【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白真核表达，特别涉及一种人工突变的rbsla重组蛋白、表达载体、工程菌株及其培养方法。
技术介绍
1、生物表面活性剂是两亲化合物，由特定的微生物产生。生物表面活性剂分子含有疏水基团(排斥水，如不饱和或饱和碳氢链或脂肪酸)和亲水端(喜欢水，如酸、阳离子或阴离子、肽、单、双或多糖)，在界面上调解表面相互作用。与化学生产的对应物相比，生物表面活性剂有几种潜力。这些优势包括无毒、广泛的发泡活动、生物降解性、生物利用率、生物相容性、生态可接受性、高选择性、环境友好性、在极端环境下的有效性(在广泛的ph值、温度和盐浓度范围内也有活性)以及长的储存时间。这些有利的特性使生物表面活性剂适用于各种应用范围，例如食品、农业、石油工业、化妆品、环境、制药和生物技术过程。最近，生物表面活性剂在天然和无机污染物的修复方面取得了潜在的应用，特别是在化妆品、医药产品和微生物强化采油方面。使用生物表面活性剂还构成了修复受污染土壤和水的新兴技术。生物表面活性剂还被牵涉到碳氢化合物生物修复、纳米技术(介导的金属纳米粒子的生物合成)、医药、商业洗衣粉、食品、纺织品、石油化工和污染控制。
2、目前具有表面活性的rbsla蛋白的体外表达多采用大肠杆菌原核表达系统，且重组蛋白的表达效率及生物表面活性不高，尚未建立真核表达体系以及成熟的发酵工艺。另外，表达的规模为多为实验室摇瓶方法小量制备，尚未有rbsla蛋白或其突变蛋白的发酵工艺及产量的报道。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种人
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、人工突变的rbsla重组蛋白，该蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示，用于构建该蛋白的rbsla核酸序列如seq id no:2所示。
4、本专利技术的第二目的是提供一种含有如seq id no:1所示氨基酸序列的表达载体。
5、作为优选的方案，所述表达载体的质粒骨架为毕赤酵母载体ppic系列、pgap系列或pao815，其由6his序列、sumo序列和rbsla核酸序列串联如seq id no:5克隆至载体所得，表达式为：质粒-6his-sumo-rbsla，表达所得的带his和sumo标签重组的rbsla蛋白氨基酸序列为seq id no:6。
6、本专利技术的第三目的是提供一种毕赤酵母工程菌株，其由上述表达载体经线性化后导入并整合毕赤酵母gs115、km71、smd1168或x33所得。
7、本专利技术还提供了所述工程菌株的培养方法，具体步骤为：
8、接种甘油保存的重组毕赤酵母工程菌株至bmgy培养基，接种量10％，ph 6.0，培养温度25℃-30℃，200-300rpm摇床振荡培养获得重组毕赤酵母种子液；
9、接种10％种子液至发酵培养基，用28％氨水调节发酵培养基ph至6.0；接种10％(v/v)的毕赤酵母种子液后，控制溶氧值在30％以上；当甘油耗尽时，开始以18.15ml/h/l流加50％甘油，同时控制通气和搅拌维持溶氧值在30％，直至菌体湿重140g/l，并开始甲醇诱导至发酵结束。
10、所述甲醇诱导的步骤为：先以7.3ml/h/l的低速流加甲醇使得毕赤酵母工程菌株适应甲醇，2h后提高流加速率至10.9ml/h/l，直至108h作为发酵结束的终点。
11、本申请的有益效果是：将本申请所述的重组蛋白可在毕赤酵母中高效表达，产量达到可发酵生产的规模。
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1.人工突变的rBslA重组蛋白，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，用于构建该蛋白的rBslA核酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.表达载体，其特征在于，含有如权利要求1所述的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的质粒骨架为毕赤酵母载体pPIC系列、pGAP系列或pAO815，其由6His序列、SUMO序列和rBslA核酸序列串联如SEQ IDNO:5克隆至载体所得，表达式为：质粒-6His-SUMO-rBslA，表达所得的带His和SUMO标签重组的rBslA蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO:6。
4.毕赤酵母工程菌株，其特征在于，其由如权利要求3所述表达载体经线性化后导入并整合毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168或X33所得。
5.如权利要求4所述工程菌株的培养方法，其特征在于，步骤为：
6.如权利要求5所述工程菌株的培养方法，其特征在于，所述甲醇诱导的步骤为：先以7.3ml/h/L的低速流加甲醇使得毕赤酵母工程菌株适应甲醇，2h后提高流加速
...【技术特征摘要】
1.人工突变的rbsla重组蛋白，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示，用于构建该蛋白的rbsla核酸序列如seq id no:2所示。
2.表达载体，其特征在于，含有如权利要求1所述的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的质粒骨架为毕赤酵母载体ppic系列、pgap系列或pao815，其由6his序列、sumo序列和rbsla核酸序列串联如seq idno:5克隆至载体所得，表达式为：质粒-6his-sumo-rbsla，表达所得的带his...
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