【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药材有效成分分离提取领域，涉及一种巴戟天寡糖的提取分离纯化方法。
技术介绍
1、巴戟天(morinda officinalishow)用药历史悠久。中药材巴戟天是植物巴戟天的干燥根。《中国药典》中记载其具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。巴戟天提取物临床应用常见于抑郁症、甲状腺功能异常、记忆力衰退、生殖功能障碍、骨质疏松等。糖类是巴戟天的主要活性成分，包括单糖、寡糖和多糖。巴戟天寡糖具有抗抑郁、抗应激、抗心肌缺血、促进精子生成、清除活性氧等作用。但由于寡糖分子具有含大量羟基，存在多分支、多种连接方式、多样立体化，各种寡糖结构与性质相似的特点，使得寡糖单体的分离提纯与检测成为一大难点。
2、获得高纯度寡糖的工艺包括提取、分离与纯化。在提取工艺中，一般采用水和乙醇按照一定的比例混合作为提取溶剂，包括加热回流提取、超声提取、微波提取、生物提取等方法，其中超声提取、微波提取、生物提取对仪器及反应条件和成本的要求较高，加热回流提取成本较低，操作简单，溶出范围广。分离工艺一般采用活性炭柱色谱法、离子交换树脂法、大孔树脂法等，其中离子交换树脂成本高，对洗脱溶剂ph有一定要求，大孔树脂法对温度较敏感，活性炭柱色谱法成本较低，操作条件宽范围。纯化工艺一般有凝胶纯化法、制备液相色谱法、逆流色谱法、膜分离技术等，制备液相色谱法、逆流色谱法、膜分离技术均具有不同程度的分离效率低、分离条件苛刻等特点，凝胶纯化法适用于大量制备。
3、针对上述存在的问题，本专利技术提供了一种高效快速的巴戟天寡糖提取分离纯化方法，其中用水
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种巴戟天寡糖的提取分离纯化方法，得到高纯度的巴戟天寡糖。本专利技术的目的通过如下技术方案得以实现：
2、一种巴戟天寡糖的提取分离纯化方法，包括如下步骤：
3、(1)水浴回流提取巴戟天药材粉末中的糖类物质
4、将中药材巴戟天块根在一定温度下烘干后，将其粉碎，将所得巴戟天药材粉末加入去离子水浸泡一段时间；然后，水浴回流提取，过滤，得到水提液；重复提取和过滤操作，合并所得水提液，用旋转蒸发仪在60℃蒸发除去其中大部分水分，浓缩至相对密度1.20(即：1ml浓缩液重量为1.2g)，得到包含巴戟天单糖、二糖、寡糖以及多糖等糖类物质的水提浸膏。
5、所述相对密度是指相对于水的浓缩液密度。
6、其中，烘干温度为50℃～70℃，烘干时长为20～30小时，巴戟天药材粉末与去离子水的质量比为1:8～1:12，优选1:10，即用于浸泡巴戟天药材粉末的去离子水为巴戟天药材粉末质量的8～12倍，优选10倍。浸泡时间可以为2～3小时。水浴回流提取时间为2～3小时。
7、所述巴戟天寡糖指的是巴戟天三糖至九糖，巴戟天多糖是指大于或等于十糖的糖类物质。
8、(2)活性炭柱色谱法分离得到巴戟天寡糖部位粗提物
9、将一定量活性炭加到去离子水中，加热煮沸，保持沸腾状态一段时间，冷却至约30℃，将水倒掉，活性炭用去离子水洗涤，重复多次洗至无色，向该经处理的活性炭加入适量去离子水至漫过活性炭；然后，加入步骤(1)所得的巴戟天水提浸膏，用搅拌机搅拌，使得巴戟天糖类物质充分吸附在活性炭上；
10、将吸附了巴戟天糖类物质的活性炭装柱，加水洗至流出液还原糖检测近阴性，弃去所得水洗液以除去巴戟天多糖；然后以30％乙醇水溶液洗脱至还原糖检测近阴性，收集所得30％乙醇洗脱液，使用旋转蒸发仪旋在60℃将所述洗脱液浓缩至相对密度为1.20，得到巴戟天寡糖部位粗提物。
11、其中，多用活性炭目数为20～40目。活性炭与加入的去离子水的质量比为1:8～1:12，优选1:10；沸腾状态保持的时间为25～40分钟。所述相对密度是指相对于水的浓缩液密度。
12、所述还原糖检测通过硫酸-苯酚反应进行，具体如下：取1ml样品，加入0.5ml 5％苯酚，加2.5ml硫酸，混匀，观察颜色为亮黄色，即说明样品中含糖(阳性)；颜色为无色，即说明样品中不含糖(阴性)。
13、搅拌机的搅拌时间为10～15小时，转速150rpm。
14、(3)通过凝胶纯化系统两次纯化得到巴戟天寡糖单体
15、采用凝胶纯化系统，分两次纯化巴戟天寡糖部位粗提物，得到巴戟天寡糖单体。
16、其中，在第一次凝胶纯化过程中，将巴戟天寡糖部位粗提物溶于水配制成的供试品溶液，经凝胶纯化系统分离得到巴戟天三糖、四糖、五糖、六糖、七糖粗品；然后用旋转蒸发仪蒸干溶剂。
