【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于石油污染土壤修复，具体涉及一种石油污染土壤修复剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、随着我国工业化进程不断加快，作为一种重要的工业原料，石油的需求量日益增加，而在石油勘探、开采、冶炼、加工、贮藏以及制品运输和使用等各个环节，不可避免地出现泄露，对土壤造成污染，石油烃已经成为目前除了农药之外土壤环境中普遍存在的一类有机污染物。微生物修复技术因具有成本低、操作简单、对环境影响小、以及不产生二次污染等优势，在石油污染修复中受到广泛关注。
2、投加高效外源菌种进行修复的生物强化技术是微生物修复技术重要组成部分。但由于石油烃是由直链烷烃、环烷烃、支链烷烃、芳香烃、苯系物、烯烃和杂原子化合物等组成的复杂混合物，而且土壤作为石油烃的最终承纳体，污染物在系统内的分布不均匀，从而使得外源菌容易受到修复场地复杂性的冲击，修复能力无法达到预期目标。
3、cn200710119860.7公开了一种生物质强化石油污染土壤的原位生物修复方法。该方法利用添加了生物质降解菌的生物质来促进污染土壤中生物质的转化。利用生物质在土壤中转化的中间产物作为石油烃降解复合菌剂的优先碳源，促进石油烃降解复合菌剂的生物积累；同时施加的石油烃降解复合菌剂中含有可高效产生生物表面活性剂的菌，该菌在生长的同时产生大量的生物表面活性剂，活化污染土壤中的石油烃污染物，提高其生物可利用度，促进了石油烃降解复合菌剂对污染物的生物转化效率。生物质在土壤中的转化产物腐殖质又可以改善土壤的团粒结构、增加土壤的肥力，使得污染土壤得以修复。
4、cn
5、cn202111507356.0公开了一种促进原油降解的石油类土壤污染修复工艺，涉及土壤修复
该专利技术的石油类土壤污染修复工艺，区域划分后进行取样检测能够同时钻取不同区域不同深度土壤进行石油烃含量的检测，便于适应性地进行修复剂和降解菌液的施用，避免修复剂和降解菌液的用量不合理；负压抽提净化能够对土壤内的挥发性气体及油水混合物进行吸附、过滤净化；降解菌液降解和土壤修复剂修复工序根据不同区域不同深度土壤的石油烃含量，调节降解菌液和土壤修复剂的添加量。
6、上述专利是通过微生物之间的生态合作和代谢互补，以及与工艺或者外源化合物的结合进而提高对石油污染土壤中石油烃的降解效果，但是成分较为复杂。因而，获得更多种类高性能的石油烃降解菌或降解菌剂，对于石油污染土壤的修复具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种石油污染土壤修复剂及其制备方法和应用。本专利技术提供的修复剂主要包括能高效降解石油烃的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6，在用于石油污染土壤修复时，具有良好的石油烃降解效果。
2、一种石油污染土壤修复剂的制备方法，包括如下内容：
3、将保藏的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6接种至lb培养基，好氧条件下培养至稳定期，再转接至发酵培养基中，好氧条件下培养至od660达到0.8以上，优选0.9-1.2，收集培养液即为修复剂；其中发酵培养基是在lb培养基中加入葡萄糖和联苯。
4、本专利技术方法中，所述的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：cgmcc no. 25181；保藏日期：2022年06月27日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
5、本专利技术方法中，所述发酵培养基中，葡萄糖的加入量为1-5g/l。
6、本专利技术方法中，所述发酵培养基中，联苯的加入量为50-300mg/l。
7、本专利技术方法中，所述保藏的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6可以为斜面保藏、低温冷冻保藏和冻干保藏的菌体。
8、本专利技术方法中，所述转接至发酵培养基的接种量为发酵培养基体积的1%-10%，优选5%-10%。
9、本专利技术方法中，培养条件为：ph为7.0-7.5，温度为20-35℃，溶解氧浓度为0.25-2.0mg/l。
10、本专利技术方法中，在发酵培养过程中培养48h后，如果od660仍然不能达到0.8以上，则再次转接至新鲜发酵培养基中培养，直至od660≥0.8，再次转接的接种量较第一次转接减少30%-80%。
11、本专利技术所述的石油污染土壤修复剂是采用上述本专利技术方法制备的。所获得的修复剂中，皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6的含量1012-1016cfu/ml，联苯的含量为不高于150mg/l。
12、本专利技术还提供了所制备的石油污染土壤修复剂的应用，用于受石油污染土壤的修复，向土壤表面喷洒修复剂，进行翻耕，翻耕深度为20-50cm，每隔7-15天喷洒一次。
13、本专利技术应用中，修复剂用量按照喷洒后皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6的添加量为1012-1018cfu/m2进行施加。
14、本专利技术应用中，在喷洒修复剂的同时，施加一定量的水分，保持土壤含水量为25%-70%。修复过程中维持污染土壤中c:n:p的比例在100:2-15:0.5-1，若不满足此条件，则添加氮源或者磷源。
15、本专利技术应用中，石油污染土壤主要是受原油、汽油、柴油、煤油、润滑油等中至少一种油品污染的土壤，其中污染物一般是直链烷烃、环烷烃、支链烷烃、芳香烃、苯系物、烯烃等，其中石油烃浓度在500-30000mg/kg。
16、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
17、（1）本专利技术利用选育的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6制备石油污染土壤修复剂，该菌株能够高效降解石油烃，实现石油污染土壤的高效修复。
