一种吴茱萸的组织培养法制造技术

本发明专利技术公开了一种吴茱萸的组织培养法，包括以下步骤：１）吴茱萸嫩芽进行流水冲洗；２）经常规消毒，然后切成０．５～１．０ｃｍ长的小段嫩芽Ｉ并接种到诱导不定芽培养基上进行培养；３）待小段嫩芽Ｉ上长出的不定芽长至小苗Ｉ时，将此小苗Ｉ切成茎段Ｉ并接种到增殖培养基上进行培养；４）待茎段Ｉ上长出的不定芽长至２．０～５．０ｃｍ高的小苗ＩＩ时，将此小苗ＩＩ切成茎段ＩＩ并接种到增殖培养基上进行培养；５）待茎段ＩＩ上长出的不定芽长至３．０～５．０ｃｍ高的小苗ＩＩＩ时，割取小苗ＩＩＩ并接种到生根培养基中；６）待上述小苗ＩＩＩ长出大于２ｃｍ的至少３条根时，得可出瓶种植的种苗。采用该方法能获得大量的吴茱萸的种苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种吴茱萸组织培养的方法。
技术介绍
吴茱萸为芸香科吴茱萸属其中的一个种，果实入药，性热，味辛、苦，具有散寒止 痛，降逆止呕，助阳止泻等功效，用于治疗头痛、疝痛、脚气、痛经、脘腹胀痛、呕吐吞酸、口疮 等，药用价值很高；生于温暖地带山地、路旁或疏林下，其分布于广东、广西、贵州、云南、四 川、陕西、湖南、湖北、福建、浙江、江西等地。 吴茱萸花单性，雌雄异株，苗期雌雄株不易分辨且不同株系果实有效成分含量差 异大，造成生产上品种混杂严重，单位面积果实产量低；而传统的种子或插条育苗方式，繁 殖系数低，分别仅为40-55% (而雄株率高达50% )和10%左右；严重影响到优良品种的 大规模应用和药材品质的一致性和稳定性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种吴茱萸的组织培养方法，采用该方法能获得 大量的吴茱萸的种苗。 为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种吴茱萸组织培养的方法，依次包括以下 步骤 1)、取无病斑、生长健壮的吴茱萸嫩芽进行流水冲洗； 2)、将上述流水冲洗后的嫩芽经常规消毒，然后切成0. 5 1. Ocm长的小段嫩芽I， 将上述小段嫩芽I接种到诱导不定芽培养基上进行培养；培养条件为16小时光照，光照强 度30 40 ii mol m—2. s—、温度为26 28°C ;8小时暗培养，温度为20 22°C ;上述光照和 暗培养交替进行； 3)、待小段嫩芽I上长出的不定芽长至2.0 3.0cm高的小苗I时，割取小苗I ; 将此小苗I切成0. 5 1. 2cm长的茎段I，将上述茎段I接种到增殖培养基上进行培养；培 养条件为16小时光照，光照强度30 40 ii mol m—2. s—、温度为26 28°C ;8小时暗培养， 温度为20 22°C ;上述光照和暗培养交替进行； 4)、待茎段I上长出的不定芽长至2.0 5.0cm高的小苗时II，割取小苗n ;将此 小苗II切成0. 8 1. 2cm长的茎段II，将上述茎段II接种到增殖培养基上进行培养；培 养条件为16小时光照，光照强度30 40 ii mol m—2. s—、温度为26 28°C ;8小时暗培养， 温度为20 22°C ;上述光照和暗培养交替进行； 5)、待茎段II上长出的不定芽长至3.0 5.0cm高的小苗ni时，割取小苗III ; 将此小苗III接种到生根培养基中；6)、待上述小苗III长出大于2cm的至少3条根时，得可出瓶种植的种苗。作为本专利技术的吴茱萸的组织培养法的改进步骤2)中的诱导不定芽培养基为MS基本培养基+BA 0. 5 1. Omg/l+IBA 0. 1 0. 5mg/l+糖20 30g/l+琼脂5 9g/1， pH为5. 5 6. 0。 诱导不定芽培养基的制作方法具体如下以MS基本培养基作为基础，分别加入 6_苄基腺嘌呤(BA)、乙哚丁酸(IBA)、糖和琼脂，均匀混合，利用lmol/L的K0H或lmol/L的 HC1调节pH为5. 