【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体药物，尤其涉及一种抗乙型肝炎病毒核心抗原hbcag的结合分子及其用途。
技术介绍
1、乙型肝炎病毒(hepatitis b virus，hbv)的感染是全球共同面临的严重的公共卫生问题。统计结果显示，全球有超过20亿人感染过hbv，其中约有3.5亿人为慢性hbv感染(chronic hepatitis b，chb)。由于hbv感染的感染率极高，并且由慢乙肝患者发展成的肝癌死亡率在我国癌症总死亡率中排名第二。
2、hbv基因组大小为含有3.2kb碱基对(base pair，bp)的小环形dna(3182～3221，不同亚型的hbv病毒基因组长度略有差别)，是目前已知最小的真核细胞dna病毒之一。hbv基因组有4个开放阅读框(open reading frame，orf)，分别为：s-orf、p-orf、c-orf和x-orf。其中，s-orf编码三个包膜蛋白shbs(s)、mhbs(pres2+s)和lhbs(pres1+pres2+s)；c-orf有前c区(prec)和c基因区，前者是一种分泌型蛋白(hbeag)，对于慢性感染免疫耐受的形成具有重要的作用，后者组成病毒capsid，并包裹病毒基因组，hbv基因组中的这一区段最保守，是免疫攻击的靶表位；x-orf的基因产物hbx蛋白具有转式激活增强子和启动子的转录功能，是一种多功能的反式调节因子，与病毒感染、转录、复制、细胞凋亡和hcc发生均有重要联系；p-orf是hbv基因组中最长的orf，负责转录dna聚合酶。此外，hbv的各个开放阅读框高度重叠，
3、hbv基因组含4个基因，转录出4种不同的mrna并可以编码合成9种不同的病毒蛋白，包括组装病毒的外膜蛋白(hbsag)和核壳(hbcag)的结构蛋白；3种p蛋白(末端蛋白，dnap和rna酶h)和调节病毒复制功能的hbx蛋白，另一种pc/c基因编码的hbeag蛋白也一种是功能蛋白。
4、hbv的外膜蛋白(hbsag)又称为澳大利亚抗原，最早是由blumberg在1965年发现，而且被广泛应用于定量血清中hbsag的值来预测病人hbv感染水平。hbv的外膜蛋白由s-orf编码合成，包括l-hbsag，m-hbsag和s-hbsag3种外膜成分，3种蛋白有各自的起始密码，但共同合用s-hbsag的终止密码。
5、hbv的核心蛋白由c-orf编码(nucleprotein)，有2中形式：一种为病毒核壳的结构成分hbcag；另一种是可溶性、能分泌的hbeag。hbv的c基因有2个相关的orf，其中以两个起始密码子区分为前c(pre-c)和c区，但是有共同的终止密码子。pre-c/p mrna合成p21的核壳蛋白hbcag，pre-c-mrna产生p25 pre-c蛋白，经一系列处理最终才成为hbeag。hbcag存在不同的细胞系中，如细菌、酵母或哺乳动物细胞等，在无其他hbv相关蛋白或元件的情况下均能自发组装成capsid结构，可以作为基因工程疫苗的载体。
6、目前，人类主要是以预防性的疫苗为主作为对付hbv的策略，但是对于慢性乙型肝患者，仍需要寻找有效的抗病毒药物。目前已经批准的应用于慢乙肝临床治疗的药物包括干扰素和核苷类似物两类，尽管这两类药物在抑制病毒复制和延缓疾病进展上起到积极的效果，但仍然存在治疗周期长、应答率低、副反应较严重(干扰素类)以及潜在耐药性(核苷类似物)等问题。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提供一种抗乙型肝炎病毒核心抗原hbcag的结合分子及其用途，该结合分子能够与hbcag发生特异反应，并且能够大幅降低细胞模型及小鼠体内模型中的hbv病毒含量，具有显著的治疗乙型肝炎的效果。
2、为解决以上技术问题，本专利技术的第一方面提供一种抗乙型肝炎病毒核心抗原hbcag的结合分子，所述结合分子包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述免疫球蛋白单一可变结构域中cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示。
3、本专利技术通过用hbcag抗原免疫羊驼，收集分离免疫后的羊驼外周血单个核细胞pbmc，分选hbcag阳性b细胞，然后提取总rna并得到cdna，通过噬菌体展示技术获得了抗体库，进一步使用hbcag筛选得到与其可特异反应的结合分子，该结合分子能够与hbcag发生特异反应，并且能够在细胞模型及小鼠体内模型中有效降低hbv病毒的含量，具有显著的治疗乙型肝炎的效果。
4、具体地，seq id no:1序列为sgssfstva，seq id no:2序列为qitsigvt，seq idno:3序列为cklyttygppy。
5、结合第一方面，所述结合分子包含与seq id no:4～seq id no:10中的任意一种氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
6、结合第一方面，所述结合分子包含与seq id no:4～seq id no:10中的任意一种氨基酸序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列。
