本发明专利技术公开了与西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的连锁SSR分子标记（Pm-136），属于蔬菜分子抗病育种技术领域，涉及白粉病显性抗病基因的连锁SSR分子标记及其应用。所述的分子标记Pm-136与抗病基因的遗传距离为1.7 cm。利用分子标记Pm-136可快速准确的检测抗病性状转育后代植株是否携带Pm1抗病基因，从而显著提高抗病育种效率，缩短育种周期。本发明专利技术获得的Pm-136标记具有稳定可靠、操作简单、重复性好等优点，在鉴别抗、感品种和抗病转育单株时具有非常高的利用价值。
【技术实现步骤摘要】
西葫芦白粉病显性抗病基因pm1的连锁分子标记及其应用
本专利技术涉及蔬菜分子抗病育种
，具体为一种与西葫芦（CucurbitapepoL.）白粉病显性抗病基因Pm1连锁的SSR分子标记，以及该标记在检测抗病植株中的应用。
技术介绍
西葫芦是全球范围内普遍栽植的南瓜属重要蔬菜之一，在我国的栽培面积逐年增加，特别是近年来保护地设施栽培发展迅速，已成为继黄瓜之后的第二大栽培作物。西葫芦生产对农民增收、农业结构调整以及丰富人民的菜篮子有着重要意义。白粉病是危害西葫芦中后期生产的重要病害之一，植株感染白粉病后光合作用严重降低，植株生长缓慢，降低产量与品质，产量损失可达40%左右。西葫芦白粉病主要由单囊壳菌（Sphaerothecafuliginea）和二孢白粉菌（Erysiphecichoracearum）侵染导致，西葫芦对白粉病没有免疫类型，高抗材料也非常少，随着保护地西葫芦生产面积的迅速增加，在高温高湿的环境下，白粉病的发生变的越来越为严重，已经成为西葫芦生产和制种的主要障碍。尽管白粉病可采用化学防治，但由于危害西葫芦白粉病的生理小种较多，分化快，化学药剂很难有效保证生产，而且化学防治污染环境，危害消费者健康。因此，培育和推广抗白粉病品种是解决这一问题最经济、安全、有效的措施。但目前，传统抗病育种存在抗病基因转育困难，抗病性状鉴别准确性差，抗病育种效率低、周期长等问题，导致生产中抗病品种少，不能满足生产需要。紧密连锁的分子标记可以加速抗病育种进程、提高选择的准确性，是分子标记辅助选择育种的必要条件。而与瓜类白粉病抗性连锁的分子标记的研究主要集中在西瓜、甜瓜及黄瓜上，国内外至今未见西葫芦的相关研究报道。因此，开发与西葫芦白粉病抗病基因紧密连锁的分子标记，对于提高西葫芦抗病育种效率，拓展抗病基因应用范围，保障西葫芦的健康生产具有重要的实际应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有西葫芦白粉病抗病育种技术的上述不足，提供西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的分子标记。本专利技术的另一目的是提供该西葫芦白粉病抗病基因Pm1的分子标记应用。本专利技术的一个目的提供西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的分子标记可通过如下技术方案实现：西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的连锁SSR分子标记，所述的分子标记为Pm-136，其具有分子序列表中SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所述的DNA序列。为实现上述专利技术目的获得分子标记是通过以下方案实现的：所述分子标记的获得方法包括如下步骤：应用SSR-BSA技术：以西葫芦自交系BS15和BS9分别作为感病和抗病亲本配制F2代分离群体，用SSR引物筛选与西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1连锁的分子标记，得到共显性分子标记Pm-136，该标记与抗病基因Pm1的遗传连锁距离为1.7cM。本专利技术的另一目的是通过以下方案实现的。一种所述分子标记在对西葫芦种质资源白粉病抗病基因的鉴定和转移中的应用。本专利技术的另一目的是通过以下方案实现的。一种检测西葫芦白粉病抗病基因Pm1的方法，用以下的一对分子标记引物PCR扩增待检测西葫芦基因组DNA，并检测扩增产物：分子标记Pm-136：左端引物序列为SEQIDNO.1，右端引物序列为SEQIDNO.2，如果用引物Pm-136能够扩增出131bp的扩增片段，则标志着待检测西葫芦存在白粉病显性抗病基因Pm1。检测方法的条件是：所述PCR反应体积为15μL，其中10×buffer1.5μL，2.5mMdNTPs0.3μL，Tag酶0.2μL，10μM引物各0.3μL，模版DNA30ng，加ddH2O至15μL；PCR反应的条件为DNA95℃预变性3min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次，最后72℃延伸10min。本专利技术的另一目的是通过以下方案实现的。一种筛选抗白粉病抗病基因Pm1西葫芦的方法，用所述的分子标记对扩增待检西葫芦基因组DNA，用所述的分子标记Pm-136能够扩增出131bp的扩增片段，则标志该待检西葫芦为存在Pm1抗病基因的抗白粉病毒病西葫芦。