在体生成CAR-巨噬细胞的制备方法及肿瘤免疫治疗中的应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及在体生成CAR‑巨噬细胞的制备方法及肿瘤免疫治疗中的应用，其制备方法为:首先在体外构建pCAR质粒表达载体，然后构建pCAR‑聚合物多功能纳米粒，进行纳米递送CAR质粒以实现在体内生成CAR‑巨噬细胞。本公开制备的CAR‑巨噬细胞能够彻底清除恶性肿瘤，有望成为治疗恶性肿瘤的新型免疫治疗工具。

Preparation of in vivo car macrophages and its application in tumor immunotherapy

【技术实现步骤摘要】
在体生成CAR-巨噬细胞的制备方法及肿瘤免疫治疗中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种嵌合抗原受体及其制备方法、一种嵌合抗原受体的表达盒及其制备方法、一种含有嵌合抗原受体表达盒的纳米载体、一种嵌合抗原受体-巨噬细胞，以及一种体外合成或在体生成嵌合抗原受体-巨噬细胞(CAR-巨噬细胞)的制备方法及在肿瘤免疫治疗中的应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。免疫疗法中的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimericantigenreceptorTcells,CAR-T)疗法临床效果显著，是癌症免疫治疗研究的焦点和热点之一。临床实践证实在CAR-T发挥抗肿瘤效应时，释放大量的细胞因子，发挥着“双刃剑”的作用：一方面依靠分泌的具有胞毒作用的颗粒酶、穿孔素等摧毁肿瘤细胞，另一方面也因细胞因子“风暴”存在安全隐患：CAR-T细胞疗法可引起T细胞、B细胞、NK细胞等释放大量的炎性细胞因子如IL-6、TNF-α和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括胞外结构域、跨膜区、胞内信号传导结构域；/n优选地，所述跨膜区为CD8；优选地，所述胞内信号传导结构域为FcRγ-PI3k；优选地，所述胞外结构域为以肿瘤细胞特异性标志物为特异性抗原制备的抗体，优选地，包括sc-Fv、Fab、scFab或scIgG抗体片段；优选地，所述胞外结构域以特异性脑胶质瘤特异性标识物EGFR为特异性抗原设计。/n

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括胞外结构域、跨膜区、胞内信号传导结构域；
优选地，所述跨膜区为CD8；优选地，所述胞内信号传导结构域为FcRγ-PI3k；优选地，所述胞外结构域为以肿瘤细胞特异性标志物为特异性抗原制备的抗体，优选地，包括sc-Fv、Fab、scFab或scIgG抗体片段；优选地，所述胞外结构域以特异性脑胶质瘤特异性标识物EGFR为特异性抗原设计。


2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体的制备方法，其特征在于，将表达所述嵌合抗原受体的载体导入生物体内，使在体编辑巨噬细胞表达嵌合抗原受体。


3.一种嵌合抗原受体的表达盒，其特征在于，嵌合抗原受体如权利要求1所述，编码所述嵌合抗原受体的基因位于载体上；
优选地，所述载体为嵌合抗原受体质粒；
优选地，构建形成嵌合抗原受体质粒表达载体，载体含有特异性编辑巨噬细胞避免基因编辑脱靶的启动子、编码嵌合抗原受体(CAR)胞外结构域的基因、GFP-luc；进一步优选地，还含有编码嵌合抗原受体跨膜区、胞内信号传导结构域的基因；优选地，启动子为CD68启动子，优选地，所述跨膜区为CD8；优选地，所述胞内信号传导结构域为FcRγ-PI3k；优选地，所述胞外结构域以肿瘤细胞特异性标志物为特异性抗原，包括sc-Fv、Fab、scFab或scIgG抗体片段；优选地，所述胞外结构域以特异性脑胶质瘤特异性标识物EGFR为特异性抗原设计。


4.如权利要求3所述的表达盒的制备方法，其特征在于，嵌合抗原受体如权利要求1所述，编码所述嵌合抗原受体的基因位于载体上；
优选地，构建形成CAR质粒慢病毒表达载体，载体含有特异性编辑巨噬细胞避免基因编辑脱靶的启动子、编码嵌合抗原受体(CAR)胞外结构域的基因、GFP-luc；优选地，还含有编码嵌合抗原受体跨膜区、胞内信号传导结构域的基因；优选地，启动子为CD68启动子，优选地，所述跨膜区为CD8；优选地，所述胞内信号传导结构域为FcRγ-PI3k；优选地，所述胞外结构域以肿瘤细胞特异性标志物为特异性抗原，包括sc-Fv、Fab、scFab或scIgG抗体片段；优选地，所述胞外结构域以特异性脑胶质瘤特异性标识物EGFR为特异性抗原设计。


5.一种含有权利要求3所述嵌合抗原受体的表达盒的纳米载体，其特征在于，纳米载体包括聚合物PBAE、金属框架ZIF-8、阳离子白蛋白纳米粒的一种或多种，优选的，所述纳米载体为聚合物PBAE，得到一种pCAR-聚合物多功能纳米粒，具体构建方法为
(1)构建含有CD68启动子、编码嵌合抗原受体(CAR)胞外结构域的基因、编码嵌合抗原受体(CAR)跨膜区结构域的基因、编码嵌合抗原受体(CAR)胞内信号传导结构域的基因、GFP-luc的CAR质粒表达载体，构建含CD68启动子，iPB7转座酶的编码转座酶的过度活性形式的质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜新义，陈晨，唐春伟，张蕊，杨贞梅，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37