本发明专利技术公开了一种用于乏氧检测的荧光探针及其合成方法和用途。合成方法包括如下步骤：１）在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为１∶２～１０∶１的丁二酸酐、２，４－二甲基吡咯、三氟化硼乙醚，反应；依次滴加三乙胺、三氟化硼乙醚，摩尔比为５∶６～８，反应；用饱和食盐水洗，干燥，减压蒸除溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物；２）以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为１∶１～２∶１～２∶０．１～０．２的上述中间产物、４－氨基－２，２，６，６－四甲基哌啶－１－氧自由基、二环己基碳二亚胺、４－二甲氨基吡啶，反应；过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到荧光探针。本发明专利技术的荧光探针的合成简便，成本低廉，具有非常高的检测灵敏度，在荧光分子成像领域有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析，生物分析，临床医学检测领域，尤其涉及一种荧光探针及其合成方法和用途。 乏氧是实体肿瘤的一个重要特征，许多研究表明，肿瘤的抗药性与乏氧密切相关。 对肿瘤乏氧的研究具有非常重要的意义。 目前有许多体内或体外检测肿瘤乏氧组织的方法，如氧敏感微电极法、免疫组织 化学技术等，这些方法均为损伤性检测方法。另外，一些无损检测技术如磁共振(MRI)分子 显像技术、PET分子显像技术等，也被应用于肿瘤乏氧的显像研究，但其设备昂贵，且检测效 果很大程度上受制于探针的开发，因此在基础研究中的实际应用受到限制。针对现有技术 及不足，本专利技术提供了一种用于乏氧检测的荧光探针，其检测手段简便，灵敏度高，适合于 配备荧光检测仪器的常规实验室应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种荧光探针及其合成方法和用途。荧光探针具有如下结构式 荧光探针的合成方法包括如下步骤 i)在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i : 2 io : i的丁二酸酐、2，4-二甲基吡咯和三氟化硼乙醚，反应12 24h ;在5 1(TC下依次滴加摩尔比为5 : 6 8的三乙胺和三氟化硼乙醚，，氮气保护下继续反应24 36h ;用饱和食盐水洗2 3次，有 机相用无水Na2S04干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物； 2)以二氯甲烷为溶齐U，加入摩尔比为i : i 2 : i 2 : o. i o.2的上述中间产物、4-氨基-2， 2， 6， 6-四甲基哌啶-1-氧自由基、二环己基碳二亚胺和4- 二甲氨基吡 啶，反应1 2h ;过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到荧光探针。 荧光探针用于乏氧细胞的检测分析。 本专利技术的优点是1)荧光探针的合成简便，原料易得，成本低廉；2)该荧光探针具 有非常高的检测灵敏度，适合微量检测，有良好的应用前景；3)该探针适合荧光显微镜、流
技术介绍
式细胞仪、分光光度计、荧光酶标仪等多种荧光检测仪器。附图说明 图1是探针被还原后的荧光变化情况，维生素C溶液用磷酸缓冲液PBS(pH7. 4)配 制，终浓度分别为0 ii M， 50 ii M， 100 ii M， 150 y M(从左至右)，加入探针，使其终浓度为5 y M。 反应5分钟后紫外光激发，拍设图像； 图2 (a)是细胞用氯化钴(浓度50 y M)处理48h， PBS洗后，加入探针溶液(浓度 5 M) ， 15分钟后在荧光显微镜下拍摄； 图2 (b)是细胞用PBS处理48h，加入探针溶液(浓度5 ii M) ， 15分钟后在荧光显微 镜下拍摄，作为对照组。具体实施例方式本专利技术的合成方程式 o' 实施例l i)在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i : io : i的丁二酸酐(10mmol)、2，4-二甲基妣咯(lOOmmol)、三氟化硼乙醚(lOmmol)，反应24h ;在5 10。C下依 次滴加三乙胺(50mmol)、三氟化硼乙醚(80mmol)，氮气保护下继续反应36h ;用饱和食盐水 洗3次，有机相用无水Na2S04干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物0. 25g， 产率7. 8% ; 2)以二氯甲烷为溶齐U，加入摩尔比为i : 2 : 2 : o.2的上述中间产物(0. 2mmol) 、4-氨基-2， 2， 6， 6-四甲基哌啶-1-氧自由基(0. 4mmo1) 、 二环己基碳二亚胺 (0. 4mmol)、4-二甲氨基吡啶(0. 04mmol)，反应2h ;过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析 得到荧光探针0. 020g，产率18.6%。 