用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法技术

本申请公开了用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，包括以下步骤：(1)将发酵后的含有质粒DNA的大肠杆菌菌液重悬后加入裂解液裂解，裂解后加入中和液中和，得到中和反应后的料液；(2)将料液低温静置，待料液分成上层、中间层、下层，将中间层的清液泵入固液分离装置中进行第一级过滤；将滤出的清液再次泵入固液分离装置中进行第二级过滤；(3)收集过滤后的清液；从而能够操作简单、稳定高效地从料液中提取高质量质粒DNA，满足了基因药物、病毒类药物、核酸药物和疫苗产品，尤其是核酸疫苗的研发和后期产品大规模生产的需要。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物制药,特别是涉及用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，更具体地,本申请涉及一种在碱裂解后从裂解液中提取质粒dna的方法。

技术介绍

1、质粒dna作为一种常见的基因运载工具，在生物医药方面有着极为广泛的应用前景。因其安全、方便等极为独特的优点，近年来被广泛应用于核酸疫苗、基因治疗、细胞治疗等
然而，质粒dna亦存在某些缺点，如在靶细胞中的基因表达率低、持续时间短等，故其用药剂量相对于其他类型的产品要大。如质粒dna疫苗的剂量为0.1～1.0mg，大约是甲型肝炎疫苗剂量50ng的2000～20000倍。全球每年对甲型肝炎疫苗的需求为5g，但对质粒dna的需求量就达10～100kg，而且这种需求量随着生物产品的发展趋势不断提高。另外，对于质粒dna除了产量上的高需求外，对其质量的要求也是十分苛刻，特别是对质粒dna超螺旋的比例，由此凸显出建立一种能够大规模、连续地生产高质量的质粒dna的方法显得迫在眉睫。

2、科学家们从未停止过对质粒dna提取方法的探索和研究。实验室早期就采用溶菌酶裂解、胰rna酶降低宿主dna的含量、使用本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，其特征在于，所述固液分离装置包括筒盖、筒体、滤网组件。

3.根据权利要求2中所述的用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，其特征在于，所述滤网组件包括支撑滤网、折叠滤袋、密封件。

4.根据权利要求3所述的用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，其特征在于，所述折叠滤袋为Rocket折叠滤袋。

5.根据权利要求4所述的用于提取细菌中质粒DNA的固液分离方法，其特征在于，所述折叠滤袋的孔径为150-250um...

【技术特征摘要】

1.用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，其特征在于，所述固液分离装置包括筒盖、筒体、滤网组件。

3.根据权利要求2中所述的用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，其特征在于，所述滤网组件包括支撑滤网、折叠滤袋、密封件。

4.根据权利要求3所述的用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，其特征在于，所述折叠滤袋为rocket折叠滤袋。

5.根据权利要求4所述的用于提取细菌中质粒dna的固液分离方法，其特征在于，所述折叠滤袋的孔径为150-250um或0.5-5um；

6.根据权利要求3中所述的用于提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：包奇，杨鸿凯，侯尤钖，吴宗圣，刘丹，苏保卫，
申请(专利权)人：艾棣维欣苏州生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：