一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法。包括愈伤组织诱导、不定芽诱导、愈伤组织侵染等过程。本发明专利技术先以油桐下胚轴为外植体，对其愈伤组织诱导再生体系进行了优化，以诱导出的愈伤组织为材料，以pBI121为载体进行了遗传转化体系探索，成功建立了愈伤组织的遗传转化技术体系，且阳性苗植株转化率达22.86％，进而以FAD2基因为目的基因，构建RNAi载体；并对已构建的载体进行验证。最终证明，该方法操作简单、所需时间短、转化效率稳定，阳性植株转化率高达7.84％。本发明专利技术在油桐的遗传转化技术体系研究中取得了突破性进展，为油桐基因功能的研究及分子育种提供了技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物基因工程应用领域，具体涉及一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法。

技术介绍

1、油桐(verniciafordii(hemsl.)airy shaw)为大戟科(euphorbiaceae)油桐属(vernicia lour.)的落叶乔木。油桐种仁含油率高达70％，经压榨后得到的桐油中不饱和脂肪酸含量在90％以上，易氧化，是一种优质的干性油，可用于制作涂料、油墨、生物柴油等，具有广泛的工业用途。随着人们环保意识的提高，桐油作为一种可再生生物质能源的需求也随之增加，油桐的栽植面积也日益扩增，与此同时，油桐在实际生产中面临的问题也更加明显，如根腐病、橙斑白条天牛等病虫害严重影响了油桐树的正常生长。经过研究发现，传统的育种技术无法培育出具有病虫害抗性的油桐品种，且传统育种同时受到遗传和环境因素的共同调控，具有盲目性，分子育种虽能够快速、精确的实现育种目标，但因油桐的遗传转化技术体系尚未建立，分子育种技术目前无法在油桐应用到油桐上。

2、油桐的遗传转化技术体系是困扰已久的难题，油桐的叶片、叶柄等组织在侵染后极易死亡，利用现有的油桐愈伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的油桐无菌苗培育：以10月下旬前一年采集的油桐种子为材料，将种胚接种到培养基培养出无菌苗。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中培养得到的无菌苗，在进行愈伤组织诱导时选择培养25d、生长旺盛、健壮的无菌苗。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)取无菌苗的下胚轴，将其切成0.5-1.0cm的小段进行培养。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)侵染愈伤：将培养好的菌液离心，...

【技术特征摘要】

1.一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的油桐无菌苗培育：以10月下旬前一年采集的油桐种子为材料，将种胚接种到培养基培养出无菌苗。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中培养得到的无菌苗，在进行愈伤组织诱导时选择培养25d、生长旺盛、健壮的无菌苗。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)取无菌苗的下胚轴...

【专利技术属性】
技术研发人员：李泽，张慧，彭仁荣，张晓艳，骆承睿，谭晓风，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：