【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种高效表达猪口蹄疫病毒样颗粒的杆状病毒表达载体及其构建方法与应用。
技术介绍
1、杆状病毒表达载体系统(bculovrius expression vector system，bevs)作为一种强大的功能载体，在生物制药、基因治疗等领域发挥着重大作用。杆状病毒具有强大的启动子，如多角体蛋白启动子ph、p10、gp67启动子等，能够驱动外源基因在昆虫细胞中高效表达。该系统可以同时容纳多个外源基因，并且能够实现多个基因的共表达。对于vlp的表达，许多病毒的vlp由多种结构蛋白组成，杆状病毒表达载体系统可以将这些结构蛋白的基因同时导入，使它们在昆虫细胞内同时表达并正确组装成vlp。昆虫细胞作为真核表达系统，能够对表达的蛋白进行多种翻译后修饰，如糖基化、磷酸化、酰基化等。这些修饰对于维持vlp的结构稳定性、免疫原性和生物学活性至关重要。昆虫细胞内具有完善的蛋白质折叠和组装机制，能够帮助表达的病毒结构蛋白正确折叠和组装成vlp。
2、猪口蹄疫病毒(fmdv)危害巨大，会对生猪养殖产业造成严重的经济损失，还...
【技术保护点】
1.一种杆状病毒表达载体，其特征在于，所述杆状病毒表达载体包括pFastbac-dual载体的一段骨架序列及一段基因合成序列，所述的基因合成序列包括依次连接的第一终止子、第一克隆位点、内核糖体进入位点、转录调控元件、第一启动子、增强子、第二启动子、第二克隆位点、第二终止子，所述第一克隆位点和第二克隆位点能够分别搭载目标蛋白的基因序列。
2.根据权利要求1所述杆状病毒表达载体，其特征在于，所述第一终止子和第二终止子分别为SV40终止子或HSV TK终止子，所述第一启动子分别为GP67启动子、CMV启动子、PH启动子或者P10启动子中的一种，所述第二启动子为P...
【技术特征摘要】
1.一种杆状病毒表达载体，其特征在于，所述杆状病毒表达载体包括pfastbac-dual载体的一段骨架序列及一段基因合成序列，所述的基因合成序列包括依次连接的第一终止子、第一克隆位点、内核糖体进入位点、转录调控元件、第一启动子、增强子、第二启动子、第二克隆位点、第二终止子，所述第一克隆位点和第二克隆位点能够分别搭载目标蛋白的基因序列。
2.根据权利要求1所述杆状病毒表达载体，其特征在于，所述第一终止子和第二终止子分别为sv40终止子或hsv tk终止子，所述第一启动子分别为gp67启动子、cmv启动子、ph启动子或者p10启动子中的一种，所述第二启动子为ph启动子或者p10启动子中的一种；所述转录调控元件为转录激活因子ie1，所述增强子为hr1增强子，内核糖体进入序列ires的基因序列如seq id no.2所示。
3.一种能够高效表达猪口蹄疫病毒样颗粒的杆状病毒表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的杆状病毒表达载体，所述第一克隆位点和第二克隆位点分别搭载猪口蹄疫3c蛋白的基因序列和猪口蹄疫p12a蛋白的基因序列，所述猪口蹄疫病毒p12a蛋白的基因序列如seq id no:11所示，所述猪口蹄疫3c蛋白的基因序列如seq id no:10。
4.根据权利要求3所述的一种能够高效表达猪口蹄疫病毒样颗粒的杆状病毒表达载体，其特征在于，所述猪口蹄疫3c蛋白的基因序列通过内部核糖体进入序列ires与编码转录调控元件序列ie1串联表达，且位于下游基因位置。
5.根据权利要求4所述的一种能够高效表达猪口蹄疫病毒样颗粒的杆状病毒表达载体，其特征在于，所述第一终止子为hsvtk终止子，所述第一启动子为ph启动子，所述第二启动子为p10启动子，所述第二终止子为sv40终止子。
6.一种如权利要求5所述的能够高效表达猪口蹄疫病毒样颗粒的杆状病毒表达载体的构建方法，其特征在于：设计引物以pfastbac-dual为模板，通过pcr扩增pfastbac-dual载体的一段骨架序列，如seq id no.12所示，同时...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘喜凤，曹玉飞，周佳彬，张乾顺，马宁宁，
申请(专利权)人：浙江鼎持生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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