制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备高表达且低O‑糖基化水平的重组人白蛋白的方法，包括在发酵过程中至少采取一种措施提高蛋白表达速率、降低蛋白的O‑糖基化水平；具体包括S1、种子液制备；S2、分批发酵：将BSM培养基投入发酵罐，调节pH至5.0‑5.8、灭菌，待冷却后校正溶氧，设置温度28‑29.5℃和通气量，向培养基中加入已除菌的PTM1溶液，并再次调节培养基pH至5.0‑5.8；S3、甘油补料发酵：匀速流加甘油补料，发酵至30h以上；S4、甲醇补料发酵：流加甲醇补料，罐内PH值维持5.8‑6.0，温度降至24‑28℃，保持溶氧20％以上；S5、发酵产物离心，收集上清；本发明专利技术的方法可提供蛋白表达水平、减少蛋白O‑糖基化，所表达的重组蛋白含有极低水平的糖基化修饰。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，属于医药领域。

技术介绍

1、人血清白蛋白是人血浆中含量最丰富的蛋白质，其非糖基化的单链多肽包含585个氨基酸，分子量约66.5kd。临床上广泛应用于失血创伤和烧伤等引起的休克、水肿或腹水等危重病症的治疗、以及低蛋白血症等。

2、此外，白蛋白本身不存在n糖基化位点，但是在其s/t位点上可能具有一定程度的o-糖基化。尤其是酵母表达体系的重组产品，基于表达体系自身特性通常会产生一定程度的甘露糖基化，具有潜在的免疫原性，在人体内易被清除，半衰期短。因此，迫切需要寻找能够调控酵母表达体系重组蛋白的o-糖基化修饰的方法。

3、目前对于酵母蛋白o-糖基化水平的控制主要通过基因工程手段来实现。中国专利cn200980105645.9提供了一种可用于生产低水平的o-糖基化蛋白的酵母菌株，制备方法是将编码内源伴侣蛋白的基因替换为伴侣蛋白哺乳动物同系物的基因并破坏或去除o-甘露糖基转移酶基因，和/或过表达内源或外源ca2+atp酶。中国专利201080030803.1提供了一种控制抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括在发酵过程中至少采取一种措施提高蛋白表达速率、降低蛋白的O-糖基化水平；

2.如权利要求1所述的一种制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2述的一种制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，步骤S1的菌种为CBS7435-rHSA，CBS7435-rHSA菌株采用以下方法制备：

4.如权利要求2述的一种制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，步骤S3和步骤S4之间，还包括混合补...

【技术特征摘要】

1.一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括在发酵过程中至少采取一种措施提高蛋白表达速率、降低蛋白的o-糖基化水平；

2.如权利要求1所述的一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2述的一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，步骤s1的菌种为cbs7435-rhsa，cbs7435-rhsa菌株采用以下方法制备：

4.如权利要求2述的一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，步骤s3和步骤s4之间，还包括混合补料发酵：甘油补料和甲醇补料同时流加，温度为24℃，ph调至5.85。

5.如权利要求2或4所述的一种制备高表达且低o-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，步骤s1和s2中，温度为28℃；步骤s2中，调节ph至5.0。

6.如权利要求5所述的一种制备高表达且低o-糖基化水平...

【专利技术属性】
技术研发人员：项炜，李岫峰，龚国利，
申请(专利权)人：通化安睿特生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：