实施例2 i)在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i : 2 : i的丁二酸酐(10mmol)、2，4-二甲基妣咯(20mmol)、三氟化硼乙醚(lOmmol)，反应12h ;在5 l(TC下依 次滴加三乙胺(50mmol)、三氟化硼乙醚(60mmol)，氮气保护下继续反应24h ;用饱和食盐水 洗2次，有机相用无水Na2S04干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物0. 22g， 产率6. 8% ; 2)以二氯甲烷为溶齐U，加入摩尔比为i : i : i : o. i的上述中间产物(0. 2咖01)、4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-l-氧自由基(0. 2mmo1) 、 二环己基碳二亚胺 (0. 2mmo1) 、4-二甲氨基吡啶(0. 02mmo1)，反应lh ;过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析 得到荧光探针。最终得到中间产物0. 019g，产率18. 5% 。 实施例3 1)在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为1 : 2 : l的丁二酸酐、2， 4-二甲基吡咯、三氟化硼乙醚，反应12h ;在5 1(TC下依次滴加三乙胺、三氟化硼乙醚，摩 尔比为5 : 6，氮气保护下继续反应24h;用饱和食盐水洗2次，有机相用无水Na^04干燥， 减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物； 2)以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i :i:i: o. i的上述中间产物、4-氨基-2， 2， 6， 6-四甲基哌啶-1-氧自由基、二环己基碳二亚胺、4- 二甲氨基吡啶，反应lh ;过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到荧光探针。 实施例4 i)在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i : io : i的丁二酸酐、吡咯、三氟化硼乙醚，反应24h ;在5 1(TC下依次滴加三乙胺、三氟化硼乙醚，摩尔比为 5 : 8，氮气保护下继续反应36h;用饱和食盐水洗3次，有机相用无水Na^(^干燥，减压蒸 馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到中间产物； 2)以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为1 :2:2: O. 2的上述中间产物、4-氨 基-2， 2， 6， 6-四甲基哌啶-1-氧自由基、二环己基碳二亚胺、4- 二甲氨基吡啶，反应2h ;过滤，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析得到荧光探针。 实施例5 1)将丁二酸酐(10,1) 、2，4_ 二甲基妣咯(20,1) 、 BF3 0Et2(10,l)加入到 三颈烧瓶中，氮气保护下注入100ml 二氯甲烷；搅拌反应12小时后，在5 l(TC下依次小 心滴加三乙胺(50mmol)、三氟化硼乙醚(60mmo1)，氮气保护下继续反应36h ;反应结束后， 反应溶液用饱和食盐水洗两次(2X20mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，之后真空旋干有机 溶剂。得到的黑色油状物用硅胶柱层析分离(洗脱剂选用石油醚乙酸乙酯=1:1)。 最终得到中间产物0. 32g，产率10%。 mp 190-192°C ,H NMR(400MHz， CDC13)6. 09 (s， 2H)， 3. 33 (t ， J = 8. 8Hz ， 2H) ， 2. 64 (t ， J = 8. 8Hz ， 2H) ， 2. 53 (s ， 6H) ， 2. 46 (s ， 6H) ; 13C NMR (100MHz ， CDC13) : S 173. 1， 154. 0， 144. 9， 141. 4， 131. 0， 122. 3，35. 3，23. 8， 16. 2， 14. 5 ;IR(film)v/ cm本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种荧光探针，其特征在于该荧光探针具有如下结构式： ＊＊＊。
【技术特征摘要】
一种荧光探针，其特征在于该荧光探针具有如下结构式F2009101571269C00011.tif2. —种如权利要求1所述荧光探针的合成方法，其特征在于包括如下步骤1) 在氮气保护下，以二氯甲烷为溶剂，加入摩尔比为i : 2 io : l的丁二酸酐、2，4- 二甲基吡咯和三氟化硼乙醚，反应12 24h ;在5 l(TC下依次滴加摩尔比为5 : 6 8的三乙胺和三氟化硼乙醚，，氮气保护下继续反应24 36h ;用饱和食盐...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宏，刘洋，王彦广，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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