【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机合成，具体的，涉及一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法。
技术介绍
1、氟雷拉纳，作为新型的高效gaba控氯离子通道干扰剂，与苯基吡唑类，环戊二烯类和大环内酯类杀虫剂比较而言，氟雷拉纳在分子构造、作用的位点、选择性及交互抗性等方面均有明显的差别，因此备受关注。在合成氟雷拉纳时，若直接采购其关键中间体，成本均较为昂贵，影响药物生产的利润空间。因此，业内众多厂家在研究合成氟雷拉纳的同时，也会研究如何制备其所需关键中间体，以达到节省成本的目的。
2、目前，在合成氟雷拉纳的两条经典路线中，均需要用到2-氨基-n-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺（或盐酸盐）作为关键中间体，而合成2-氨基-n-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺（或盐酸盐）一般要使用氨基被保护的甘氨酸与2，2，2-三氟乙基胺进行酰胺缩合，然后进一步脱保护基得到目标中间体。这类工艺基本都在丙酮、thf、dmf等有机溶剂中进行反应，后处理也需要二氯甲烷等溶剂经过萃取、结晶的操作，步骤长、工时耗费高、有机溶剂耗费量很大，环保成本很高。
3、针对以上问题，已有专利cn101845432b一种α-氨基酸酯水解酶制备非均相生物催化剂的方法公开了通过α-氨基酸酯水解酶的固定化作用，在无需对α-位含有氨基的氨基酸酯进行氨基保护状态下，氨基酸酯可直接与有机胺进行胺酯交换反应，换言之，用酶法进行该氟雷拉纳关键中间体合成，会使反应路线更加精简、更加绿色、环保。但是在这种方法中，由于酶处于游离状态，不稳定、催化效率低，存在以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为反应物
技术实现思路
1、本专利技术提出一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，解决了相关技术中合成2-氨基-n-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺时步骤长、工时长、环保负担高、低收率和低纯度的问题。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术提出一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2-氨基-n-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺；
4、所述固定化α-氨基酸酯水解酶包括石英砂载体及负载在载体上的α-氨基酸酯水解酶。
5、作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的温度为20~35℃。
6、作为进一步的技术方案，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法为，将石英砂加入到溶剂中，再加入α-氨基酸酯水解酶酶液，进行固定后，得到固定化α-氨基酸酯水解酶；所述α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为的比例为15ml：1~3g。
7、作为进一步的技术方案，所述α-氨基酸酯水解酶酶液的浓度为30u/ml。
8、作为进一步的技术方案，所述α-氨基酸酯水解酶通过3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸负载在石英砂载体上。
9、作为进一步的技术方案，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：将所述石英砂载体加入到乙酸溶液中，加入3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸进行修饰后，再加入α-氨基酸酯水解酶，进行固定，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
10、作为进一步的技术方案，所述3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸的质量为石英砂载体质量的4%~6%，优选为5%。
11、作为进一步的技术方案，所述修饰的温度为20~30℃，修饰的时间为4~6h。
12、作为进一步的技术方案，所述活化的温度为20~30℃，活化的时间为1.5~2.5h，固定的温度为3~6℃，固定的时间为4~6h。
13、作为进一步的技术方案，所述乙酸溶液的ph为5~6。
14、作为进一步的技术方案，所述乙酸溶液为乙酸水溶液。
15、作为进一步的技术方案，所述石英砂载体为石英砂经羧甲基壳聚糖改性得到。
16、作为进一步的技术方案，所述羧甲基壳聚糖的质量为石英砂质量的4%~8%。
17、作为进一步的技术方案，所述石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
18、s1、将羧甲基壳聚糖加入到甲酸溶液中，再加入石英砂，静置涂覆，得到预处理物；
19、s2、向所述预处理物中加入2,3-二羟基丁二醛进行交联，得到石英砂载体。
20、作为进一步的技术方案，所述2,3-二羟基丁二醛的质量为石英砂质量的1%~3%，优选为2%。
21、作为进一步的技术方案，所述静置涂覆的时间为3.5~4.5h。
22、作为进一步的技术方案，所述交联的温度为20~30℃，交联的时间为40~80min。
23、作为进一步的技术方案，所述甲酸溶液的质量浓度为1~2%。
24、作为进一步的技术方案，所述以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应后，进入后处理工序，得到2-氨基-n-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺。
25、作为进一步的技术方案，所述后处理工序为依次进行固液分离、洗涤和干燥。
