一种miR-29b-3p过表达工程干细胞外泌体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种miR‑29b‑3p过表达工程干细胞外泌体及其制备方法和应用，所述外泌体的制备方法，包括如下步骤：A、骨髓间充质干细胞的提取与培养；B、转染骨髓间充质干细胞，将传至第三代的骨髓间充质干细胞接种于六孔板，24小时后按照Lipofectamine 3000转染试剂盒的说明书将miR‑29b‑3p模拟物转入细胞中；C、外泌体分离，收集转染后的骨髓间充质干细胞培养上清液，离心后弃去沉淀，上清经超速离心后收集沉淀，PBS重悬，再次超速离心后弃上清，收集沉淀溶于PBS中，得到miR‑29b‑3p过表达工程干细胞外泌体溶液。本发明专利技术提供的miR‑29b‑3p过表达工程干细胞外泌体可以减轻眼角膜损伤修复中角膜组织炎症反应及角膜组织纤维化，有效改善角膜混浊，进行角膜损伤修复。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种mir-29b-3p过表达工程干细胞外泌体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、微小核糖核酸(microrna,mir)已成为近年来一类公认的高度保守的短非编码核糖核酸，长约19至25个碱基，通过以序列特异性的方式控制靶向信使核糖核酸(mrna)的稳定性和翻译，在各种生物过程中发挥重要作用。其中，mir-29b为mir-29家族成员之一，已经检测到mir-29b可通过靶向相关mrna参与细胞外基质相关蛋白的翻译过程，包括胶原、纤维蛋白和弹性蛋白等，调节器官和组织的纤维化和细胞外基质重塑；且mir-29b也已被证实通过靶向抑制磷脂酰肌醇三羟基激酶(phosphoinositide-3kinase，pi3k)的85阿尔法亚基(p85α)来抑制经典通路pi3k/akt通路的激活，进而调控细胞自噬调控的关键蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达。

2、细胞自噬为机体内的一个正常生理过程，参与细胞稳态和生存机制。除此之外，细胞自噬也有其他广泛的生物功能，包括先天性免疫与适应性免疫的调节。细胞自噬激活似乎是细胞的一种自我保护本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种miR-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的miR-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述miR-29b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述的miR-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述转染操作具体为：向试管中加入无血清细胞培养基、Lipofectamine 3000转染试剂，混匀后室温静置5分钟，然后再向其中加入无血清细胞培养基、miR-29b-3p模拟物、助转染试剂，混匀后室温静置20分钟；然后向其中补入无...

【技术特征摘要】

1.一种mir-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的mir-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述mir-29b-3p的核苷酸序列如seq id no:1所示。

3.根据权利要求1所述的mir-29b-3p过表达工程干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述转染操作具体为：向试管中加入无血清细胞培养基、lipofectamine 3000转染试剂，混匀后室温静置5分钟，然后再向其中加入无血清细胞培养基、mir-29b-3p模拟物、助转染试剂，混匀后室温静置20分钟；然后向其中补入无血清培养基，在孵箱中转染24小时。

4.根据权利要求1-3任一项所述的mir-...

【专利技术属性】
技术研发人员：李轩，刘菁华，姜力，高娟，
申请(专利权)人：天津市眼科医院，
类型：发明
国别省市：