【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体分离,具体涉及一种基于双柱层析分离抗体的方法。
技术介绍
1、采用双柱层析法进行抗体的分离纯化是一种常用的技术，通常用于从复杂的生物样品中提取目标抗体。这种方法利用了抗体与特定配体之间的亲和性相互作用，通过将样品依次通过两个不同的亲和层析柱，可以实现高纯度和高收率的抗体分离。
2、分离纯化抗体的需求源于多个领域，包括生物医药研究、生物制药生产以及临床诊断等。抗体是一类具有高度特异性和亲和力的蛋白质，可用于识别和结合特定的抗原，因此在生物科学领域具有广泛的应用。然而，获取高纯度的抗体是一个具有挑战性的任务，因为生物样品中存在多种其他蛋白质和杂质，而且抗体的特异性、亲和性也需要得到保持。
3、传统的单柱层析法在一定程度上可以实现抗体的分离，但对于复杂样品中目标抗体的纯化效果并不理想。这时，双柱层析法作为一种改进的分离技术被广泛应用。双柱层析法的基本原理是让生物样品依次通过两个亲和层析柱。首先，在第一个柱子中，称为亲和层析柱，使用一种配体来填充固定相。这个配体可以是抗体的抗原，也可以是与抗体的fc区域具有亲和性的分子，如蛋白a、蛋白g等。样品中的抗体与固定相上的配体发生特异性结合，而其他非特异性结合的蛋白质则被洗脱掉。通过优化洗脱条件，可以得到高纯度的抗体。然后，洗脱后的溶液将被收集并进行适当的稀释。这是为了使其体积适应第二个柱子，称为充填柱。充填柱通常使用高亲和性的配体填充，例如强化型蛋白a、蛋白g或其他高亲和性配体。在充填柱中，洗脱样品将再次经过亲和层析步骤，以进一步净化目标抗体。通过这两
4、基于以上技术问题，有必要提供一种可以高选择性的与抗体结合的配体在分离抗体中至关重要。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种基于双柱层析分离抗体的方法，该方法以自制的功能化印迹聚合物作为配体材料，其与igg具有很好的亲和性，且选择性高，可有效将抗体进行吸附分离出来。
2、为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：
3、一种基于双柱层析分离抗体的方法，包括以下步骤：
4、一、将2-巯基烟酸和氯化苄基三乙基铵和饱和碳酸氢钠溶液混合搅拌至固体溶解，之后添加甲基丙烯酸缩水甘油酯，室温下搅拌处理，然后调节反应液的ph进行沉淀，之后将反应液过滤，得到的滤饼洗涤后干燥，得到功能单体；
5、二、将丙烯酰胺单体、n-叔丁基丙烯酰胺、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸钠、上述功能单体、壳聚糖以及igg置于磷酸盐缓冲溶液中，搅拌混合均匀，然后加入plga肽交联剂，之后向混合液中通入氮气进行置换，然后添加aps、temed进行聚合反应，反应结束后将得到的聚合物切割成1m3的立方体，然后置于磷酸盐缓冲溶液中，并加入氯化钠，进行浸泡处理，之后进行过滤，洗涤后干燥，制得功能化印迹聚合物；
6、三、将上述功能化印迹聚合物分别装载到串联的第一吸附柱、第二吸附柱内，然后向第一吸附柱、第二吸附柱内通入磷酸盐缓冲液进行溶胀处理，将磷酸盐缓冲液进行排出，将待分离抗体溶液依次进入到第一吸附柱、第二吸附柱内进行吸附处理，最后采用含有氯化钠的磷酸盐缓冲液对第一吸附柱和第二吸附柱进行洗脱，制得抗体溶液。
7、作为一种改进的技术方案，步骤一中，2-巯基烟酸、氯化苄基三乙基铵、甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为1：(0.1-0.5)：1。
8、作为一种改进的技术方案，步骤一中，所述室温下搅拌处理的时间为20-30h，调节反应液的ph为2进行沉淀。
9、作为一种改进的技术方案，步骤二中，所述丙烯酰胺单体、n-叔丁基丙烯酰胺、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸钠、功能单体、壳聚糖、igg、plga肽交联剂、aps、temed的用量比为70mg：(5-5.5)mg：16μl、(11-12)mg：10mg：50mg：(70-80)mg：10mg：15μl。
10、作为一种改进的技术方案，步骤二中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mmol/l，ph为5.0。
11、作为一种改进的技术方案，步骤二中，所述聚合反应的稳定为37℃，时间为20-30h。
12、作为一种改进的技术方案，步骤二中，浸泡处理的时间为20-30h，浸泡处理时溶液中的氯化钠的含量为154mmol。
13、作为一种改进的技术方案，步骤三中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l，ph为5.0；所述含有氯化钠的磷酸盐缓冲液中氯化钠的含量为154mmol/l，磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l，ph为7.4。
14、作为一种改进的技术方案，步骤三中，所述溶胀处理的时间为20-30h，在第一吸附柱以及第二吸附柱的吸附处理的温度均为30-40℃，时间均为20-30h。
15、作为一种改进的技术方案，步骤三中，洗脱处理的温度为30-40℃，时间为20-30h。
