一种表达鸡VP2和鸡GAL-1融合蛋白的重组CHO细胞株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种表达鸡VP2和鸡GAL‑1融合蛋白的重组CHO细胞株及其构建方法和应用。本发明专利技术通过电转含有VP2‑GAL1序列的真核表达载体，经过单克隆细胞筛选，获得表达鸡传染性法氏囊病毒VP2‑GAL1融合蛋白的重组细胞株，该细胞株可实现蛋白的无血清、大规模、稳定生产；用VP2‑GAL1蛋白与白油佐剂乳化制成疫苗免疫SPF鸡后能够产生较高的针对VP2的中和抗体，且攻毒保护率提高。本发明专利技术可以应用于鸡传染性法氏囊亚单位疫苗的开发。

【技术实现步骤摘要】
一种表达鸡VP2和鸡GAL-1融合蛋白的重组CHO细胞株及其构建方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种能够高效表达鸡传染性法氏囊VP2和鸡GAL-1融合蛋白的重组CHO细胞株及其构建方法和应用。
技术介绍
传染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease,IBD)是由传染性法氏囊病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病。IBDV是目前危害世界养禽业的三大主要传染病之一，在我国被农业部列为重点防御的二类烈性传染病。IBDV对雏鸡有高度感染性，其特征是通过破坏法氏囊中的B淋巴细胞来摧毁其淋巴器官。IBDV属于双RNA病毒，主要有5种病毒蛋白，其中VP2占病毒蛋白的51％，是主要的结构蛋白，能够诱导中和抗体产生，是主要的保护性抗原。鸡的β-防御素-1(Gallinacin-1，GAL1)是禽体内发现的一种抗菌肽，主要表达在骨髓、气管、肝脏、肺脏、法氏囊及皮肤，对大肠杆菌、白色念珠菌、沙门氏菌等有抑菌作用。市场上IBDV疫苗有全病毒弱毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡VP2和鸡GAL-1融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为VP2-GAL1融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码该蛋白的基因序列为VP2-GAL1序列,如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡VP2和鸡GAL-1融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为VP2-GAL1融合蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，编码该蛋白的基因序列为VP2-GAL1序列,如SEQIDNO.1所示。


2.一种表达权利要求1所述的鸡VP2和鸡GAL-1融合蛋白的重组CHO细胞株，其特征在于，所述重组CHO细胞株为CHO-B40-VP2-GAL1-80#株，该细胞株保藏名称为CHO-B40-VP2-80#，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.19959。


3.一种如权利要求2所述的重组CHO细胞株的构建方法，其特征在于，构建方法包括以下步骤；
(1)人工合成基因序列VP2-GAL1，该序列含有临床分离的鸡IBDV流行毒株VP2蛋白的基因序列和鸡β-防御素-1的成熟蛋白基因GAL-1序列，两段序列间用一个短的linker连接，VP2-GAL1序列两端分别设有HindⅢ酶切位点和EcoRⅠ酶切位点；
(2)使用HindⅢ和EcoRⅠ酶切上述VP2-GAL1序列和p1020载体，回收酶切后的VP2-GAL1序列和p1020载体片段，连接、转化、克隆PCR并进行测序验证，构建p1020-VP2-GAL1表达载体；
(3)使用p1020-VP2-GAL1表达载体转染CHO-GS-KO...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘喜凤，周佳彬，曹玉飞，杨闯，刘燕，郑杰，马宁宁，
申请(专利权)人：浙江鼎持生物制品有限公司，北京鼎持生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33