一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法，通过两步洗脱方式清洗液氮研磨后的雪茄烟叶样本，运用恒温振荡和超声处理方式洗脱烟叶叶际微生物，利用高速离心收集烟叶叶际菌泥，用于宏基因组DNA提取；发明专利技术的叶际微生物宏基因组DNA提取方法能够显著增加获得微生物细胞的数量，缩短洗脱时间(3.5h，且无需分批洗脱)，提高微生物DNA的浓度和质量，且其全程低温处理，避免温度对DNA的破坏，提高了DNA完整率同时该方法操作步骤简单、高效，具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物，尤其涉及一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法。

技术介绍

1、烟叶发酵是雪茄加工过程的一项重要工序，是改进品质缺陷，增进和提高雪茄香吃味质量的有效途径和重要的环节。烟草微生物发酵技术是近几年来研究较为活跃的生物工程技术。国内这方面研究近10年来进展较快，但在增香菌种的筛选定位和制剂的工业添加利用方面仍然存在着尚未攻克的技术障碍。自从首次将pcr-dgge技术用于研究微生物多样性以来，高通量测序已经被广泛应用于各种环境微生态的研究中。本研究采用宏基因组手段分析发酵雪茄烟叶表面微生物多样性，同时可准确筛选定位出发酵雪茄烟叶表面优势菌株，将其应用于烟叶人工发酵，为微生物发酵技术在雪茄烟叶发酵工艺上的推广应用，逐步形成产业化发展规模提供技术支撑。

2、雪茄是一种深加工制品，其叶面杂质多，微生物细胞少，采用传统的叶片洗脱方式获得菌泥，提取效率低；且叶绿体的存在降低了微生物群落测序是有效数据的数量和质量。目前研究多采用土壤dna提取试剂盒，需要大批量重复洗脱烟叶表面微生物，过程繁琐费时，如何快捷高效的从雪茄烟叶叶际获取微生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤1中，粉末通过40目筛，叶梗需碾碎，且长度不宜超过0.5cm；研磨后的样品均完整保留。

3.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤2中，雪茄烟叶粉末质量为25-30g。

4.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤2中，洗脱液分别为去离子水、0.8％NaCl溶液、PBS溶液(均作无菌处理)；雪...

【技术特征摘要】

1.一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法，其特征在于，所述步骤1中，粉末通过40目筛，叶梗需碾碎，且长度不宜超过0.5cm；研磨后的样品均完整保留。

3.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法，其特征在于，所述步骤2中，雪茄烟叶粉末质量为25-30g。

4.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法，其特征在于，所述步骤2中，洗脱液分别为去离子水、0.8％nacl溶液、pbs溶液(均作无菌处理)；雪茄烟叶粉末与洗脱液的料液比为1:8-1:14(m/v)。

5.如权利要求1所述的一种雪茄烟叶叶际微生物宏基因组dna的提取方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘元法，陈冲，李东亮，郑召君，贾云，张倩颖，
申请(专利权)人：四川中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：