16、由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：
17、1、本专利技术基于功能化印迹聚合物的双柱层析方法针对目标抗体具有较高的选择性。功能化印迹聚合物是通过特定的功能单体与目标抗体结合而形成的，能够在混合液中选择性地吸附目标抗体，从而实现其分离和纯化。
18、2、本专利技术通过串联的第一吸附柱和第二吸附柱的设计，可以进一步提高分离纯化效果。在第一吸附柱中，目标抗体被选择性地吸附，而非目标成分通过柱体流出。接着，在第二吸附柱中，还可以进一步去除残余的杂质和非特异性结合物，以获得更纯净的抗体溶液。
19、3、本专利技术的功能化印迹聚合物具有较高的稳定性和可重复使用性，因此该方法可以进行多次循环使用，从而在较长时间内保持其较高的分离效果和性能稳定性。
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1.一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤一中，2-巯基烟酸、氯化苄基三乙基铵、甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为1：(0.1-0.5)：1。
3.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤一中，所述室温下搅拌处理的时间为20-30h，调节反应液的pH为2进行沉淀。
4.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤二中，所述丙烯酰胺单体、N-叔丁基丙烯酰胺、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸钠、功能单体、壳聚糖、IgG、PLGA肽交联剂、APS、TEMED的用量比为70mg：(5-5.5)mg：16μL、(11-12)mg：10mg：50mg：(70-80)mg：10mg：15μL。
5.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤二中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mmol/L，pH为5.0。
6.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征
7.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤二中，浸泡处理的时间为20-30h，浸泡处理时溶液中的氯化钠的含量为154mmol。
8.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤三中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/L，pH为5.0；所述含有氯化钠的磷酸盐缓冲液中氯化钠的含量为154mmol/L，磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/L，pH为7.4。
9.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤三中，所述溶胀处理的时间为20-30h，在第一吸附柱以及第二吸附柱的吸附处理的温度均为30-40℃，时间均为20-30h。
10.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤三中，洗脱处理的温度为30-40℃，时间为20-30h。
...【技术特征摘要】
1.一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤一中，2-巯基烟酸、氯化苄基三乙基铵、甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为1：(0.1-0.5)：1。
3.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤一中，所述室温下搅拌处理的时间为20-30h，调节反应液的ph为2进行沉淀。
4.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤二中，所述丙烯酰胺单体、n-叔丁基丙烯酰胺、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸钠、功能单体、壳聚糖、igg、plga肽交联剂、aps、temed的用量比为70mg：(5-5.5)mg：16μl、(11-12)mg：10mg：50mg：(70-80)mg：10mg：15μl。
5.根据权利要求1所述的一种基于双柱层析分离抗体的方法，其特征在于，步骤二中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mmol/l，ph为5.0。
【专利技术属性】
技术研发人员：邹雄飞，
申请(专利权)人：冰宇宙苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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