5 6. 0 ;每1L的MS基本培养基中加0. 5 1. Omg BA、0. 1 0. 5mg IBA、 20 30g糖和5 9g琼脂。 作为本专利技术的吴茱萸的组织培养法的进一步改进步骤3)和步骤4)中的增殖培 养基均为MS基本培养基+BA 0. 3 1. Omg/l+IBA 0. 1 0. 3mg/l+糖20 30g/l+琼脂 5 9g/l， pH为5. 5 6. 0。 增殖培养基的制作方法具体如下以MS基本培养基作为基础，分别加入6-苄基 腺嘌呤(BA)和乙哚丁酸(IBA)、糖和琼脂，均匀混合，利用lmol/L的KOH或lmol/L的HC1 调节pH为5. 5 6. 0 ;每1L的MS基本培养基加0. 3 1. Omg BA、0. 1 0. 3mg IBA、20 30g糖和5 9g琼脂。 作为本专利技术的吴茱萸的组织培养法的进一步改进步骤5)中的生根培养基为 1/2MS基本培养基+NAA 0. 2 0. 5mg/l+糖30g/l+琼脂5 9g/l， pH为5. 5 6. 0。 生根培养基的制作方法具体如下以1/2MS基本培养基(即溶液中所有物质的含 量为MS基本培养基的一半)作为基础，分别加入萘乙酸(NAA)、糖、琼脂，均匀混合，利用 lmol/L的KOH或lmol/L的HC1调节pH为5. 5 6. 0 ;每1L的1/2MS基本培养基加入0. 2 0. 5mgNAA、30g糖禾口 5 9g琼脂。 作为本专利技术的吴茱萸的组织培养法的进一步改进步骤1)为将吴茱萸嫩芽放入 烧杯中，自来水冲洗1 2小时。 本专利技术所用的吴茱萸嫩芽的来源是购自浙江星光农业开发有限公司。 本专利技术的吴茱萸的组织培养法(离体培养的方法)，属于一种诱导吴茱萸快速繁殖的组织培养方法。依照植物组织培养中细胞全能性的原理，可以在短时间内生产大量遗传背景相同、长势一致的优质种苗，而且依靠实验室可以实现周年的长期提供优质种苗。在本专利技术的方法中，将健壮的吴茱萸嫩芽先进行消毒，再通过合适的诱导培养基诱导获得一定量的无菌苗。采用本专利技术的方法，一般仅需60 80天即可得到可出瓶种植的种苗；因此吴茱萸试管苗一周年内的繁殖系数理论上为512倍以上。本专利技术的吴茱萸组织培养法，是一种不受季节等因素影响，高效、快速提供优质吴茱萸苗的方法，可以加速良种推广速度，提高田间品种种植产量。 本专利技术所得的种苗可采用以下方法进行种植把具有至少3条长于2cm根的种苗 移出培养瓶，洗净其根部培养基，移栽到基质(由体积比为3 : 1 : l的泥炭、珍珠岩和蛭 石组成)中，于人工气候箱室培养，培养条件温度20 25t:，湿度85% 90%， 14 16 小时光照，光照强度15 25 ii mol m—2. s—、 10 8小时暗培养，上述光照和暗培养交替进 行；3 5周后，14 16小时光照，光照强度30 40iimo1 m—2. s—、 10 8小时暗培养，上述光照和暗培养交替进行。 2个月后，存活率达到90%以上。 对购自浙江星光农业开发有限公司的10个株系wzyl wzy10，首先按照本专利技术的 方法获得种苗，然后再将种苗按照上述方法进行种植，存活率均能达到90%以上。具体实施例方式实施例1、一种吴茱萸的组织培养法，依次进行以下步骤 1)、取无病斑、生长健壮的吴茱萸嫩芽放入烧杯中，自来水冲洗1 2小时； 2)、将上述嫩芽经常规消毒后(即0. 1 % w/v HgCl2处理6 10分钟后，无菌水冲 洗5 8遍，然后用无菌滤纸吸干)，切成lcm左右的小段嫩芽I，接种到诱导不定芽培养基 上进行培养；培养条件为16小时光照，光照强度30 40 ii mol m—2. s—、温度为26 28°C; 8小时暗培养，温度为20 22°C ;上述光照和暗培养交替进行； 诱导不定芽培养基为MS基本培养基+BA 0. 