7、结合第一方面，所述结合分子包含与seq id no:4～seq id no:10中的任意一种氨基酸序列具有至少95％的同一性的氨基酸序列。
8、结合第一方面，所述结合分子的氨基酸序列为seq id no:4～seq id no:10中的任意一种氨基酸序列。
9、具体地，seq id no:4序列为qvqlvesggglvqpggslrlscsasgssfstvamawyrqaagqqrelvaqi tsigvthyadsvkgrftisrdnakntvdlhmnslkpedtavyycklyttyg ppywgqgtqvtvss；seq id no:5序列为qlqlvesggglvqpggslrlscsasgssfstvamawfrqapgkgrelgvaq itsigvtnyadsvkgrftvsrddakntvylqmnslraedtavyycklytty gppywgqgttvtvsa；seq id no:6序列为qvqlvesggglvqpggslrlscsasgssfstvamawfrqapgkgrelgva qitsigvtnyadsvkgrftvsrddakntvylqmnslraedtavyycklytt ygppywgqgttvtvsa；seq id no:7序列为qlqlvesggglvqpggslrlscsasgssfstvamawfrqapgkgrelgvaq itsigvtnyadsvkgrftvsrddakntvylqmnslraedtavyycklytty gppywgqgttvtvss；seq id no:8序列为qlqlvesggglvqpggslrlscsasgssfstvamawfrqapgkgrelgvaq itsigvtnaadsvkgrftvsrddakntvylqmnslraedtavyycklytt本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述免疫球蛋白单一可变结构域中CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
2.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与SEQ ID NO:4～SEQID NO:10中的任意一种氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与SEQ ID NO:4～SEQID NO:10中的任意一种氨基酸序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与SEQ ID NO:4～SEQID NO:10中的任意一种氨基酸序列具有至少95％的同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求4所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子的氨基酸序列为SEQ IDNO:4～SEQ ID NO:10中的任意一种氨基酸序列。
6.如权利要求1～5
7.如权利要求6所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子为抗乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg的纳米抗体。
8.一种融合蛋白，其特征在于，包含权利要求1～7任一项所述的结合分子和Fc片段。
9.一种多特异性抗体，其特征在于，包含权利要求1～7任一项所述的结合分子和其他抗体片段。
10.一种权利要求1所述的抗乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg的结合分子在制备乙型肝炎病毒的诊断和/或治疗产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抗乙型肝炎病毒核心抗原hbcag的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述免疫球蛋白单一可变结构域中cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示。
2.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与seq id no:4～seqid no:10中的任意一种氨基酸序列具有至少80％的同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与seq id no:4～seqid no:10中的任意一种氨基酸序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含与seq id no:4～seqid no:10中的任意一种氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：张军方，谢崇伟，
申请(专利权)人：深圳市因诺赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。