【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术及兽用生物制品，具体涉及一种非瘟病毒疫苗制备方法和该疫苗在非洲猪瘟检测防疫领域的应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever,asf)，是由非洲猪瘟病毒(african swinefever virus)asfv引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，其常表现出全身出血、呼吸障碍和神经症状等临床症状，具有病程时间短、高病死率等特征，在家猪中导致的死亡率接近100％，因此将其列为一类传染病，同时该病也是世界动物卫生组织(oie)的法定报告动物疫病之一。非洲猪瘟的传播和疫情的出现，对养猪生产已构成严重威胁，带来了巨大的经济损失，高度重视非洲猪瘟的防控对于保障生猪产业的健康发展极其重要。
2、非洲猪瘟(asf)的病原是非洲猪瘟病毒(asfv)，病毒主要的靶细胞是单核细胞和肺泡巨噬细胞。软蜱(钝缘蜱)是该病毒主要的传播媒介和贮藏宿主。asfv主要以家猪/野猪、家猪/软蜱/野猪、家猪/软蜱三种方式循环传播。非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟科非洲猪瘟病毒属的重要成员，病毒有些特性类似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直径为175－215纳米，呈20面体对称，由多层同心圆结构组成，由内到外依次是类核、核壳、内膜、衣壳和外囊膜。asfv基因组为双股线状dna，大小170－190kb，编码蛋白超过150种。在猪体内，非洲猪瘟病毒可在几种类型的细胞浆中，尤其是网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖，并使其成为主要的传播媒介。asfv基因组的两端通过部分碱基配对形成发夹环，中间区域
3、目前还没有针对非洲猪瘟的疫苗，如何阻断病毒在家猪中的传播，防止病毒在机体内的逃逸，对防御非洲猪瘟具有重大意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种非洲猪瘟疫苗及其制备方法。
2、在一些方面，本文提供下述任一项描述的专利技术。
3、1、一种针对非洲猪瘟病毒(african swine fever virus)asfv的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna疫苗编码asfv的ep153r抗原、cd2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、k205r抗原、b602l抗原、a238l抗原、a104r抗原，其中编码所述ep153r抗原的dna碱基序列如seq id no:10所示，编码所述cd2v抗原的dna碱基序列如seq id no:11所示，编码所述p72抗原的dna碱基序列如seq id no:12所示，编码所述p30抗原的dna碱基序列如seq id no:13所示，编码所述p54抗原的dna碱基序列如seq id no:14所示，编码所述k205r抗原的dna碱基序列如seq id no:15所示，编码所述b602l抗原的dna碱基序列如seq id no:16所示，编码所述a238l抗原的dna碱基序列如seq id no:17所示，和编码所述a104r抗原的dna碱基序列如seq id no:18所示。
4、2、根据1所述的mrna疫苗，其特征在于，mrna疫苗包含的抗原mrna为通过t7 rna聚合酶在体外转录获得。
5、3、根据1-2任一项所述的mrna疫苗，其特征在于，所述ep153r抗原、cd2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、k205r抗原、b602l抗原、a238l抗原、a104r抗原的mrna浓度为0.05-0.5mg/ml，优选为0.5mg/ml。
6、4、根据1-3任一项所述的mrna疫苗，其特征在于，所述ep153r抗原、cd2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、k205r抗原、b602l抗原、a238l抗原、a104r抗原的mrna之间所含比例为任意比例混合，优选为1:1:1:1:1:1:1:1:1。
7、5、1-4所述的抗原mrna组合，所述抗原mrna组合特点包括：
8、(1)所述抗原mrna组合的生产方法可为任意方法；
9、(2)根据所述抗原mrna组合制成的疫苗可降低非洲猪瘟的感染率；
10、(3)根据所述抗原mrna组合制成的疫苗可增加动物感染非洲猪瘟的存活率；
11、(4)根据所述抗原mrna组合制成的疫苗可缓解动物感染非洲猪瘟的发病症状。
12、6、1-4任一项所述的mrna疫苗的应用，其特征在于，所述mrna可用于防疫非洲猪瘟。
13、7、根据6所述的mrna疫苗的应用，其特征在于，所述mrna疫苗可单独使用。
14、8、根据6或7所述的mrna疫苗的应用，其特征在于，所述mrna疫苗可作为序贯免疫的首针疫苗使用。
15、9、1-4任一项所述的mrna疫苗或5所述抗原mrna组合在制备防疫非洲猪瘟的制品中的应用，所述制品包括，例如疫苗、药品、诊断试剂盒等。