17、在第二次凝胶纯化过程中，将巴戟天三糖、四糖、五糖、六糖、七糖粗品分别溶于水配制成供试品溶液，经凝胶纯化系统分离得到三糖、四糖、五糖、六糖、七糖单体。
18、所述用于第一次凝胶纯化过程的供试品溶液浓度为100～200mg/ml，第二次凝胶纯化过程的供试品溶液浓度为50～100mg/ml。
19、色谱条件如下：
20、仪器：全自动凝胶纯化系统；
21、色谱柱：sugar-brt-101(10μm,20*250mm)
22、流动相：60％乙腈水溶液
23、流速：4ml/min
24、洗脱方式：等度洗脱
25、进样量：1ml。
26、(4)对经过前述步骤(1)、(2)、(3)得到的巴戟天寡糖用液相色谱法进行纯度检验，用高分辨质谱定性。
27、液相色谱条件如下：
28、仪器：配备蒸发光散射检测器的液相色谱仪
29、色谱柱：xamide(5μm，4.6*250mm)
30、流动相：72％乙腈水溶液
31、流速：1ml/min
32、柱温：40℃
33、洗脱方式：等度洗脱
34、进样量：10μl。
35、高分辨质谱条件如下：
36、仪器：四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪
37、离子源：hesi
38、电离模式：负离子模式
39、电离电压：3.2kv
40、扫描范围：200～2000m/z。
41、本专利技术方法的流程方案示于附图5。
42、较之现有技术，根据本专利技术的方法具有如下优点：本专利技术的方法以水浴回流法提取巴戟天药材粉末中的糖类物质，用活性炭柱色谱法分离得到巴戟天寡糖部位粗提物，通过凝胶纯化系统两次纯化一次性得到高纯度(≥95％)的巴戟天三糖至七糖共五种寡糖单体，从而可以高效快速地提取分离纯化巴戟天寡糖。
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1.一种巴戟天寡糖的提取分离纯化方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中，巴戟天药材粉末与去离子水的质量比为1:8～1:12。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(2)中，活性炭与加入的去离子水的质量比为1:8～1:12。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(3)中，在第一次凝胶纯化过程中，将巴戟天寡糖部位粗提物溶于水配制成的供试品溶液，经凝胶纯化系统分离得到巴戟天三糖、四糖、五糖、六糖、七糖粗品；然后用旋转蒸发仪蒸干溶剂；
5.根据权利要求4所述的方法，其中第一次凝胶纯化过程的供试品溶液浓度为100～200mg/mL，第二次凝胶纯化过程的供试品溶液浓度为50～100mg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(3)中，凝胶纯化系统色谱条件如下：
7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(4)中，液相色谱条件如下：仪器：配备蒸发光散射检测器的液相色谱仪
8.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(4)中，高分辨质谱条件如下：仪器：四极杆静电场轨道阱高
...【技术特征摘要】
1.一种巴戟天寡糖的提取分离纯化方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中，巴戟天药材粉末与去离子水的质量比为1:8～1:12。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(2)中，活性炭与加入的去离子水的质量比为1:8～1:12。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(3)中，在第一次凝胶纯化过程中，将巴戟天寡糖部位粗提物溶于水配制成的供试品溶液，经凝胶纯化系统分离得到巴戟天三糖、四糖、五糖、六糖、七糖粗品；然后用旋转蒸发仪蒸干溶剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄雯雯，王尉，张梅，刘珊珊，钱冲，贺天雨，
申请(专利权)人：北京市科学技术研究院分析测试研究所北京市理化分析测试中心，
类型：发明
国别省市：
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