【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于控制hao1基因表达的方法和组合物，例如通过引入双链断裂进行hao1基因干扰或基因编辑。
技术介绍
1、ph1（1型原发性高草酸尿症）是一种遗传性疾病，其主要特征是草酸盐在体内异常积聚。这一现象源于agxt基因编码的酶，即丙氨酸乙醛酸氨基转移酶（agt或agt1）中的突变。正常情况下，agt在肝过氧化物酶体中将乙醛酸转化为甘氨酸。然而，在ph1患者中，突变型agt失去了对乙醛酸的正常分解功能，导致乙醛酸及其代谢产物草酸盐在体内累积。人体无法对草酸盐进行有效氧化，ph1患者体内的高水平草酸盐导致尿液中草酸盐水平异常升高，表现为高草酸尿症。
2、在ph1中，过量的草酸盐与钙结合，形成草酸钙，这可能导致在肾和其他器官中广泛沉积草酸钙。草酸钙的积聚可能引发肾钙质沉着症，或形成肾结石和膀胱结石，导致肾损伤。ph1患者常伴有一系列肾脏并发症，包括血尿症、尿路感染、肾损伤和终末期肾病(esrd)。随着时间的推移，患有ph1的患者的肾脏可能逐渐衰竭，血液中的草酸盐水平可能升高。草酸盐在全身组织中沉积，可能导致全身性草酸盐沉着症，其中高水平的血液草酸盐可能引发骨骼、皮肤和眼睛方面的并发症。患有ph1的患者通常在早年就会发展成肾衰竭，此时肾透析或双肾/肝器官移植成为唯一的治疗选择。
3、羟基酸氧化酶1（hao1，hydroxyacid oxidase 1，又称乙醇酸氧化酶[gox或go]）是一种将乙醇酸转化为乙醛酸的关键酶。有研究提出，在患有ph1的个体中抑制hao1将阻断乙醛酸的生成，使过量的乙醇酸通过尿
4、目前正在研究使用靶向hao1的小干扰rna(sirna)敲低或反义敲低以进行破坏的方法，但是仍然需要可以产生对hao1的长期抑制的治疗方法，本专利技术旨在提供一种长期或者永久性治疗ph1的方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供了使用crispr/cas系统敲除hao1基因的组合物和方法，以减少hao1蛋白的产生，从而显著降低或消除乙醛酸的生成。通过改变hao1基因，本专利技术提供了一种长期或永久性治疗ph1的方法。
2、在一些实施例中，本专利技术提供了使用引导rna与crispr/cas系统结合的dna结合剂的组合物，该组合物显著降低或敲除hao1基因的表达。通过这种方式，可以有效地阻断乙醛酸的生成，为ph1的治疗提供了一种新的途径。
3、本专利技术的实施例为治疗1型原发性高草酸尿症提供了创新的解决方案，为患者提供长期和可持续的疗效。
4、在一方面，本专利技术提供了一种组合物，其中所述组合物包含：
5、a. sgrna（单向导rna）或编码所述sgrna的核酸，所述sgrna包括：
6、i. 选自seq id no: 11- seq id no: 20中至少之一的sgrna；或者
7、ii. 与选自seq id no: 11- seq id no: 20中至少之一的序列具有至少90%相同的sgrna；或者
8、iii. 与选自seq id no: 5- seq id no: 20中至少之一的序列具有至少99%、98%、 97%、 96%、 95%、 94%、 93%、 92%、 91%或者90%相同sgrna；以及任选地
9、b. rna引导的dna结合剂或对rna引导的dna结合剂进行编码的核酸。
10、在某些实施例中，所述sgrna包括以下至少一种修饰：2’-o-甲基修饰、2’-o-(2-甲氧基乙基)修饰、2’-氟修饰和/或硫代磷酸酯修饰。本专利技术中所述的经修饰的sgrna可改良sgrna及sgrna/cas9复合物的稳定性，且改善cas9(例如spycas9及等效物)切割标靶dna的活性。
11、在某些实施例中，所述rna引导的dna结合剂是cas核酸酶。
12、在某些实施例中，所述rna引导的dna结合剂是来自ii型crispr/cas系统的cas核酸酶；任选地，所述cas核酸酶是cas9核酸酶。
13、在某些实施例中，所述rna引导的dna结合剂具有如seq id no:22所示的序列。
14、在某些实施例中，所述的编码rna引导的dna结合剂的mrna具有如seq id no: 21所示的序列。
15、在某些实施例中，所述组合物包含：
16、1) 包含如seq id no: 11所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
17、2) 包含如seq id no: 12所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
18、3) 包含如seq id no: 13所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
19、4) 包含如seq id no: 14所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
20、5) 包含如seq id no: 15所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
21、6) 包含如seq id no: 16所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
22、7) 包含如seq id no: 17所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
23、8) 包含如seq id no: 18所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
24、9) 包含如seq id no: 19所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂；或者
25、10) 包含如seq id no: 20所示的sgrna以及包含如seq id no: 22所示的rna引导的dna结合剂。
26、在某些实施例中，所述组合物包含：
27、1) 包含如seq id no: 11所示的sgrna以及包含如seq id no: 21所示的编码rna引导的dna结合剂的mrna；或者
28、2) 包含如seq id no: 12所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其中所述组合物包含：
2.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述sgRNA包括以下至少一种修饰：2’-O-甲基修饰、2’-O-(2-甲氧基乙基)修饰、2’-氟修饰和/或硫代磷酸酯修饰。
3.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述RNA引导的DNA结合剂是Cas核酸酶。
4.根据权利要求1或3中所述的组合物，其中，所述RNA引导的DNA结合剂是来自II型CRISPR/Cas系统的Cas核酸酶；任选地，所述Cas核酸酶是Cas9核酸酶。
5.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述RNA引导的DNA结合剂具有如SEQ ID NO:22所示的序列。
6.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述的编码RNA引导的DNA结合剂的mRNA具有如SEQ ID NO: 21所示的序列。
7.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述组合物包含：
8.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述组合物包含：
9.一种药物组合物，其中所述药物组合物包括权利要求1-7任一项所述的组合物以及药学
10.权利要求1-8任一项所述的组合物或权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于诱导在HAO1基因内引入双链断裂（DSB）或单链断裂（SSB）；用于减少、敲低或敲除HAO1基因的表达；治疗或预防一型原发性高草酸尿症（PH1）；治疗或预防由PH1引起的晚期肾脏疾病（ESRD）；治疗或预防钙草酸盐产生和沉积、高草酸尿症、草酸沉积症和血尿中的任何一种情况；增加血清甘氧酸浓度；降低受试者尿液中的草酸。
...【技术特征摘要】
1.一种组合物，其中所述组合物包含：
2.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述sgrna包括以下至少一种修饰：2’-o-甲基修饰、2’-o-(2-甲氧基乙基)修饰、2’-氟修饰和/或硫代磷酸酯修饰。
3.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述rna引导的dna结合剂是cas核酸酶。
4.根据权利要求1或3中所述的组合物，其中，所述rna引导的dna结合剂是来自ii型crispr/cas系统的cas核酸酶；任选地，所述cas核酸酶是cas9核酸酶。
5.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述rna引导的dna结合剂具有如seq id no:22所示的序列。
6.根据权利要求1中所述的组合物，其中，所述的编码rna引导的dna结合剂的mrna具有如s...
【专利技术属性】
技术研发人员：王邦，李安南，
申请(专利权)人：北京引正基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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