【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物疫苗分离纯化，具体涉及一种伪狂犬病毒的纯化方法及其应用。
技术介绍
1、伪狂犬病(porcine pseudorabies)是由伪狂犬病毒(pseudorabies virus，prv)引起的发生在多种家畜和野生动物体内的一种急性传染病，以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要发病症状。猪是伪狂犬病的唯一自然宿主，对其危害大。成年猪常表现为隐性感染，妊娠母猪感染后可引起流产、死胎以及呼吸系统疾病症状。新生仔猪感染后除了出现神经症状外，还可侵害消化系统。伪狂犬病给猪养殖业造成了巨大的危害。伪狂犬病目前尚无特效治疗药物，因而以预防为主，通过疫苗的免疫接种是预防和控制猪伪狂犬病的根本措施。要生产伪狂犬病毒疫苗就需要对伪狂犬病毒进行纯化。
2、目前，伪狂犬病毒常用的纯化方法一般在纯化前需做浓缩处理。例如公开号为cn107254449a的中国专利申请公布了一种大规模生产高纯度猪伪狂犬病毒的方法，它是通过连续流离心、中空纤维澄清过滤、超滤浓缩、分子筛纯化工艺相结合，制备用于疫苗的prv浓缩液。然而，伪狂犬病毒在浓缩的过程中容易损伤，超滤步骤会降低病毒的回收率，并且，分子筛层析所需填料体积大、上样量小(不超过10％)，纯化效率非常低。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供弥补现有技术的不足，提供一种伪狂犬病毒的纯化方法及其应用，以减少伪狂犬病毒损伤、增加伪狂犬病毒回收率，缩短纯化周期短，节省生产成本，进而制备出安全性高，均一性好、免疫效果好，猪体副反应小的伪狂犬病毒疫苗。
2、本专利技术提供了一种伪狂犬病毒的纯化方法，包括如下步骤：
3、将未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入装填有lxpm q400m的离子交换柱；
4、采用清洗液对通入伪狂犬病毒粗提液的离子交换柱进行清洗；
5、采用洗脱液对清洗后的离子交换柱进行洗脱，收集柱后洗脱液，得到纯化的伪狂犬病毒液；
6、所述清洗液为含有0.1～0.15mol/l氯化钠的磷酸盐缓冲液，ph值为6.5～7.5；
7、所述洗脱液为含有0.8～1.2mol/l氯化钠的磷酸盐缓冲液，ph值为6.5～7.5。
8、优选的，所述伪狂犬病毒粗提液通入所述的离子交换柱的流速为2～3ml/min；所述伪狂犬病毒粗提液在所述的离子交换柱中保留时间为4～7min。
9、优选的，所述清洗液的流速为2～3ml/min。
10、优选的，所述洗脱液的洗脱流速为2～3ml/min。
11、优选的，所述未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入洗脱柱前，还包括：利用平衡液对装填有lxpm q400m的离子交换柱进行平衡；
12、所述平衡液为含有0.05～0.1mol/l氯化钠的磷酸盐缓冲液，ph值为6.5～7.5。
13、优选的，所述平衡液的上样体积与所述的离子交换柱的体积比为8～10：1。
14、优选的，所述未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入洗脱柱前，还包括：依次利用1～1.2μm的滤芯和0.5～0.65μm的滤芯对所述伪狂犬病毒粗提液进行过滤。
15、优选的，所述伪狂犬病毒粗提液的病毒滴度为107.5tcid50/ml。
16、优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20～50mmol/l。
17、本专利技术还提供了上述技术方案所述纯化方法在制备伪狂犬病毒疫苗中的应用。
18、有益效果：
19、本专利技术以lxpm q400m作为离子交换柱填料对伪狂犬病毒粗提液进行纯化，伪狂犬病毒粗提液无需超滤浓缩即可上样，lxpm q400m具有孔径大，价格低的特点，能够富集伪狂犬病毒，对猪伪狂犬病毒损伤少、杂质去除率在95％左右，病毒回收率可高达100％，对纯化设备要求低、且纯化周期短，极大地节省了生产成本。
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1.一种伪狂犬病毒的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述伪狂犬病毒粗提液通入所述的离子交换柱的流速为2～3ml/min；所述伪狂犬病毒粗提液在所述的离子交换柱中保留时间为4～7min。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述清洗液的流速为2～3ml/min。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述洗脱液的洗脱流速为2～3ml/min。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入洗脱柱前，还包括：利用平衡液对装填有LXPM Q400M的离子交换柱进行平衡；
6.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于，所述平衡液的上样体积与所述的离子交换柱的体积比为8～10：1。
7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入洗脱柱前，还包括：依次利用1～1.2μm的滤芯和0.5～0.65μm的滤芯对所述伪狂犬病毒粗提液进行过滤。
8.根据权利要求1所述的纯化方
9.根据权利要求1～8任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20～50mmol/L。
10.权利要求1～9任一项所述的纯化方法在制备伪狂犬病毒疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种伪狂犬病毒的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述伪狂犬病毒粗提液通入所述的离子交换柱的流速为2～3ml/min；所述伪狂犬病毒粗提液在所述的离子交换柱中保留时间为4～7min。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述清洗液的流速为2～3ml/min。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述洗脱液的洗脱流速为2～3ml/min。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述未经浓缩处理的伪狂犬病毒粗提液通入洗脱柱前，还包括：利用平衡液对装填有lxpm q400m的离子交换柱进行平衡；
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡静雅，周琳，缪芬芳，车巧林，高玉龙，高新乐，沈燕，朱盼盼，
申请(专利权)人：江苏南农高科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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