18、（2）制备修复剂时，在皮特不动杆菌pa6发酵培养过程中添加葡萄糖和联苯，刺激菌株生成多种降解酶，通过菌体和发酵本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种石油污染土壤修复剂的制备方法，其特征在于包括如下内容：将保藏的皮特不动杆菌（Acinetobacter pittii）PA6接种至LB培养基，好氧条件下培养至稳定期，再转接至发酵培养基中，好氧条件下培养至OD660达到0.8以上，优选0.9-1.2，收集培养液即为修复剂；其中发酵培养基是在LB培养基中加入葡萄糖和联苯。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的皮特不动杆菌（Acinetobacter pittii）PA6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：CGMCCNo. 25181；保藏日期：2022年06月27日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基中，葡萄糖的加入量为1-5g/L。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基中，联苯的加入量为50-300mg/L。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述保藏的皮特不动杆菌（Acinetobacter pitti
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述转接至发酵培养基的接种量为发酵培养基体积的1%-10%，优选5%-10%。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：培养条件为：pH为7.0-7.5，温度为20-35℃，溶解氧浓度为0.25-2.0mg/L。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在发酵培养过程中培养48h后，如果OD660仍然不能达到0.8以上，则再次转接至新鲜发酵培养基中培养，直至OD660≥0.8，再次转接的接种量较第一次转接减少30%-80%。
9.一种石油污染土壤修复剂，其特征在于是采用权利要求1-8任意一项所述方法制备的。
10.根据权利要求9所述的修复剂中，其特征在于：皮特不动杆菌（Acinetobacter pittii）PA6的含量为1012-1016CFU/mL，联苯的含量为5-150mg/L。
11.一种权利要求9或10所述石油污染土壤修复剂的应用，其特征在于：用于受石油污染土壤的修复，向土壤表面喷洒修复剂，进行翻耕，翻耕深度为20-50cm，每隔7-15天喷洒一次。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：修复剂用量按照喷洒后皮特不动杆菌（Acinetobacter pittii）PA6的添加量为1012-1018CFU/m2进行施加。
13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：在喷洒修复剂的同时，施加一定量的水分，保持土壤含水量为25%-70%。
14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：修复过程中维持污染土壤中C:N:P的比例在100:2-15:0.5-1，若不满足此条件，则添加氮源或者磷源。
15.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：石油污染土壤主要是受原油、汽油、柴油、煤油、润滑油中至少一种油品污染的土壤，其中污染物是直链烷烃、环烷烃、支链烷烃、芳香烃、苯系物、烯烃等，其中石油烃浓度在500-30000mg/kg。
...【技术特征摘要】
1.一种石油污染土壤修复剂的制备方法，其特征在于包括如下内容：将保藏的皮特不动杆菌（acinetobacter pittii）pa6接种至lb培养基，好氧条件下培养至稳定期，再转接至发酵培养基中，好氧条件下培养至od660达到0.8以上，优选0.9-1.2，收集培养液即为修复剂；其中发酵培养基是在lb培养基中加入葡萄糖和联苯。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的皮特不动杆菌（acinetobacter pittii）pa6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：cgmccno. 25181；保藏日期：2022年06月27日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基中，葡萄糖的加入量为1-5g/l。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基中，联苯的加入量为50-300mg/l。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述保藏的皮特不动杆菌（acinetobacter pittii）pa6为斜面保藏、低温冷冻保藏或冻干保藏的菌体。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述转接至发酵培养基的接种量为发酵培养基体积的1%-10%，优选5%-10%。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：培养条件为：ph为7.0-7.5，温度为20-35℃，溶解氧浓度为0.25-2.0mg/l。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈明翔，孙丹凤，高会杰，王山榕，王刚，徐佰青，王永剑，
申请(专利权)人：中国石油化工股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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