26、作为进一步的技术方案，所述固液分离的方式包括抽滤、离心中的一种或两种，优选为离心。
27、作为进一步的技术方案，所述洗涤是指对得到的固定酶相进行洗涤，洗涤方式包括淋洗、浆洗中的一种或两种，优选为浆洗。
28、作为进一步的技术方案，所述干燥是指对固液分离得到的反应清液和洗涤得到的滤液合并后的混合液进行干燥。
29、作为进一步的技术方案，所述干燥包括冻干、喷干中的一种或两种，优选为冻干。
30、作为进一步的技术方案，所述反应液中固定化α氨基酸酯水解酶的浓度范围为2~50u/ml，优选为2~5u/ml。
31、作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的酰基供体为甘氨酸酯，具体的酯类型包括甘氨酸与甲醇、乙醇、异丙醇等常见低级醇所生成的相应甘氨酸酯，即甘氨酸甲酯、甘氨酸乙酯、甘氨酸异丙酯等。
32、作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应中，反应溶剂包括纯水相、水与少量醇类溶剂的一种（甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇、甘油，醇与水混合后体积比例＜30%）、水与其它水溶性有机溶剂（dmf、dmac、丙酮，有机溶剂与水混合后的体积比例＜10%）的混合液一种，上述有机溶剂任意几种混合后与水配制而成的混合液（有机溶剂总体积占混合液体积比例＜5%），优选为体积浓度为5%的dmac水溶液。
33、作为进一步的技术方案，所述反应溶液的浓度（以2，2，2-三氟乙基胺计）为0.01~10g/ml。
34、作为进一步的技术方案，所述甘氨酸酯与2，2，2-三氟乙基胺的反应摩尔比为0.95~1.5:1。
35、作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的温度为10~50℃，优选为20~35℃。
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【技术保护点】
1.一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2-氨基-N-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺；
2.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法为，将石英砂加入到溶剂中，再加入α-氨基酸酯水解酶酶液，进行固定后，得到固定化α-氨基酸酯水解酶；所述α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为15mL：1~3g。
3.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述α-氨基酸酯水解酶通过3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸负载在石英砂载体上。
4.根据权利要求3所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：将所述石英砂载体加入到乙酸溶液中，加入3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸进行修饰后，再加入α-氨基酸酯水解酶，进行固定，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。p>
5.根据权利要求4所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定的温度为20~30℃，固定的时间为1.5~2.5h。
6.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述石英砂载体为石英砂经羧甲基壳聚糖改性得到。
7.根据权利要求6所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖的质量为石英砂质量的4%~8%。
8.根据权利要求6所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述静置涂覆的时间为3.5~4.5h。
10.根据权利要求8所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述交联的温度为20~30℃，交联的时间为40~80min。
...【技术特征摘要】
1.一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2-氨基-n-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺；
2.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法为，将石英砂加入到溶剂中，再加入α-氨基酸酯水解酶酶液，进行固定后，得到固定化α-氨基酸酯水解酶；所述α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为15ml：1~3g。
3.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述α-氨基酸酯水解酶通过3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸负载在石英砂载体上。
4.根据权利要求3所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：将所述石英砂载体加入到乙酸溶液中，加入3-[2-(2-氨基乙氧基)乙...
【专利技术属性】
技术研发人员：米祥忻，刘萌，马晓雨，
申请(专利权)人：河北圣雪大成制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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