【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种基于lc-ms测定一种包含地黄的中药组合物中6种成分含量的方法及应用。
技术介绍
1、液质联用(lc-ms)又叫液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。近年来，lc-ms在技术及应用方面取得了很大进展，在环境、医药研究的各领域中应用越来越广泛。中药及中药复方中存在物质成分复杂、成分含量差异大等特点，而lc-ms技术具有快速、高分辨、高灵敏等优点，被广泛应用于中药成分的定量分析中，这为同时检测包含地黄的中药组合物中的特征性成分的含量测定提供了可行性。
2、目前有关包含地黄的中药组合物的检测方法较少，且检测方法为hplc法，这些方法测定时间较长且检测灵敏度较低，且所检测的指标为阿魏酸和香草酸等共有性成分，缺少对所含药材的特征性成分进行质控。因此本专利技术提供了一种基于lc-ms测定一种包含地黄的中药组合物中6种特征性成分含量的检测方法。
3、现有技术未见本专利技术所要求保护的一种基于lc-ms测定一种包含地黄的中药组合物中6种成分含量的方法及应用。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供了一种基于lc-ms测定一种包含地黄的中药组合物中6种成分含量的方法，该方法包括如下步骤：
2、(1)混合对照品溶液的制备：制备甜菜碱、地黄苷d、川楝素、麦冬皂苷d、麦冬甲基黄烷酮a和麦冬甲基黄烷b的混合对照品溶液；
3、(2)供试品溶液的制备：称取适量的北沙参、麦冬、当归、地黄、枸杞子和川楝子，
4、(3)阴性样品溶液的制备：制备地黄、枸杞子、麦冬和川楝子的阴性样品溶液；以及
5、(4)基于lc-ms测定该混合对照品溶液、加入内标的该供试品溶液和加入内标的该阴性样品溶液，获得该中药组合物中6种成分的含量信息。
6、进一步地，该信息为以各对照品的峰面积(y)与其相应的质量浓度(x)绘制标准曲线，根据所记录的该供试品溶液的色谱图和该混合对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，计算该中药组合物中6种成分的含量。
7、进一步地，该中药组合物中6种成分为甜菜碱、地黄苷d、川楝素、麦冬皂苷d、麦冬甲基黄烷酮a和麦冬甲基黄烷b。
8、进一步地，该地黄为生地黄。
9、进一步地，在步骤(1)中，该混合对照品溶液的制备方法包括：称取适量的甜菜碱、地黄苷d、川楝素、麦冬皂苷d、麦冬甲基黄烷酮a和麦冬甲基黄烷b对照品，分别添加甲醇配制甜菜碱对照品储备液、地黄苷d对照品储备液、川楝素对照品储备液、麦冬皂苷d对照品储备液、麦冬甲基黄烷酮a对照品储备液和麦冬甲基黄烷b对照品储备液；分别吸取适量的该甜菜碱对照品储备液、该地黄苷d对照品储备液、该川楝素对照品储备液、该麦冬皂苷d对照品储备液、该麦冬甲基黄烷酮a对照品储备液和该麦冬甲基黄烷b对照品储备液至同一容量瓶中，混匀，得到该混合对照品溶液。
10、进一步地，该甜菜碱对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.018mg/ml。
11、进一步地，该地黄苷d对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.027mg/ml。
12、进一步地，该川楝素对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.009mg/ml。
13、进一步地，该麦冬皂苷d对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.025mg/ml。
14、进一步地，该麦冬甲基黄烷酮a对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.006mg/ml。
15、进一步地，该麦冬甲基黄烷b对照品储备液的质量浓度为0.8～1.2mg/ml，例如约1.016mg/ml。
16、进一步地，在步骤(2)中，该北沙参、该麦冬、该当归、该地黄、该枸杞子和该川楝子的质量之和与该水之间的质量/体积(g/ml)之比值为0.1～0.3，例如约0.166。
17、进一步地，该北沙参、该麦冬、该当归、该地黄、该枸杞子和该川楝子之间的质量之比为(0.5～1.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5):(1.5～2.5):(1.5～2.5):(1～2)。
18、进一步地，该北沙参、该麦冬、该当归、该地黄、该枸杞子和该川楝子之间的质量之比为约1:约1:约1:约2:约2:约1.3。
19、进一步地，该北沙参为伞形科珊瑚菜属植物珊瑚菜g.littoralisfr.schmidt exmiq.的干燥根。
20、进一步地，该麦冬为百合科植物麦冬ophiopogon japonicus(l.f)ker-gawl.的干燥块根。
21、进一步地，该当归为伞形科植物当归angelica sinensis(oliv.)diels.的干燥根。
22、进一步地，该地黄为玄参科植物地黄rehmannia glutinosa libosch.的新鲜或干燥块根。
23、进一步地，该枸杞子为茄科植物宁夏枸杞lycium barbarum l.的干燥成熟果实。
24、进一步地，该川楝子为楝科植物川楝melia toosendan sieb.et zucc.的干燥成熟果实。
25、进一步地，该北沙参为过筛(例如4号筛)之后的北沙参粉末。
26、进一步地，该麦冬为过筛(例如5号筛)之后的麦冬粉末。
27、进一步地，该当归为过筛(例如3号筛)之后的当归粉末。
28、进一步地，该地黄为过筛(例如2号筛)之后的地黄粉末。
29、进一步地，该枸杞子为过筛(例如2号筛)之后的枸杞子粉末。
30、进一步地，该川楝子为过筛(例如4号筛)之后的川楝子粉末。
31、进一步地，该浸泡的时间为10～60min，例如约30min。
32、进一步地，该提取为回流提取、冷浸提取、振摇提取和/或超声提取，进一步为回流提取。
33、进一步地，该回流提取的时间为30～90min，例如约60min。
34、进一步地，该离心的转速为3000～9000r/min，例如约6000r/min。