筛选方法的条件是：所述PCR反应体积为15μL，其中10×buffer1.5μL，2.5mMdNTPs0.3μL，Tag酶0.2μL，10μM引物各0.3μL，模版DNA30ng，加ddH2O至15μL；所述PCR反应的条件为DNA95℃预变性3min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次，最后72℃延伸10min。有益效果：本专利技术在西葫芦自交系BS9中发现了一个白粉病显性抗病基因Pm1，其优异的抗病表现在西葫芦抗病育种中具有重要的利用价值。获得了与抗病基因紧密连锁的分子标记Pm-136。利用获得的分子标记进行辅助选择，成功的将抗病基因通过杂交、回交转育的方法导入西葫芦优良自交系BS15中，使其获得白粉病抗性。1、在西葫芦自交系BS9中鉴定了一个白粉病显性抗病基因Pm1。2、获得与西葫芦白粉病抗病基因Pm1紧密连锁的共显性分子标记Pm-136。Pm-136与抗病基因的遗传距离为1.7cm。利用该标记能够通过辅助选择鉴定将抗病基因成功导入其它西葫芦感病优良自交系，使之获得抗病性状。3、鉴定方便。分子标记具有扩增稳定、检测方便、快速准确等优点。用标记Pm-136检测西葫芦抗病基因Pm1，可以确定抗病基因是否存在以及存在状态，并预测植株对白粉病的抗性，加快该抗病基因的利用。4、本专利技术提出了利用西葫芦白粉病抗病种质资源BS9中抗病基因的方法：利用分子标记筛选，通过杂交与回交转育将抗病基因导入西葫芦优良的感病自交系中，利用该方法成功将抗病基因Pm1导入西葫芦优良自交系BS15，使其获得了白粉病抗性。附图说明图1为分子标记Pm-136与西葫芦抗病基因Pm1的遗传连锁图，左边为标记间的图距；图2为分子标记扩增带型；Pm-136扩增带型，其中P1为感病亲本BS15，P2为抗病亲本BS9，F1为杂交一代；1-23为以BS15为轮回亲本的回交单株；M：TransDNAmarkerII,箭头所指为131bp特异扩增条带。具体实施方式实施例1西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的连锁SSR分子标记，所述的分子标记为Pm-136，其具有序列表中SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所述的DNA序列。所述的西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的连锁SSR分子标记的获得方法，、包括如下步骤：应用SSR-BSA技术：以西葫芦自交系BS15和BS9分别作为感病和抗病亲本配制F2代分离群体，用SSR引物筛选与西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1连锁的分子标记，得到共显性分子标记Pm-136，该标记与抗病基因Pm1的遗传连锁距离为1.7cm。所述的分子标记在对西葫芦种质资源白粉病抗病基因的鉴定和转移中的应用。一种检测西葫芦白粉病抗病基因Pm1的方法，包括以下步骤：用以下的一对分子标记引物PCR扩增待检测西葫芦基因组DNA，并检测扩增产物：分子标记Pm-136：左端引物序列为SEQIDNO.1，右端引物序列为SEQIDNO.2，用所述分子标记Pm-136能够扩增出131bp的扩增片段，则标志着待检测西葫芦存在白粉病显性抗病基因Pm1。进一步的，所述PCR反应体积为15μL，其中10×buffer1.5μL，2.5本文档来自技高网...
【技术保护点】
西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1的连锁SSR分子标记，其特征在于，所述的分子标记为Pm‑136，其具有序列表中SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所述的DNA序列。
【技术特征摘要】
1.一种SSR分子标记在对西葫芦种质资源白粉病抗病基因的鉴定和转移中的应用，所述的分子标记为Pm-136，其具有如序列表SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的DNA序列，该标记与抗病基因Pm1的遗传连锁距离为1.7cm，所述分子标记的长度为131bp。2.一种如权利要求1中所述的SSR分子标记的获得方法，其特征在于，包括如下步骤：应用SSR-BSA技术：以西葫芦自交系BS15和BS9分别作为感病和抗病亲本配制F2代分离群体，用SSR引物筛选与西葫芦白粉病显性抗病基因Pm1连锁的分子标记，得到共显性分子标记Pm-136，该标记与抗病基因Pm1的遗传连锁距离为1.7cm。3.一种检测西葫芦白粉病抗病基因Pm1的方法，其特征在于，用以下的一对分子标记引物PCR扩增待检测西葫芦基因组DNA，并检测扩增产物：分子标记Pm-136：左端引物序列如SEQIDNO.1所示，右端引物序列如SEQIDNO.2所示，用引物对SEQIDNO.1、SEQIDNO.2能够扩增出131bp的扩增片段，则标志着待检测西葫芦存在白粉病显性抗病基因Pm1。4.根据权利要求3所述的检测西葫芦白粉病抗病基因Pm1的方法，其特征在于，扩增反应体积为15μL，其中10×buf...
【专利技术属性】
技术研发人员：李海真，张国裕，张帆，贾长才，姜立纲，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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