谱柱。
7.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S2中，采用中低压色谱柱进行分离时的上样量与中低压色谱柱中填料的用量比为1g：(0.001-0.03)ml，上样时料液的流速小于1BV/h。
8.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S2中，梯度洗脱时采用的乙醇溶液的浓度分别为95-98wt％、85-90wt％、75-80wt％、65-70wt％，洗脱时乙醇溶液的流速为1-2BV/h，分别收集尾部色谱柱以及与尾部色谱柱相邻的色谱柱用85-90wt％乙醇溶液洗脱时的洗脱液，即为含杜克苷A的洗脱液；分别收集尾部色谱柱以及尾部色谱柱相邻的色谱柱用75-80wt％乙醇溶液洗脱时的洗脱液，即为含甜茶苷的洗脱液。
9.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S2中，除尾部色谱柱以及与尾部色谱柱相邻的色谱柱外，其他串联的色谱柱分别采用浓度为95-98wt％、85-90wt％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱液与步骤S1中15-25wt％、35-45wt％乙醇溶液解析时的解析液合并干燥后重新作为结晶母液糖使用。
10.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷A和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤S3中，一次结晶处理时甲醇溶液中甲醇和水的体积比为3：(1-2)，一次结晶处理时甲醇溶液与杜克苷A粗品的用量比为(2-5)ml：1g，一次结晶处理时的温度为室温，时间为20-30h；
...【技术特征摘要】
1.一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤s1中，所述大孔吸附树脂为lx-28、lk-1300sd、lx-t83、69m、dm30、spd-009中的一种，进样时料液体积为树脂体积的0.15-0.2bv，料液的流速小于1bv/h。
3.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤s1中，水洗时水的体积为树脂体积的1-2bv，水的流速为1-2bv/h；和/或梯度解析时解析剂的体积为树脂体积的1-2bv，解析剂的流速为2-3bv/h。
4.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤s2中，所述高醇溶液的浓度为90-95wt％的乙醇溶液，采用高醇溶液对混合糖进行溶解时控制溶解后溶液的固含量为5-20wt％。
5.根据权利要求1所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于：步骤s2中，中低压色谱柱中的填料为正相分离填料或反相分离填料，所述正相分离填料为硅胶以及具有nh2、aps、cn、cps基团的键合相填料；所述反相分离填料为碳十八柱、碳八柱、碳四柱、苯基柱中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的一种基于树脂吸附及色谱分离制备杜克苷a和甜茶苷的方法，其特征在于：所述中低压色谱柱为ymc-pack cn色谱柱。
7.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱理平，鞠敏，何冬生，郭晓杰，刘浩，杨超，
申请(专利权)人：东台市浩瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。