【技术实现步骤摘要】
本公开涉及抗体领域，更具体而言涉及一种特异性结合cd39的纳米抗体。
技术介绍
1、cd39，也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(entpdase1)，是一种完整的膜蛋白，可将atp或adp转化为amp，然后cd73将amp脱磷酸化为腺苷，腺苷是有效的免疫抑制剂，并与位于cd4、cd8 t细胞和自然杀伤(nk)细胞表面的腺苷受体(例如，a2a受体)结合，并抑制t细胞和nk细胞应答，从而抑制免疫系统。腺苷还与巨噬细胞和树突细胞上的a2a或a2b受体结合，抑制吞噬作用和抗原呈递，并增加促癌因子(例如vegf、tgfb和il-6)的分泌。由cd39和cd73介导的腺苷水平升高会产生免疫抑制环境，从而促进癌症的发生和发展。另外，cd39也作为可溶性酶组成型存在于人和小鼠血液中，并与其他嘌呤能酶一起促进adp的代谢。
2、cd39广泛表达于多种组织器官，如膀胱，脑，乳腺，结肠，子宫，胃，前列腺等，并且主要表达于内皮细胞和免疫细胞。cd39在各种人类肿瘤中均呈现高表达现象，包括淋巴瘤、肉瘤、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、肾细胞癌、甲状腺癌和睾丸癌等。除了上文中提到的效应t细胞、nk细胞外，cd39对免疫系统的调控功能还表现在对巨噬细胞、mdsc、中性粒细胞、调节t细胞、抗原呈递细胞等细胞上。cd39在多数免疫细胞中与免疫抑制、免疫耗竭等相关，而敲除cd39则可以上调免疫因子的分泌、抑制调节t细胞的活性和刺激免疫细胞的功能。
3、鉴于cd39在肿瘤微环境中的扮演的重要角色，它已成为研究人员开发肿瘤免疫疗法的一个新兴靶点。在肿瘤微
技术实现思路
1、相较于传统抗体，在双抗和多特异性抗体设计中，纳米抗体分子量小，单体之间粘性较弱，易于串联，更能丰富双抗和多特异性抗体设计。而且，纳米抗体融合表达，相较于传统抗体有着更好的表达能力。纳米抗体适用于原核表达和各种真核表达系统，大规模生产成本低、周期短。而且，纳米抗体融合表达，相较于传统抗体有着更好的表达能力。
2、针对上述诸问题，本公开提供了可特异性结合cd39，并可抑制可溶性及细胞膜表面cd39酶活的纳米抗体、其制备方法、组合物等。本公开提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域，并且能够与各种靶标反应的抗体联合使用。
3、一方面，本专利技术提供了一种特异性结合cd39的纳米抗体，其中包括cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1、cdr2和cdr3选自以下任意组合：
4、(1)seq id no：15所示的cdr1，seq id no：21所示的cdr2，和seq id no：27所示的cdr3；
5、(2)seq id no：15所示的cdr1，seq id no：22所示的cdr2，和seq id no：27所示的cdr3；
6、(3)seq id no：16所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：28所示的cdr3；
7、(4)seq id no：17所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：29所示的cdr3；
8、(5)seq id no：18所示的cdr1，seq id no：24所示的cdr2，和seq id no：29所示的cdr3；
9、(6)seq id no：18所示的cdr1，seq id no：25所示的cdr2，和seq id no：29所示的cdr3；
10、(7)seq id no：19所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：30所示的cdr3；
11、(8)seq id no：20所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：29所示的cdr3；
12、(9)seq id no：19所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：28所示的cdr3；
13、(10)seq id no：19所示的cdr1，seq id no：26所示的cdr2，和seq id no：28所示的cdr3；
14、(11)seq id no：19所示的cdr1，seq id no：23所示的cdr2，和seq id no：31所示的cdr3。
15、进一步，在本专利技术的一些实施方案中，所述的纳米抗体，其中包含与seq id no：1-14之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由seq idno：1-14之一组成。
16、进一步，在本专利技术的一些实施方案中，所述的纳米抗体，其包括两个或多个结合结构域，所述两个或多个结合结构域具有相同或不同的氨基酸序列。
17、进一步，在本专利技术的一些实施方案中，提供了一种抗cd39抗体，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由上述的抗cd39的纳米抗体构成；优选地，所述功能性片段为所述传统抗体的fab、fab’、(fab’)2、fv、scfv或sdfv结构。