8mg/l+IBA 0. 3mg/l+糖25g/l+琼脂 7g/l，pH为5.7。 3)、待小段嫩芽I上长出的不定芽长至2.0 3.0cm高的小苗I时，割取小苗I ; 将此小苗I切成lcm左右的茎段I，将上述茎段I接种到增殖培养基上进行培养；培养条件 为16小时光照，光照强度30 40 ii mol m—2. s—、温度为26 28°C ;8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种吴茱萸的组织培养法，其特征是依次包括以下步骤：１）、取无病斑、生长健壮的吴茱萸嫩芽进行流水冲洗；２）、将上述流水冲洗后的吴茱萸嫩芽经常规消毒，然后切成０．５～１．０ｃｍ长的小段嫩芽Ⅰ，将上述小段嫩芽Ⅰ接种到诱导不定芽培养基上进行培养；培养条件为：１６小时光照，光照强度３０～４０μｍｏｌｍ↑［－２］．ｓ↑［－１］，温度为２６～２８℃；８小时暗培养，温度为２０～２２℃；上述光照和暗培养交替进行；３）、待小段嫩芽Ⅰ上长出的不定芽长至２．０～３．０ｃｍ高的小苗Ⅰ时，割取小苗Ⅰ；将此小苗Ⅰ切成０．５～１．２ｃｍ长的茎段Ⅰ，将上述茎段Ｉ接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为：１６小时光照，光照强度３０～４０μｍｏｌｍ↑［－２］．ｓ↑［－１］，温度为２６～２８℃；８小时暗培养，温度为２０～２２℃；上述光照和暗培养交替进行；４）、待茎段Ⅰ上长出的不定芽长至２．０～５．０ｃｍ高的小苗Ⅱ时，割取小苗Ⅱ；将此小茁Ⅱ切成０．８～１．２ｃｍ长的茎段Ⅱ，将上述茎段Ⅱ接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为：１６小时光照，光照强度３０～４０μｍｏｌｍ↑［－２］．ｓ↑［－１］，温度为２６～２８℃；８小时暗培养，温度为２０～２２℃；上述光照和暗培养交替进行；５）、待茎段Ⅱ上长出的不定芽长至３．０～５．０ｃｍ高的小苗Ⅲ时，割取小苗Ⅲ；将此小曲Ⅲ接种到生根培养基中；６）、待上述小苗Ⅲ长出大于２ｃｍ的至少３条根时，得可出瓶种植的种苗。...

【技术特征摘要】
一种吴茱萸的组织培养法，其特征是依次包括以下步骤1)、取无病斑、生长健壮的吴茱萸嫩芽进行流水冲洗；2)、将上述流水冲洗后的吴茱萸嫩芽经常规消毒，然后切成0.5～1.0cm长的小段嫩芽I，将上述小段嫩芽I接种到诱导不定芽培养基上进行培养；培养条件为16小时光照，光照强度30～40μmol m-2.s-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；3)、待小段嫩芽I上长出的不定芽长至2.0～3.0cm高的小苗I时，割取小苗I；将此小苗I切成0.5～1.2cm长的茎段I，将上述茎段I接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为16小时光照，光照强度30～40μmol m-2.s-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；4)、待茎段I上长出的不定芽长至2.0～5.0cm高的小苗II时，割取小苗II；将此小茁II切成0.8～1.2cm长的茎段II，将上述茎段II接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为16小时光照，光照强度30～40μmol m-2.s-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛碧增，陈银龙，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]