【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
1、介导细胞毒性和吞噬效应子功能的能力是抗体破坏靶细胞的有效机制。fc区通过与fc受体和配体的相互作用将抗体的识别结构域与这些效应子功能连接。通过改变fc区来操纵这些效应子功能在许多医学病状的治疗中具有重要意义，例如癌症、自身免疫性疾病和传染病。
2、本专利技术提供了具有有利性质的经修饰的犬和经修饰的猫fc区(与wt相比)。
3、已知犬igg-a和igg-d是效应子功能缺陷型，而igg-b和igg-c是效应子功能熟练型。然而，由于其其它特性，如蛋白a结合能力和与其它犬igg相比相对较长的半衰期，igg-b是目前用于治疗性抗体的主要igg。因此，产生效应子功能无效犬igg-b对某些治疗领域具有吸引力。
4、当与包括野生型igg-b fc结构域的相同多肽相比时，本专利技术人已经修饰了犬igg-b以减少或消除犬igg-b效应子功能。基于结构分析，fc结构域的氨基酸序列中用于修饰的靶向的区包含基于氨基酸序列基序的下部铰链、脯氨酸区和shed区，其中发生与fcγr和c1q的潜在相互作用。fc变体在完全基于犬细胞的功能测定中的作用已得到证实。
5、尽管对于猫igg的了解较少，但先前对天然猫igg同种型的表征工作已经确定了两个同种型，称为igg1和igg2。igg1已被证明是效应子功能熟练型，而igg2是效应子功能缺陷型。然而，igg2发挥铰链二硫键不稳定性，类似于人igg4。这阻碍了野生型igg2直接用于治疗应用的应用。因此，修饰猫
6、使用与犬igg-b修饰相同的方法，当与包括野生型猫igg1 fc结构域的相同多肽相比时，本专利技术人已经修饰了猫igg1以减少或消除猫igg1效应子功能。基于结构分析，fc结构域的氨基酸序列中用于修饰的靶向的区包含基于氨基酸序列基序的下部铰链、脯氨酸区和shed区，其中发生与fcγr和c1q的潜在相互作用。fc变体的作用在基于细胞的功能测定中得到证明。
7、因此，本专利技术提供了分离的伴侣动物，例如犬、猫和马fc变体，包含物种化变体，其提供减少的补体和fcγr介导的效应子功能。fc变体是分离的多肽(例如抗体或抗体片段)的一部分。
8、本专利技术的fc变体包括相对于野生型fc的一个或多个氨基酸取代，其中所述取代改变与补体蛋白c1q的结合或降低cdc、adcc和/或adcp活性。因此，本专利技术涉及fc变体，例如犬、马或猫变体，与天然野生型序列相比，在fc结构域中具有一个或多个修饰，其中所述修饰是下部铰链、脯氨酸区和shed区中的氨基酸取代。
9、参考如seq id no:11所示的野生型犬igg-b恒定区序列和如seq id no:31所示的猫igg1恒定区序列，所述下部铰链包括残基119-125，所述脯氨酸区包括残基211-217，并且所述shed区包括残基151-156。图2a和图15a分别展示了犬和猫恒定区的结构域和残基编号。与野生型相比，下部铰链、脯氨酸区和shed区中的根据本专利技术的犬变体序列在图2a中示出，并且与野生型相比，下部铰链、脯氨酸区、shed区中的根据本专利技术的猫变体序列在图15a中示出。残基的编号参考犬fc的seq id no:11(图2b)，并且参考猫fc的seq id no:31(图15b)。这些参考序列分别示出了犬iggb和猫igg1野生型恒定区氨基酸序列。图1示出了完整的犬igg同种型野生型序列，并且图13示出了先前鉴定的猫igg1和igg2同种型。其还示出了一种新的同种型igg3，其由本专利技术人鉴定、分离和表征。
10、因此，本专利技术涉及一种犬嵌合或犬化igg-b多肽或其fc区，如下文进一步描述的。本专利技术涉及一种猫嵌合或猫化igg1多肽或其fc区，如下文进一步描述的。本专利技术涉及一种分离的猫igg3多肽或其部分以及包括igg3多肽或其部分的重组抗体分子。
11、一方面，本专利技术涉及一种犬嵌合或犬化igg-b多肽或其fc区，其包括经修饰的fc区，其中所述fc区包括
12、a)选自以下的氨基酸取代：在seq id no:11的位置119处变为g的修饰、在seq idno:11的位置120处变为s或a的氨基酸取代和/或在seq id no:11的位置121处变为a的氨基酸取代；和/或
13、b)在seq id no:11的位置156处变为n的氨基酸取代；和/或
14、c)选自以下修饰中的一种修饰的氨基酸取代：
15、c1)在seq id no:11的位置211处变为h的修饰与在seq id no:11的位置212处变为i的氨基酸取代和在seq id no:11的位置213处变为g的氨基酸取代的组合；
16、c2)在seq id no:11的位置215处变为g的氨基酸取代；
17、c3)在seq id no:11的位置217处变为s的氨基酸取代；或
18、c4)c1至c3的组合。
19、一方面，本专利技术涉及犬嵌合或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括如下文a)中所述的氨基酸取代以及任选地如下文b)和/或下文c)中所述的氨基酸取代，其中
20、a)所述氨基酸取代选自在seq id no:11的位置119处变为g的修饰、在seq id no:11的位置120处变为s或a的氨基酸取代和/或在seq id no:11的位置121处变为a的氨基酸取代；
21、b)所述氨基酸取代选自在seq id no:11的位置153处变为g的修饰、在seq id no:11的位置154处变为r的氨基酸取代和/或在seq id no:11的位置156处变为n的氨基酸取代，和/或
