【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶的基因工程，具体地说涉及利用分子生物学技术获得一种催化活力显著提高的酰胺键合成酶突变体及其大肠杆菌重组表达制备方法和应用。
技术介绍
1、酰胺键合成酶(amide bond synthetase)隶属于酰胺连接酶(ligase，ec 6.3)超家族，其通过消耗atp使带羧基化合物腺苷酸化，进一步由带氨基化合物作为亲核试剂攻击腺苷酸中间体形成酰胺键，从而合成酰胺类化合物。该酶反应过程无需添加辅酶，且酰胺键合成酶可识别的羧酸及氨基底物较为广泛，已被成功应用于吗氯贝胺等重要酰胺类药物化合物的合成。进一步地，针对酰胺键合成酶反应过程中atp价格昂贵的问题，目前已经开发出atp自循环生成系统，成功解决atp再生的问题，有效降低催化反应的成本，为实现该酶的产业化奠定了重要基础。然而，目前，已报道的酰胺键合成酶仍较少且酶活力普遍较低(med.chem.commun.,2019,10,1192；angew.chem.int.ed.2018,57,11584–11588)，因此开发酶活更高稳定性更强的酰胺键合成酶对指导酰胺化合物的高效合成
【技术保护点】
1.一种来源于生脂固氮螺菌的酰胺键合成酶突变体，其特征在于，所述的突变体在如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列基础上，至少经过如下任意一种氨基酸突变或组合突变得到Y187R、T421V、P328A-Y187R、C320A-Y187R、C320S-Y187R以及C320G-Y187R。
2.根据权利要求1所述突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3-8。
3.一种编码权利要求1或2所述酰胺键合成酶突变体的基因。
4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO.9-14。
<...【技术特征摘要】
1.一种来源于生脂固氮螺菌的酰胺键合成酶突变体，其特征在于，所述的突变体在如seq id no.1所示氨基酸序列基础上，至少经过如下任意一种氨基酸突变或组合突变得到y187r、t421v、p328a-y187r、c320a-y187r、c320s-y187r以及c320g-y187r。
2.根据权利要求1所述突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no.3-8。
3.一种编码权利要求1或2所述酰胺键合成酶突变体的基因。
4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于，其核...
【专利技术属性】
技术研发人员：王方华，邓富莉，李可妍，王永华，蓝东明，马云建，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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