【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种用于树突状细胞的引物组、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、树突状细胞是t细胞成熟的关键启动者，是肿瘤免疫治疗的新兴力量，体外恢复肿瘤患者树突状细胞功能，可增强肿瘤特异性t细胞免疫效应。
2、制备自体肿瘤多信号活化树突状细胞的过程包括分离患者外周血单核细胞分离、扩增dcs、肿瘤抗原刺激树突状细胞活化，并再次与患者pbmc共培养，使之成为肿瘤特异性的ctls和htls，从外周静脉回输给患者。因为整个制备过程均为体外操作，可能受到细菌污染，所以在回输给患者之前需要进行微生物学检测确保安全，另外，抗原特异性树突状细胞整个的体外培养诱导过程约14天，在回输之前也需要刮取部分细胞进行检测以确认表型。
3、为了达到上述质量控制目的，确保树突状细胞回输的安全性及有效性，现有的方法为逐项检测，在细胞培养过程中分别进行细菌、真菌培养，刮取大量培养瓶中的树突状细胞进行流式表型检测，然而这些方法费时、繁琐，且容易损伤并损失所培养的树突状细胞。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种用于树突状细胞的引物组，采用该引物组能够简单、有效地对体外培养至成熟、活化的树突状细胞进行检测，从而对其培养情况进行质控，采用该引物组进行检测不仅具有高灵敏性、特异性，还能减少树突状细胞的损伤和损失。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种用于树突状细胞的引物组，包括：病原体引物组、树突状细胞表型引物组、hla-dr引物组、血红蛋白亚基β引物组中
3、所述病原体引物组的扩增目标序列选自：n-乙酰胞壁酸和/或1-3-β-d-葡聚糖的序列。
4、在其中一个实施例中，所述病原体引物组包括细菌引物组和/或真菌引物组；
5、所述细菌引物组包括：
6、上游引物：acggagatgcaaaatcccca(seq id no:1)；
7、下游引物：agcagtttggcgtaccgtaa(seq id no:2)；
8、探针：5’-acttgccctccactcgatcctcgtacaa-3’(seq id no:3)；
9、所述真菌引物组包括：
10、上游引物：ccgtagtagtccatgtccgc(seq id no:4)；
11、下游引物：ccttgaacggtctccaggac(seq id no:5)；
12、探针：5’-acttgccctccactcgatcctcgtacaa-3’(seq id no:6)。
13、在其中一个实施例中，所述病原体引物组的探针的5’端修饰有荧光基团，所述荧光基团为fam；所述病原体引物组的探针的3’端修饰有淬灭基团，所述淬灭基团为bhq1。
14、上述病原体引物组用于检测树突状细胞培养体系有无病原体污染。
15、在其中一个实施例中，所述树突状细胞表型引物组包括：cd3引物组、cd14引物组、cd19引物组、cd20引物组、cd56引物组中的至少1种；
16、所述cd3引物组包括：
17、上游引物：tcccttccctaagcggctat(seq id no:7)；
18、下游引物：ccaataggtggcgcttctga(seq id no:8)；
19、探针：5’-actaataggtgctcgatcctcgtacaa-3’(seq id no:9)；
20、所述cd14引物组包括：
21、上游引物：acgccagaaccttgtgagc(seq id no:10)；
22、下游引物：gcatggatctccacctctactg(seq id no:11)；
23、探针：5’-actggatctccaccgatcctcgtacaa-3’(seq id no:12)；
24、所述cd19引物组包括：
25、上游引物：ggcccgaggaacctctagt(seq id no:13)；
26、下游引物：taagaagggtttaagcgggga(seq id no:14)；
27、探针：5’-actcccgaggactcgatcctcgtacaa-3’(seq id no:15)；
28、所述cd20引物组包括：
29、上游引物：ccggcagagccaatgaaag(seq id no:16)；
30、下游引物：cagatgggtgcatagatccct(seq id no:17)；
31、探针：5’-acttcagagccaaccaatcctcgtacaa-3’(seq id no:18)；
32、所述cd56引物组包括：
33、上游引物：ggcatttacaagtgtgtggttac(seq id no:19)；
34、下游引物：ttggcgcattcttgaacatga(seq id no:20)；
35、探针：5’-acttgcccttcttgaacctcgtacaa-3’(seq id no:21)。
36、在其中一个实施例中，所述树突状细胞表型引物组的探针的5’端修饰有荧光基团，所述荧光基团为rox/red610；所述树突状细胞表型引物组的探针的3’端修饰有淬灭基团，所述淬灭基团为bhq2。
37、上述树突状细胞表型引物组用于检测树突状细胞表型的阴性标志物，进而明确树突状细胞的表型。
38、在其中一个实施例中，所述hla-dr引物组包括：
39、上游引物：agtccctgtgctaggatttttca(seq id no:22)；
40、下游引物：acataaactcgcctgattggtc(seq id no:23)；
41、探针：5’-actactcgcctgattggatcctcgtacaa-3’(seq id no:24)。
42、在其中一个实施例中，所述hla-dr引物组的探针的5’端修饰有荧光基团，所述荧光基团为cy5；所述hla-dr引物组的探针的3’端修饰有淬灭基团，所述淬灭基团为bhq3。
43、上述hla-dr引物组为阳性内标。
44、在其中一个实施例中，所述血红蛋白亚基β引物组包括：
45、上游引物：aggagaagtctgccgttactg(seq id no:25)；
46、下游引物：ccgagcactttcttgccatga(seq id no:26)；
47、探针：5’-acttgccctccaactcgcctgattgcaa-3’(seq id no:27)。
48、在其中一个实施例中，所述血红蛋白亚基β引物组的探针的5’端修饰有荧光基团，所述荧光基团为hex本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于树突状细胞的引物组，其特征在于，包括：病原体引物组、树突状细胞表型引物组、HLA-DR引物组、血红蛋白亚基β引物组中的至少1个；
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述病原体引物组包括细菌引物组和/或真菌引物组；
3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述树突状细胞表型引物组包括：CD3引物组、CD14引物组、CD19引物组、CD20引物组、CD56引物组中的至少1种；
4.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述HLA-DR引物组包括：
5.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述血红蛋白亚基β引物组包括：
6.权利要求1-5中任一项所述的引物组在制备用于树突状细胞质控试剂盒中的应用。
7.一种用于树突状细胞质控的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括多重荧光定量PCR反应体系，所述多重荧光定量PCR包括权利要求1-5中任一项所述的引物组。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组的工作浓度为50μM。
9.一种树突状细胞的质控方法，其特征
10.根据权利要求9所述的质控方法，其特征在于，所述多重荧光定量PCR反应的条件包括：95℃预变性5min，95℃变形10s，60℃退火30s，共45个循环。
...【技术特征摘要】
1.一种用于树突状细胞的引物组，其特征在于，包括：病原体引物组、树突状细胞表型引物组、hla-dr引物组、血红蛋白亚基β引物组中的至少1个；
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述病原体引物组包括细菌引物组和/或真菌引物组；
3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述树突状细胞表型引物组包括：cd3引物组、cd14引物组、cd19引物组、cd20引物组、cd56引物组中的至少1种；
4.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述hla-dr引物组包括：
5.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述血红蛋白亚基β引物组包括：
6.权利要求1-5中任一项所述的引物组在制备用于树突状细胞质控试...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾玉荣，毕燕华，黄泽旋，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院，
类型：发明
国别省市：
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