【技术实现步骤摘要】
一种测定组织中扶正化瘀制剂苦杏仁苷和野黒樱苷浓度的方法
[0001]本专利技术涉及生物样品色谱检测
,尤其涉及一种采用UHPLC
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MS/MS法测定哺乳动物组织中扶正化瘀制剂苦杏仁苷和野黒樱苷的测定方法。
技术介绍
[0002]慢性肝病病程长,病情复杂,但从中医上来说主要是机体感染疫毒,引起正邪相搏,如正气虚则不能祛邪,至病情缠绵久致顽疾,其基本病机为正虚邪实、虚实共存。正虚主要是气阴两虚,而邪实则为蕴热化湿,血瘀络阻,气阴两虚、湿热疫毒内留。从西医角度来说肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时,肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程。慢性肝病绝大多数都有肝纤维化,肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征,肝纤维化与肝硬化既有联系又有区别,从病理上看,仅有弥漫性肝纤维沉积增加称肝纤维化,而弥漫性肝纤维化同时伴有肝小叶结构被破坏则为肝硬化。从发病学看,肝纤维化是肝硬化的前期病变、是可逆的、而肝硬化是肝纤维化进一步发展的结果。从临床观察看,肝纤维化和肝硬化是连续的发展过程,肝纤维化一般不致肝功能障碍,但可有门静脉高压。肝纤维化是肝损伤后的修复过程,引起肝脏细胞外基质(ECM)和量的改变。
[0003]肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化所必经的病理过程,寻找阻止、延缓甚至逆转肝纤维化的药物,是肝病研究急待解决的问题。长期以来,中医药在抗肝纤维化方面发挥着重要的作用。中医认为,肝纤维化既有瘀滞的一面,也有正气虚损的一面,扶正化瘀是重要的治疗原则。扶正化瘀胶囊(片剂)正是针对慢性肝炎肝纤维化、肝硬化的“ ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种测定组织中扶正化瘀制剂苦杏仁苷和/或野黒樱苷浓度的方法,所述方法包括以下步骤:(1)待测组织样本预处理,获取待测液;(2)苦杏仁苷和/或野黒樱苷标准曲线制备;以及(3)液相色谱
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质谱联用检测所述待测液中苦杏仁苷和/或野黒樱苷浓度,其中,所述液相色谱
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质谱联用的色谱条件为:色谱柱:AcquityHSS T3柱(2.1mm
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100mm,1.8μm),流动相:水相(A)为酸水溶液,有机相(B)为甲醇或乙腈;洗脱方式:采用以下梯度程序洗脱:1
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19min 70
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5%A;15
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19min,5%A;19.01min,95%A;19.01
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22min,95%A;其中,所述液相色谱
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质谱联用的质谱条件为:电喷雾离子源(ESI),采用负离子模式检测,质量扫描范围m/z 200
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500。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述待测组织样本为哺乳动物的心、肝、脾或肾;优选地,所述哺乳动物为大鼠、小鼠或犬。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述预处理包括以下步骤:(1)给予所述扶正化瘀制剂后,分别于不同时间点将哺乳动物处死,分离所述组织样本,放入生理盐水中漂洗以除去血液,滤纸拭干;以及(2)称取所述组织样本,剪碎,置于离心管中,加入第一溶剂溶解,匀浆再离心,得到所述待测液;优选地,所述第一溶剂选自水、C1~C4的醇、二醇、乙腈中的一种或多种;更优选地,所述第一溶剂为甲醇。4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述不同时间点为15min、30min、120min和360min;优选地,所述离心的条件为8,000~12,000rpm,4℃条件下离心10~15min;优选地,所述组织样品的重量为600~1000mg;优选地,所述第一溶剂的体积为300~1500μl;尤其优选地,所述匀浆的条件为65~80HZ,30s至2min,3~5次;特别优选地,所述待测液的体积为50~100μl。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述离心的条件为12,000rpm,4℃条件下离心15min,所述组织样品的重量为600mg,所述第一溶剂的体积为1000μl,所述匀浆的条件为65HZ,60s,3次,所述待测液的体积为100μl。6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述标准曲线制备包括以下步骤:(1)分别称量适量的苦杏仁苷、野黒樱苷和柳胺酚,用甲醇溶解得到1mg/mL的苦杏仁苷母液,1mg/mL的野黒樱苷...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨涛,韦娜,王玉琳,胡叶青,付庆帅,李荣胜,
申请(专利权)人:上海黄海制药有限责任公司,
类型:发明
国别省市:
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