【技术实现步骤摘要】
MHCI类表位递送多肽本申请是申请日为2015年1月26日、专利技术名称为“MHCI类表位递送多肽”的中国专利申请No.201580013355.7的分案申请。
本专利技术一般地涉及修饰多肽以引入所述多肽递送异源T-细胞表位用于被脊索动物细胞进行MHCI类呈递的能力的方法和使用这些方法制备的多肽。更具体地，本专利技术涉及将包含蛋白酶体递送效应物功能的多肽修饰成异源T-细胞表位递送多肽的方法，所述异源T-细胞表位递送多肽与它们的母体分子在它们的免疫原性性能方面的差异是一个或多个T-细胞表位-肽的添加，所述T-细胞表位-肽可以被MHCI类分子识别并被脊索动物细胞的MHCI类系统呈递在细胞表面上。本专利技术的某些方法涉及通过一个或多个T-细胞表位的引入而修饰多肽以降低抗原性和/或免疫原性的方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用本专利技术的方法产生的多肽和包含使用本专利技术的方法产生的多肽的细胞靶向分子。本专利技术的细胞靶向分子可以用于众多用途，例如，多种疾病、病症和病患(例如，癌症、肿瘤、其它生长异常、免疫病症和微生物感染)的诊断和治疗。
【技术保护点】
1.一种蛋白质，其包含衍生自亲本野生型志贺毒素A亚基效应子多肽的多肽，其中所述亲本野生型志贺毒素A亚基效应子多肽由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的氨基酸1至251组成；/n其中所述多肽具有与SEQ ID NO：16至少95％同一性的多肽序列，其中所述多肽能够展现一种或多种志贺毒素A亚基效应子功能，所述功能选自：细胞内化，亚细胞按路线发送，催化活性和细胞毒性；/n其中所述多肽包含嵌入的异源CD8+T细胞表位，使得包含所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的多肽具有与不存在所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的亲本野生型志贺毒素A亚基多肽相同的氨基酸总数；并且其中所述嵌入...
【技术特征摘要】
20140127 US 61/932,000;20140911 US 62/049,3251.一种蛋白质，其包含衍生自亲本野生型志贺毒素A亚基效应子多肽的多肽，其中所述亲本野生型志贺毒素A亚基效应子多肽由SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的氨基酸1至251组成；
其中所述多肽具有与SEQIDNO：16至少95％同一性的多肽序列，其中所述多肽能够展现一种或多种志贺毒素A亚基效应子功能，所述功能选自：细胞内化，亚细胞按路线发送，催化活性和细胞毒性；
其中所述多肽包含嵌入的异源CD8+T细胞表位，使得包含所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的多肽具有与不存在所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的亲本野生型志贺毒素A亚基多肽相同的氨基酸总数；并且其中所述嵌入的异源CD8+T细胞表位包含SEQIDNO：6的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的蛋白质，其中所述嵌入的异源CD8+T细胞表位破坏至少一个内源B细胞表位区域和/或至少一个内源CD4+T细胞表位区域以使所述多肽去免疫，如通过与不存在所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的亲本野生型志贺毒素A亚基效应子多肽相比，包含所述嵌入的异源CD8+T细胞表位的多肽的降低的B细胞抗原性或免疫原性和/或降低的CD4+T细胞抗原性或免疫原性所证明；其中所述破坏包括用嵌入的异源CD8+T细胞表位的至少一个氨基酸残基取代B细胞表位区域和/或CD4+T细胞表位区域中的至少一个氨基酸残基。
3.权利要求2的蛋白质，其中所述至少一个内源性B细胞区域在SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的天然定位的氨基酸区域53-66处；和/或至少一个内源性CD4+T细胞表位区域在SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的天然定位的氨基酸区域34-78处。
4.一种蛋白质，其包含志贺毒素A亚基效应子多肽，该多肽具有与SEQIDNO：16至少95％同一性的多肽序列，其中该多肽的氨基酸残基53-61由SEQIDNO：6所示的异源CD8+T细胞表位组成，并且其中所述多肽能够展现一种或多种志贺毒素A亚基效应子功能，所述功能选自：细胞内化，亚细胞按路线发送，催化活性和细胞毒性。
5.权利要求1-4中任一项所述的蛋白质，其中所述多肽能够将CD8+T细胞表位从早期的内体区室细胞内递送至存在所述多肽的细胞的MHCI类分子。