18、在一些实施方案中，所述cd39抗体，其为重链抗体、vhh-fc融合蛋白、单价抗体、双价抗体、多价抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、免疫偶联物。
19、传统抗体在结构上由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，轻链具有轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)；重链具有重链可变区(vh)和重链恒定区(ch1，ch2，ch3和/或ch4)。在本专利技术公开了具有能够特异性结合cd39的纳米抗体的结构前提下，本领域技术人员容易想到利用本专利技术的纳米抗体对传统抗体以改造，例如将本专利技术纳米抗体的cdr区结构应用到传统抗体上，以获得可以特异性结合cd39的传统抗体，这类传统抗体也是属于本专利技术的保护范围；进一步地，基于传统抗体的结构，其部分结构例如fab、fab’、(fab’)2、fv、scfv或sdfv结构等也是具有cd39结合特异性的，这也是属于本专利技术的保护范围。
20、另一方面，所述的纳米抗体、所述的抗体，其在抑制可溶性cd39酶活和抑制细胞膜表面cd39酶活的药物中的应用。
21、另一方面，本专利技术提供一种组合物，其包含上述的纳米抗体、上述的抗体；以及可选的药学上可接受的辅料。
22、另一方面，本专利技术提供一种多核苷酸，其编码上述的纳米抗体、上述的抗体。
23、基于本专利技术公开的内容，本领域技术人员通过本领域常规技术容易获得编码上述纳米抗体以及融合蛋白的多核苷酸分子，并基于密码子的简并性，该多核苷酸分子是多变的，其具体的碱基序列存在多种可能性，基于此，无论其多核苷酸分子如何变化，只要其能够编码本专利技术的纳米抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合CD39的纳米抗体，其中包括CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1、CDR2和CDR3选自以下任意组合：
2.如权利要求1所述的纳米抗体，其中包含与SEQ ID NO：1-14之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：1-14之一组成。
3.如上述权利要求中任一项所述的纳米抗体，其中包括两个或多个结合结构域，所述两个或多个结合结构域具有相同或不同的氨基酸序列。
4.一种抗CD39抗体，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由权利要求1-3任一项所述的抗CD39的纳米抗体构成；优选地，所述功能性片段为所述传统抗体的Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv、scFv或sdFv结构。
5.如权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体、权利要求4所述的抗体，其在抑制可溶性CD39酶活和抑制细胞膜表面CD39酶活的药物中的应用。
6.一种组合物
7.一种多核苷酸，其编码权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体、权利要求4所述的抗体。
8.一种核酸构建体，其中包含权利要求7所述的多核苷酸。
9.宿主细胞，其中包含权利要求7所述的多核苷酸或权利要求8所述的核酸构建体。
10.权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体、权利要求4所述的抗体在制备药物和/或延长药物半衰期中的应用，所述药物用于预防、治疗和/或改善与CD39表达相关的疾病。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合cd39的纳米抗体，其中包括cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1、cdr2和cdr3选自以下任意组合：
2.如权利要求1所述的纳米抗体，其中包含与seq id no：1-14之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由seq id no：1-14之一组成。
3.如上述权利要求中任一项所述的纳米抗体，其中包括两个或多个结合结构域，所述两个或多个结合结构域具有相同或不同的氨基酸序列。
4.一种抗cd39抗体，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由权利要求1-3任一项所述的抗cd39的纳米抗体构成；优选地，所述功能性片段为所述传统抗体的fab、fa...
【专利技术属性】
技术研发人员：董洁娴，陈翠娟，洪坡，王蒙，黄丽玫，白贵荣，周祥山，黄庆，李宗晏，
申请(专利权)人：华润生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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