【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，涉及一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白及其制备方法。
技术介绍
1、胶原蛋白是一种生物大分子蛋白，广泛分布于动物结缔组织，是人体皮肤组织中重要的组成成分，ⅰ型胶原蛋白占比80％～85％，ⅲ型胶原蛋白占比8％～11％。在皮肤中，胶原蛋白以胶原纤维的形式存在，其独特的物理性质赋予皮肤结构的完整性，在真皮层形成致密的胶原纤维网络，赋予皮肤弹性和紧致感。在衰老过程中，皮肤胶原蛋白流失，导致皮肤弹性下降，并在外观上出现皱纹。目前已有许多研究表明，通过外源补充胶原可弥补衰老过程中的胶原流失。因此，胶原蛋白在医美领域有着广泛应用。
2、近年来，基因工程技术被应用于胶原蛋白生产，通过选择人源胶原蛋白基因作为目的基因，构建表达载体，利用宿主菌表达外源胶原蛋白，实现胶原蛋白的大规模生产。利用基因工程技术制备胶原蛋白有以下方面优势：1)通过筛选目的基因，可以根据需求表达动物源或人源的胶原蛋白，并精准表达单一种类的胶原蛋白；2)工程菌培养所需的培养基成分较为便宜易得，产量不受原料限制，通过改进生产工艺可实现大规模快速生产；3)有效避免动物源疾病、兽药残留，杜绝安全隐患，可表达生产人源胶原蛋白，生物利用率高、安全性高。
3、目前利用工程菌表达重组人源蛋白主要采用大肠杆菌、酵母菌等。其中多数为人源胶原蛋白全链表达，如cn 202310368832.8；或选择部分片段，重复连接后表达，再酶解得到小分子胶原肽，如cn 202210100932；再或者对人源胶原蛋白氨基酸序列进行修饰后表达，如cn 20221073
4、基质金属蛋白酶(mmps)是锌依赖性内肽酶家族中的一类，能降解细胞外基质(ecm)几乎所有成分，其中mmp-1、mmp-8、mmp-13为胶原蛋白酶，mmp-2、mmp-9为明胶酶。有研究表明，在皮肤中的角质形成细胞和真皮成纤维细胞可分泌mmps。在光老化过程中，紫外线辐射诱导真皮成纤维细胞产生活性氧(ros)，进而促进mmp-1表达；此外，紫外线诱导激活蛋白-1(ap-1)激活，增强mmp-1、mmp-3、mmp-9表达。mmps参与光老化，是造成皮肤中胶原流失的重要原因之一，其中mmp-1的酶切位点为gly-|-ile。目前尚没有针对mmp-1酶切位点进行修饰的重组胶原蛋白。
5、因此，开发一种针对mmp-1酶切位点进行修饰的重组胶原蛋白极具现实意义。
技术实现思路
1、由于现有技术存在上述缺陷，本专利技术提供了一种针对mmp-1酶切位点进行修饰的重组胶原蛋白，为当前重组胶原蛋白
提供一种全新的产品。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，包括依次串联的多个重组人源胶原蛋白单体；
4、所述重组人源胶原蛋白单体的氨基酸序列如seq id no:1所示，
5、seq id no:1(重组人源胶原蛋白单体的氨基酸序列)具体为：gppgpagqdgppgppgppgar。上述重组人源胶原蛋白单体的氨基酸序列来源于人源ⅰ型胶原蛋白部分片段，并对其进行氨基酸修饰，避免mmp-1酶切位点。重组人源胶原蛋白单体首尾相连时形成胰蛋白酶酶切位点。
6、本专利技术利用基因工程技术表达一种新的重组胶原蛋白，通过对人源胶原蛋白氨基酸片段进行筛选，对一个或多个氨基酸进行替换，避免mmp-1酶切位点和排异反应，提高生物活性和生物利用率，应用前景好。
7、作为优选的技术方案：
8、如上所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，所述重组人源胶原蛋白单体的数量为10～30个。当然其数量也可为5～50次，本领域技术人员可根据实际需求进行设定。
9、如上所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，所述重组人源胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。
10、seq id no:2(重组胶原蛋白氨基酸序列)具体为：
11、gppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgargppgpagqdgppgppgppgar。
12、本专利技术还提供一种核酸分子，所述核酸分子编码如上所述的重组人源胶原蛋白。
13、作为优选的技术方案：
14、如上所述的一种核酸分子，包括如seq id no:3所示的核苷酸序列。该核苷酸序列带有易于纯化的6×his标签且其根据毕赤酵母密码子偏好优化所得。
15、seq id no:3(重组胶原蛋白核苷酸序列)具体为：
16、ggaccacctg gcccagctgg tcaagacggt cctccaggac caccaggacc tccaggtgctagaggacctc ctggacctgc aggtcaagac ggtccacctg gtccaccagg accaccaggt gcaagaggtccccctggccc tgctggacaagatggtccac caggccctcc tggaccacca ggtgcaagag gaccaccaggtccagcaggt caagatggac cacctggtcc acctggtcca cctggtgcac gtggtcctcc aggtcctgcaggtcaggacg gaccaccagg accacctggt ccacccggtg ctagaggacc ccctggtcct gctggtcaggacggacctcc tggtcctcct ggtccacctg gtgcaagagg tccaccaggt cctgccggac aagatggtcctccaggtcca ccaggaccac ctggagctcg aggtcctccc ggaccagctg gacaagatgg acctcccggtcctcctggtc ctcctggagc tagaggac本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于：包括依次串联的多个重组人源胶原蛋白单体；
2.根据权利要求1所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白单体的数量为10～30个。
3.根据权利要求2所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～3任一项所述的重组人源胶原蛋白。
5.根据权利要求4所述的一种核酸分子，其特征在于，包括如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列。
6.含有至少一个如权利要求4或5所述的核酸分子的重组表达载体质粒。
7.含有至少一个如权利要求4或5所述的核酸分子或者如权利要求6所述的重组表达载体质粒的宿主细胞。
8.一种制备如权利要求1～3任一项所述的重组人源胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为毕赤酵母工程菌；
10.根据权利
...【技术特征摘要】
1.一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于：包括依次串联的多个重组人源胶原蛋白单体；
2.根据权利要求1所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白单体的数量为10～30个。
3.根据权利要求2所述的一种酵母异源表达的重组人源胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～3任一项所述的重组人源胶原蛋白。
5.根据权利要求4所述的一种核酸分子，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：荣绍丰，沈宙霖，管世敏，李茜茜，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：
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