22、c)所述氨基酸取代选自在seq id no:11的位置211处变为h的修饰、在seq id no:11的位置212处变为i的氨基酸取代、在seq id no:11的位置213处变为g的氨基酸取代、在seq id no:11的位置215处变为g的氨基酸取代和/或在seq id no:11的位置217处变为s的氨基酸取代。
23、一方面，本专利技术涉及犬嵌合或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
24、1)fc区，所述fc区包括
25、a)在seq id no:11的位置120处变为s的氨基酸取代；以及
26、b)在seq id no:11的位置211处变为h的氨基酸取代、在seq id no:11的位置212处变为i的氨基酸取代和在seq id no:11的位置213处变为g的氨基酸取代，或
27、2)fc区，所述fc区包括
28、a)在seq id no:11的位置120处变为s的氨基酸取代；
29、b)在seq id no:11的位置153处变为g的氨基酸取代和在seq id no:11本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其包括经修饰的Fc区，其中所述Fc区包括
2.根据权利要求1所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括如下文a)中所述的氨基酸取代以及任选地如下文b)和/或下文c)中所述的氨基酸取代，其中
3.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
4.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
5.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
6.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括在SEQID NO:11的位置120处变为A和在位置121处变为A的氨基酸取代。
7.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
8.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
9.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包
10.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
11.根据权利要求1或2所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括
12.根据权利要求1所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述多肽包括SEQ IDNO:12、13、14、15、16、17、18、19或20或与其具有至少90％或95％序列同一性的序列。
13.根据前述权利要求所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中当与包括野生型IgG-B Fc结构域的相同多肽相比时，所述多肽具有降低的Fc介导的效应子功能。
14.根据权利要求13所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
15.根据权利要求13所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述效应子功能是补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)。
16.根据前述权利要求所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中当与包括野生型IgG1Fc结构域的相同多肽相比时，所述多肽对Fcγ受体(FcγR)具有较低的亲和力。
17.根据前述权利要求所述的犬或犬化IgG-B多肽或其Fc区，其中所述多肽或Fc区保留FcRn结合。
18.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其Fc区。
19.一种用于抑制效应子功能的体外、离体或体内方法，所述方法包括使细胞或组织与根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其Fc区接触。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述效应子功能是补体依赖性细胞毒性(CDC)。
22.一种核酸，其编码根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其Fc区。
23.一种载体，其包括根据权利要求22所述的核酸或其Fc区。
24.一种宿主细胞，其包括根据权利要求22所述的核酸或根据权利要求23所述的载体。
25.一种试剂盒，其包括根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其Fc区或根据权利要求18所述的药物组合物。
26.一种猫或猫化IgG-1多肽或其Fc区，其包括经修饰的Fc区，其中所述Fc区包括
27.根据权利要求26所述的猫或猫化IgG-1多肽或其Fc区，其包括经修饰的Fc区，其中所述Fc区包括
28.根据权利要求26或27所述的猫或猫化IgG-1多肽或其Fc区，其包括经修饰的Fc区，其中所述Fc区包括在SEQ ID NO:31的位置120处变为A的氨基酸取代、在SEQ ID NO:31的位置121处变为A的氨基酸取代和在SEQ ID NO:31的位置217处变为S的氨基酸取代。