35、进一步地，该离心的时间为5～20min，例如约10min。
36、进一步地，该稀释的倍数为2～600倍，例如5倍或500倍。
37、进一步地，该内标为柳胺酚。
38、进一步地，该内标的质量为300～800ng，例如约500ng。
39、进一步地，该过滤的滤膜孔径为0.22μm。
40、进一步地，在步骤(3)中，地黄阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少生地黄的中药组合物，之后的步骤与该供试品溶液的制备方法相同。
41、进一步地，枸杞子阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少枸杞子的中药本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于LC-MS测定一种包含地黄的中药组合物中6种成分含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述信息为以各对照品的峰面积(y)与其相应的质量浓度(x)绘制标准曲线，根据所记录的所述供试品溶液的色谱图和所述混合对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，计算所述中药组合物中6种成分的含量；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述混合对照品溶液的制备方法包括：称取适量的甜菜碱、地黄苷D、川楝素、麦冬皂苷D、麦冬甲基黄烷酮A和麦冬甲基黄烷B对照品，分别添加甲醇配制甜菜碱对照品储备液、地黄苷D对照品储备液、川楝素对照品储备液、麦冬皂苷D对照品储备液、麦冬甲基黄烷酮A对照品储备液和麦冬甲基黄烷B对照品储备液；分别吸取适量的所述甜菜碱对照品储备液、所述地黄苷D对照品储备液、所述川楝素对照品储备液、所述麦冬皂苷D对照品储备液、所述麦冬甲基黄烷酮A对照品储备液和所述麦冬甲基黄烷B对照品储备液至同一容量瓶中，混匀，得到所述混合对照品溶液；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，地黄阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少生地黄的中药组合物，之后的步骤与所述供试品溶液的制备方法相同；
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述LC-MS的色谱条件：采用高压液相系统和填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相A选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相B为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，梯度洗脱程序为：0～1min，5％A；1～1.5min，5％→40％A；1.5～3.0min，40％A；3.0～5.0min，40％→70％A；5.0～7.0min，70％A；7.0～9.5min，90％→95％A；9.5～11.0min，5％A，流速为0.1～0.5ml/min，柱温为30～50℃，进样量为1～5μl；
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述LC-MS的色谱条件中，所述高压液相系统为Dionex Ultimate 3000高压液相系统；
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述LC-MS的质谱条件中，所述正离子模式：鞘气(N2)流量35arb，喷雾电压3.5kV；
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甜菜碱的标准曲线为y＝11.447x+1.0997，r2＝0.9978；
10.权利要求1至9中任一项所述的方法在包含地黄的中药组合物中的质量检测和/或质量评价和/或质量控制中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种基于lc-ms测定一种包含地黄的中药组合物中6种成分含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述信息为以各对照品的峰面积(y)与其相应的质量浓度(x)绘制标准曲线，根据所记录的所述供试品溶液的色谱图和所述混合对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，计算所述中药组合物中6种成分的含量；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述混合对照品溶液的制备方法包括：称取适量的甜菜碱、地黄苷d、川楝素、麦冬皂苷d、麦冬甲基黄烷酮a和麦冬甲基黄烷b对照品，分别添加甲醇配制甜菜碱对照品储备液、地黄苷d对照品储备液、川楝素对照品储备液、麦冬皂苷d对照品储备液、麦冬甲基黄烷酮a对照品储备液和麦冬甲基黄烷b对照品储备液；分别吸取适量的所述甜菜碱对照品储备液、所述地黄苷d对照品储备液、所述川楝素对照品储备液、所述麦冬皂苷d对照品储备液、所述麦冬甲基黄烷酮a对照品储备液和所述麦冬甲基黄烷b对照品储备液至同一容量瓶中，混匀，得到所述混合对照品溶液；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述北沙参、所述麦冬、所述当归、所述地黄、所述枸杞子和所述川楝子的质量之和与所述水之间的质量/体积(g/ml)之比值为0.1～0.3，例如约0.166；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，地黄阴性样...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，王长虹，程雪梅，李师仰，潘一峰，林超颖，方勤勤，
申请(专利权)人：上海黄海制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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