16、为解决现有技术中存在的问题，在一方面，本专利技术分析并筛选了非洲猪瘟病毒中60余种抗原蛋白，并制备成苗进行猪体免疫，在二次免疫后，收集猪血液分离血清和外周血淋巴细胞，分别用免疫抗原蛋白进行抗体水平检测和ifn-γ试剂盒进行细胞因子水平检测，确定能够引起高抗体水平和高细胞因子水平的抗原，同时分析抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)ASFV的mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗编码ASFV的EP153R抗原、CD2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、K205R抗原、B602L抗原、A238L抗原、A104R抗原，优选地，其中编码所述EP153R抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:10所示，编码所述CD2v抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:11所示，编码所述p72抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:12所示，编码所述p30抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:13所示，编码所述p54抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:14所示，编码所述K205R抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:15所示，编码所述B602L抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:16所示，编码所述A238L抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:17所示，和编码所述A104R抗原的DNA碱基序列如SEQ ID NO:18所示。
2.根据权利要求1所述的mRNA疫苗，其特征在于，mRNA疫苗包含的抗原
3.根据权利要求1-2任一项所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述EP153R抗原、CD2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、K205R抗原、B602L抗原、A238L抗原、A104R抗原的mRNA浓度为0.05-0.5mg/ml，优选为0.5mg/ml。
4.根据权利要求1-3任一项所述的mRNA疫苗，其特征在于，所述EP153R抗原、CD2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、K205R抗原、B602L抗原、A238L抗原、A104R抗原的mRNA之间所含比例为任意比例混合，优选为1:1:1:1:1:1:1:1:1。
5.权利要求1-4任一项所述的mRNA疫苗的应用，其特征在于，所述mRNA可用于防疫非洲猪瘟。
6.根据权利要求5所述的mRNA疫苗的应用，其特征在于，所述mRNA疫苗可单独使用。
7.根据权利要求5或6所述的mRNA疫苗的应用，其特征在于，所述mRNA疫苗可作为序贯免疫首针疫苗使用。
8.权利要求1-4任一项所述的mRNA疫苗在制备防疫非洲猪瘟的制品中的应用，所述制品包括，例如疫苗、药品、诊断试剂盒。
...【技术特征摘要】
1.一种针对非洲猪瘟病毒(african swine fever virus)asfv的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna疫苗编码asfv的ep153r抗原、cd2v抗原、p72抗原、p30抗原、p54抗原、k205r抗原、b602l抗原、a238l抗原、a104r抗原，优选地，其中编码所述ep153r抗原的dna碱基序列如seq id no:10所示，编码所述cd2v抗原的dna碱基序列如seq id no:11所示，编码所述p72抗原的dna碱基序列如seq id no:12所示，编码所述p30抗原的dna碱基序列如seq id no:13所示，编码所述p54抗原的dna碱基序列如seq id no:14所示，编码所述k205r抗原的dna碱基序列如seq id no:15所示，编码所述b602l抗原的dna碱基序列如seq id no:16所示，编码所述a238l抗原的dna碱基序列如seq id no:17所示，和编码所述a104r抗原的dna碱基序列如seq id no:18所示。
2.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，mrna疫苗包含的抗原mrna为通过t7rna聚合酶在体外...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋春雨，陈鲁杰，兰青，陈小娟，
申请(专利权)人：浙江鼎持生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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