29.根据权利要求26或27所述的猫或猫化IgG-1多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括在SEQ ID NO:31的位置120处变为A的氨基酸取代、在SEQ ID NO:31的位置121处变为A的氨基酸取代和在SEQ ID NO:31的位置215处变为G的氨基酸取代。
30.根据权利要求26或27所述的猫或猫化IgG-1多肽或其Fc区，其中所述Fc区包括在SEQ ID NO:31的位置120处变为I的氨基酸取代、在SEQ ID NO:31的位置121处变为P...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其包括经修饰的fc区，其中所述fc区包括
2.根据权利要求1所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括如下文a)中所述的氨基酸取代以及任选地如下文b)和/或下文c)中所述的氨基酸取代，其中
3.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
4.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
5.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
6.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括在seqid no:11的位置120处变为a和在位置121处变为a的氨基酸取代。
7.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
8.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
9.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
10.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
11.根据权利要求1或2所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述fc区包括
12.根据权利要求1所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述多肽包括seq idno:12、13、14、15、16、17、18、19或20或与其具有至少90％或95％序列同一性的序列。
13.根据前述权利要求所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中当与包括野生型igg-b fc结构域的相同多肽相比时，所述多肽具有降低的fc介导的效应子功能。
14.根据权利要求13所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)。
15.根据权利要求13所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述效应子功能是补体依赖性细胞毒性(cdc)或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(adcp)。
16.根据前述权利要求所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中当与包括野生型igg1fc结构域的相同多肽相比时，所述多肽对fcγ受体(fcγr)具有较低的亲和力。
17.根据前述权利要求所述的犬或犬化igg-b多肽或其fc区，其中所述多肽或fc区保留fcrn结合。
18.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其fc区。
19.一种用于抑制效应子功能的体外、离体或体内方法，所述方法包括使细胞或组织与根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其fc区接触。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述效应子功能是补体依赖性细胞毒性(cdc)。
22.一种核酸，其编码根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其fc区。
23.一种载体，其包括根据权利要求22所述的核酸或其fc区。
24.一种宿主细胞，其包括根据权利要求22所述的核酸或根据权利要求23所述的载体。
25.一种试剂盒，其包括根据权利要求1至17中任一项所述的多肽或其fc区或根据权利要求18所述的药物组合物。
26.一种猫或猫化igg-1多肽或其fc区，其包括经修饰的fc区，其中所述fc区包括
27.根据权利要求26所述的猫或猫化igg-1多肽或其fc区，其包括经修饰的fc区，其中所述fc区包括
28.根据权利要求26或27所述的猫或猫化igg-1多肽或其fc区，其包括经修饰的fc区，其中所述fc区包括在seq id no:31的位...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·A·李，R·班迪耶拉，M·巴尔戴利，Y·帕特森，A·马奎特，
申请(专利权)人：佩特迈迪有限公司，
类型：发明
国别省市：
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