【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、核酸测序技术的发展已经在许多领域取得了数不胜数的进步。快速且可靠地测定dna和rna分子序列的能力使得分子生物学、进化生物学、医学诊断学和分子医学以及许多其它领域取得了许多进展。
2、然而，在使用某些边合成边测序或通过结合技术进行的测序时，能够可靠地获得的序列数据量可能限于相对少量的碱基。虽然短的序列读段在如snp分析和基因分型的应用中可能非常有用，但在许多情况下，能够可靠地获得相同模板分子的进一步序列数据可能是有利的。为此，已经使用了双端或成对测序技术，例如，特别是在全基因组鸟枪法测序的背景下。双端测序可以允许从单个多核苷酸双链体的两个位置确定序列的两个“读段(read)”。已知双端序列出现在单个双链体上并因此在基因组中连接或配对的认知可以极大地帮助将整个基因组序列组装成共有序列。从双端测序获得的另外的信息还能够有益于其它应用，例如，涉及对无细胞dna进行测序的应用，如循环肿瘤dna的检测和产前无细胞dna筛查。
3、本文提供用于进行双端测序的新颖且有用的组合物和方法。这些组合物和方法为多种测序...
【技术保护点】
1.一种用于双端测序的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸多联体通过以下来产生：
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述滚环扩增步骤在溶液中进行。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述滚环扩增步骤在固体支持物的表面上进行。
5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤ii)在步骤i)之后进行。
6.根据权利要求5所述的方法，其中在获得所述第一读段之后，将通过从所述第一引物测序形成的新生链在将所述第二测序引物与所述第二衔接子区域杂交之前去除。
7.根据权利要求6所述的方法，其中将通...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于双端测序的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸多联体通过以下来产生：
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述滚环扩增步骤在溶液中进行。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述滚环扩增步骤在固体支持物的表面上进行。
5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤ii)在步骤i)之后进行。
6.根据权利要求5所述的方法，其中在获得所述第一读段之后，将通过从所述第一引物测序形成的新生链在将所述第二测序引物与所述第二衔接子区域杂交之前去除。
7.根据权利要求6所述的方法，其中将通过从所述第一引物测序形成的所述新生链通过切割和洗涤、核酸外切酶消化或变性而去除。
8.根据权利要求5所述的方法，其中通过从所述第一引物测序形成的所述新生链未被去除。
9.根据权利要求8所述的方法，其中在将所述第二测序引物与所述第二衔接子区域杂交之前，将通过从所述第一引物测序形成的所述新生链的3′端进行阻断。
10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤i)和步骤ii)同时进行。
11.根据权利要求10所述的方法，其中从所述第一测序引物和所述第二测序引物测序以获得所述第一读段和第二读段包括检测信号，其中有助于获得所述第一读段的信号能够基于其强度与有助于获得所述第二读段的信号区分开来。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一测序引物和所述第二测序引物以不同的浓度提供。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述第二测序引物以可延伸寡核苷酸和不可延伸寡核苷酸的混合物的形式提供。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一测序引物和所述第二测序引物以显著不同的效率退火至它们各自的衔接子区域。
15.根据权利要求10所述的方法，其中从所述第一测序引物和所述第二测序引物测序以获得所述第一读段和所述第二读段包括映射到已知的参考序列。
16.根据权利要求1所述的方法，其中从所述第一测序引物和所述第二测序引物测序包括利用链置换聚合酶延伸所述第一测序引物和所述第二测序引物。
17.根据权利要求1所述的方法，其中从所述第一测序引物和所述第二测序引物测序在存在单链结合蛋白的情况下进行。
18.根据权利要求1所述的方法，其中进行测序过程以产生所述靶核酸序列的双端读段包括：在将所述第一测序引物与所述第一衔接子区域杂交之前合成与所述正向链互补的第一掩蔽链，以及在将所述第二测序引物与所述第二衔接子区域杂交之前合成与所述反向链互补的第二掩蔽链。
19.根据权利要求1所述的方法，其中从所述第一测序引物和所述第二测序引物测序包括通过结合技术进行测序。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸多联体包括至少100个顺序拷贝的所述第一衔接子...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·哈尼斯，R·H·瑞美，王琳，F·布洛克，K·帕特森，B·A·罗曼，A·斯帕克斯，E·霍罗维兹，J·威尔森，MJ·R·沈，
申请(专利权)人：加利福尼亚太平洋生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。