一种去除毕赤酵母表达重组蛋白聚集体和/或降解片段的方法技术

本公开提供一种去除毕赤酵母表达重组蛋白聚集体和/或降解片段的方法，具体提供对含有毕赤酵母表达重组蛋白的发酵液采用多模式色谱树脂进行纯化的方法，其中在发酵液样品上样步骤和洗脱步骤之间包括乙醇淋洗的步骤，所述乙醇淋洗的步骤能够减少纯化产物中重组蛋白降解片段和聚集体。在对于重组人血清白蛋白‑人粒细胞集落刺激因子融合蛋白毕赤酵母发酵液采用Capto MMC层析纯化的方法中，洗脱前采用5‑20%的乙醇淋洗能降低产物中降解片段和聚集体的含量。与浓度为5%的乙醇相比，采用10‑20%的乙醇对降解和聚集体的去除效果有显著提高。

【技术实现步骤摘要】
一种去除毕赤酵母表达重组蛋白聚集体和/或降解片段的方法
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种毕赤酵母重组表达蛋白纯化方法，特别是涉及去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，以及所述方法在纯化毕赤酵母重组表达蛋白、制备毕赤酵母重组表达蛋白单体、和/或提高毕赤酵母重组表达蛋白单体比例中的应用。
技术介绍
人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，是一种来源于单核细胞和纤维组织母细胞的长链多肽糖蛋白，可诱导造血干细胞的增值和分化，促进血液中的中性粒细胞数增加；另外还具有刺激成熟中性粒细胞从骨髓中释放出并激活中性粒细胞的功能。自1991年起，重组人粒细胞集落刺激因子(rG-CSF)已经广泛用于治疗癌症化疗导致的骨髓抑制，可以显著改善化疗所引起的中性粒细胞减少症的严重性和持续时间。目前，已经有多种商业化rG-CSF制剂在销售，如非格司亭(filgrastim)(商品名为Gran®和Neupogen®)，雷诺司亭(lenograstim)(商品名为Neutrogin®和Granocyte®)，那曲司亭(nartograstim)(商品名为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于采用多模式色谱树脂对含有毕赤酵母表达重组蛋白的发酵液进行纯化，并且在发酵液上样步骤和洗脱步骤之间包括乙醇淋洗的步骤。/n

【技术特征摘要】
1.一种去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于采用多模式色谱树脂对含有毕赤酵母表达重组蛋白的发酵液进行纯化，并且在发酵液上样步骤和洗脱步骤之间包括乙醇淋洗的步骤。


2.如权利要求1所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于所述多模式色谱树脂选自以下树脂：HEPHypercelTM、PPAHypercelTM、CaptoAdhereTM、CaptoMMCTM、MEPHypercelTM。


3.如权利要求1所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于所述乙醇淋洗步骤的预洗液含有5-20%的乙醇。


4.如权利要求1所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于还包括高盐缓冲液预洗步骤、高pH缓冲液预洗步骤。


5.如权利要求1-4任一所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其包括：
（1）发酵液上样：层析柱用平衡缓冲液平衡后上样，上样结束后再平衡；
（2）乙醇淋洗液预洗：采用含5-20%的乙醇淋洗液预洗；
（3）高盐缓冲液预洗：采用含1MNaCl、pH5.5的预洗缓冲液预洗；
（4）高pH缓冲液预洗：采用pH6.8的缓冲液预洗；
（5）洗脱缓冲液洗脱。


6.如权利要求5所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其还包括对层析柱流出液进行SEC-HPLC和非还原SDS-PAGE检测。


7.如权利要求5所述去除毕赤酵母重组表达蛋白聚集体和/或降解片段的方法，其特征在于：
所述平衡缓冲液为20mMNaAc+5mMEDTA+0.15MNaCl，
所述预洗液为含5%、10%、15%或20%乙醇（m/v）的5mMEDTA溶液，
所述高盐缓冲液为40mMNaAcpH5.5+...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅菲，陈坤，游猛，方鹏，任杰，孙小伟，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31