6.权利要求5的蛋白质，其中所述多肽除了将CD8+T细胞表位从早期的内体区室细胞内递送至其中存在所述多肽的细胞的MHCI类分子外，还能够展示一种或多种志贺毒素A亚基效应子功能。
7.权利要求6的蛋白质，其中所述志贺毒素A亚基效应子功能是细胞毒性，酶活性和/或按路线发送至存在该多肽的细胞的细胞溶胶区室的能力。
8.权利要求1-7中任一项的蛋白质，其包含或组成为与SEQIDNO：16有至少98％同一性的多肽序列。
9.权利要求8的蛋白质，其包含SEQIDNO：16所示的多肽。
10.一种细胞靶向分子，其包含权利要求1-9中任一项的蛋白质以及细胞靶向部分或试剂。
11.权利要求10的细胞靶向分子，其中所述细胞靶向部分包含能够特异性结合至少一种细胞外靶生物分子的结合区域。
12.权利要求11的细胞靶向分子，其中所述结合区域包含选自以下的多肽：单结构域抗体片段，单链可变片段，抗体可变片段，抗原结合片段，Fd片段，从骆驼科来源的重链抗体结构域(VHH片段)、从软骨鱼来源的重链抗体结构域、免疫球蛋白新抗原受体(IgNAR)、VNAR片段、多聚scFv片段，例如双抗体，三抗体或四抗体，双特异性串联scFv片段，二硫键稳定化的抗体可变(Fv)片段、和双特异性微抗体。
13.权利要求11或权利要求12所述的细胞靶向分子，其中向与结合区域的胞外靶生物分子物理上偶联的细胞施用所述细胞靶向分子导致细胞死亡。
14.权利要求13所述的细胞靶向分子，其显示出与其成员不与结合区域所结合的任何细胞外靶生物分子物理偶联的第二细胞群体相比，在其成员与结合区域所结合的细胞外靶生物分子物理偶联的第一细胞群体中的细胞毒性为至少3倍大。
15.权利要求13或14的细胞靶向分子，其中所述细胞或第一细胞群体通过共价和/或非共价分子间相互作用与所述细胞外靶生物分子物理偶联，所述共价和/或非共价分子间相互作用将所述细胞外靶生物分子或其一部分偶联到细胞的外部；或其中所述细胞外靶生物分子是由细胞或第一细胞群体表达的整合膜蛋白或外周膜蛋白。
16.权利要求11至15中任一项所述的细胞靶向分子，其中所述结合区域能够结合选自以下的细胞外靶生物分子：CD20、CD22、CD40、CD79、CD25、CD30、HER2/neu/ErbB2、EGFR、EpCAM、EphB2、前列腺特异性的膜抗原、Cripto、内皮糖蛋白/CD105、成纤维细胞活化的蛋白、Lewis-Y、CD19、CD21、CS1/SLAMF7、CD33、CD52、gpA33、粘蛋白、TAG-72、碳酸酐酶IX、叶酸结合蛋白、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、神经节苷脂GM2、神经节苷脂Lewis-Y2、VEGFR、αVβ3、α5β1、ErbB1/EGFR、Erb3、c-MET、IGF1R、EphA3、TRAIL-R1、TRAIL-R2、RANKL、生腱蛋白、CD64、间皮素、BRCA1、MART-1/MelanA、gp100、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、GAGE-1/2、BAGE、RAGE、NY-ESO-1、CDK-4、β-联蛋白、MUM-1、胱天蛋白酶-8、KIAA0205、HPVE6、SART-1、PRAME、癌胚抗原、前列腺特异性的抗原、前列腺干细胞抗原、人天冬氨酰基(天冬酰胺酰基)β-羟化酶、EphA2、HER3/ErbB-3、MUC1、酪氨酸酶相关的抗原、HPV-E7、EB病毒抗原、Bcr-Abl、甲胎蛋白抗原、17-A1、膀胱肿瘤抗原、CD38、CD15、CD23、CD53、CD88、CD129、CD183、CD191/CD244、CD294、CD305、C3AR、FceRIa、半乳凝集素-9、mrp-14、Siglec-8、Siglec-10、CD49d、CD13、CD44、CD54、CD63、CD69、CD123、CD193、TLR4、IgE、CD107a、CD203c、CD14、CD68、CD80、CD86、CD115、F4/80、ILT-3、半乳凝集素-3、CD11a-c、GITRL、MHCII类、CD284/TLR4、CD107/Mac3、CD195/CCR5、HLA-DR、CD16/32、CD282/TLR2、CD11c、和任何前述物质的任何免疫原性片段。
17.权利要求10-16中任一项的细胞靶向分子，其中所述多肽包含相对于天然存在的志贺毒素A亚基的突变，所述突变改变了所述多肽的酶活性。
18.权利要求17的细胞靶向分子，其中所述突变降低或消除了所述多肽的细胞毒性。
19.权利要求10-18中任一项的细胞靶向分子，其为同多聚体或杂多聚体的形式。
20.权利要求10-19中任一项所述的细胞靶向分子，其与选自以下中的任一种的另外的外源材料连接：...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克·波马，埃林·威勒特，
申请(专利权)人：分子模板公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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