一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法技术

技术编号:41329008 阅读:35 留言:0更新日期:2024-05-13 15:07
本发明专利技术为一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,属于生物检测技术领域。针对目前制备的单细胞活性和数量无法满足高通量PCR单细胞捕获技术的要求,本发明专利技术通过构建小鼠乳腺癌淋巴结转移动物模型,通过肿瘤转移检测,获得同时含有肿瘤转移和未转移的淋巴结,解离淋巴结病制备单细胞悬液,利用微孔板建立单细胞转录组文库和单细胞TCR组文库,最后对构建的单细胞文库进行测序和分析。本发明专利技术的方法操作简便,可重复性高,通过该方法获得的细胞得率高、细胞活性平均值达到91.5%,远优于传统方法制备的细胞活性,有效解决了传统方法中单细胞活性和数量无法满足高通量PCR单细胞捕获技术要求的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测,具体涉及一种用于单细胞tcr测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法。


技术介绍

1、乳腺癌是全球女性发病率和死亡率最高的癌症,复发和转移是导致乳腺癌患者死亡的主要因素;据临床资料统计:90%的肿瘤患者死于肿瘤转移;约有80%的实体肿瘤通过淋巴系统转移。现有研究认为,免疫细胞亚群与转移靶器官微环境相互作用影响肿瘤的靶器官转移,有学者研究发现,转移后的淋巴结相比未转移的淋巴结,b细胞和自然杀伤(nk)细胞亚群没有观察到显着变化,记忆cd8+t细胞和调节性t细胞(treg)比率明显升高,cd4+t细胞比率与淋巴结肿瘤负荷负相关。这一方面反映t细胞类别与转移性淋巴结肿瘤细胞百分比的相关性,另一方面说明了转移淋巴结中存在募集或增加treg细胞的机制以此促进免疫抑制,实现肿瘤转移。

2、t细胞是抗肿瘤免疫反应最主要的效应细胞,是肿瘤生物治疗的主要手段。tcr是t细胞识别肿瘤抗原的结构基础,每个t细胞都具有独特的抗原受体。tcr的多样性t细胞在分化发育过程中,由tcr的v、(d)、j区的基因片段随机连接、组合产生。在tcr的结构中,互补决本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤S1中,构建小鼠乳腺癌淋巴结转移动物模型的步骤为:

3.根据权利要求2所述的一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤S13中,检验乳腺癌4T1-Luc细胞的荧光信号的步骤如下:

4.根据权利要求2所述的一种用于单细胞TCR测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤S14中,接种的乳腺癌4T1-Luc细胞悬液的浓度为1×107个/m...

【技术特征摘要】

1.一种用于单细胞tcr测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种用于单细胞tcr测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤s1中,构建小鼠乳腺癌淋巴结转移动物模型的步骤为:

3.根据权利要求2所述的一种用于单细胞tcr测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤s13中,检验乳腺癌4t1-luc细胞的荧光信号的步骤如下:

4.根据权利要求2所述的一种用于单细胞tcr测序的小鼠单淋巴结免疫细胞分离方法,其特征在于,步骤s14中,接种的乳腺癌4t1-luc细胞悬液的浓度为1×107个/ml,接种量为50μl。

5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员:薛逸荃于益芝徐胜覃佳景肖祥俊崔立昆
申请(专利权)人:中国人民解放军海军军医大学
类型:发明
国别省市:

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