检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法及其试剂盒，属于蔬菜分子遗传育种技术领域。方法包括：（１）瓠瓜基因组ＤＮＡ的提取；（２）ＰＣＲ扩增；（３）ＰＣＲ扩增产物的凝胶电泳分析；和（４）瓠瓜样品白粉病抗性的鉴定等步骤。只需通过检测瓠瓜样品材料的基因组内，是否存在有与抗白粉病基因紧密连锁的特异片段，即可确定该材料是否具对瓠瓜白粉病的抗性。该方法具简单易行、快速灵敏、结果准确、成本低廉等特点，检测过程只需４～５小时，而成本仅为传统表型鉴定的二十分之一左右。可在蔬菜育种、种子鉴定部门推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蔬菜分子遗传育种
，尤其涉及一种利用分子标记技术，准确、快速检测瓠瓜对白粉病抗性的检测方法和与该方法配套使用的试剂盒。
技术介绍
夸瓜瓜(Lagenaria siceraria (Molina) Standi)白粉病(Powdery mildew)，是由单 丝壳白粉菌(Sphaerotheca fuliginea)侵染引起的一种常见的瓠瓜真菌病害，全国各地以 及各种栽培方式下都有发生。该病从苗期至成株期均可为害，尤以生长中、后期危害较重， 常造成大量减产和品质下降，给瓠瓜生产造成了严重威胁(司凤举，司越，瓠瓜白粉病的发 生与防治，长江蔬菜，2007，7 :31)。培育抗病品种是防治瓠瓜白粉病最为安全、有效和经济 的措施之一。但是瓠瓜白粉病的发生受环境影响很大，且其病原菌需活体保存，这对在育 种过程中必须进行的室内、外菌种接种鉴定带来了很大的不便；同时，目前对该病抗病性的 鉴定、分级复杂，且尚无统一的标准。因此，传统的瓠瓜抗白粉病品种育种方法存在有主观 性强，准确性低等缺陷；特别是瓠瓜植株的株型较大，依赖对大量材料的表型进行筛查的方 法，则更加费时、费地、费力。本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法，其特征在于按以下步骤进行：（１）瓠瓜基因组ＤＮＡ的提取：将各待检测瓠瓜样品用ＣＴＡＢ法提取基因组ＤＮＡ后，分别保存，备用；（２）基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增：将瓠瓜各样品基因组ＤＮＡ２０ｎｇ，分别加入各ＰＣＲ管中，并在各管中再依次加入鉴定瓠瓜白粉病抗性的上、下游引物各０．２μＭ，ｄＮＴＰ０．２５ｍＭ，ＭｇＣｌ↓［２］２．０ｍＭ，１倍的ＰＣＲ缓冲液及ＴａｑＤＮＡ聚合酶１单位，并加无菌重蒸水至２０μｌ后，在９４℃预变性２ｍｉｎ，９４℃３０ｓｅｃｏｎｄｓ，４８～５０℃退火３０ｓｅｃｏｎｄｓ，７２℃延伸６０ｓｅｃｏｎｄｓ，３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ下进行扩增，产物４...

【技术特征摘要】
检测瓠瓜白粉病抗性的分子标记方法，其特征在于按以下步骤进行(1)瓠瓜基因组DNA的提取将各待检测瓠瓜样品用CTAB法提取基因组DNA后，分别保存，备用；(2)基因组DNA的PCR扩增将瓠瓜各样品基因组DNA 20ng，分别加入各PCR管中，并在各管中再依次加入鉴定瓠瓜白粉病抗性的上、下游引物各0.2μM，dNTP 0.25mM，MgCl2 2.0mM，1倍的PCR缓冲液及Taq DNA聚合酶1单位，并加无菌重蒸水至20μl后，在94℃预变性2min，94℃30seconds，48～50℃退火30seconds，72℃延伸60seconds，30个循环，72℃延伸10min下进行扩增，产物4℃保存；所述鉴定瓠瓜白粉病抗性的上游引物序列为5’-CATGAAAGAAAATCGGCTTGG-3’；下游引物序列为5’-TAACTCCAGCACTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玲平，吴晓花，汪宝根，李国景，徐沛，刘永华，鲁忠富，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]