【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种cv2117-hav-htlv-2多基因假病毒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、甲型肝炎病毒（hepatitis a virus，hav）是一种无包膜单股正链rna病毒，为小核糖核酸病毒科嗜肝病毒属，是导致人类急性传染病-甲型肝炎的病原体。hav主要通过粪-口途径传播，食用污染的食物或水可以引起感染甚至疫情暴发。人类t淋巴细胞病毒（htlv）是致瘤性rna病毒，属慢病毒亚科，可分为htlv-1型和htlv-2型。近来发现该病毒在人类可引起多种疾病：htlv-1可引起成人t细胞白血病/淋巴瘤（atl）、热带痉挛性截瘫/htlv相关性脊髓病等；htlv-2与t-多毛细胞/巨粒细胞白血病等疾病相关。杯状病毒cv2117属杯状病毒科疱疹病毒属，从cho细胞中分离得到，为无包膜的单链正链rna病毒。cv2117的自然宿主尚不清楚，从表现出严重胃肠炎症状的狗中可以分离出cv2117，在人和猫身上也检测出cv2117类病毒抗体，尽管cv2117未表现出对人类的致病性，但会损害生产生物制剂的 cho细胞的生长。鉴于生物制品可能存在上述外源病毒因子的污染，因此准确检测尤为重要。
2、在核酸检测过程中使用阳性质控品，以监测包括样本处理过程在内的pcr实验过程全流程，是确保核酸检测结果有效性，防止“假阴性”检测结果出现的最有效手段。但作为分子检测技术重要组成部分的阳性标准样品却成为制约检测技术发展和应用的瓶颈。
3、鉴于目前cv2117、hav和htlv-2尚无商品化的灭活病毒对照品，特提出
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种假病毒，以至少解决现有技术中存在的技术问题之一。
2、本专利技术的目的之二在于提供上述假病毒的制备方法。
3、本专利技术的目的之三在于提供上述假病毒的应用。
4、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
5、本专利技术提供了一种假病毒，所述假病毒颗粒内含有cv2117、hav和htlv-2的核酸片段，所述核酸片段用作检测所述cv2117、hav和htlv-2的靶标。
6、进一步的，所述cv2117的核酸片段具有如seq id no.1所示的核苷酸序列；
7、所述hav的核酸片段具有如seq id no.2所示的核苷酸序列；
8、所述htlv-2的核酸片段具有如seq id no.3所示的核苷酸序列。
9、进一步的，所述cv2117、hav和htlv-2的核酸片段为融合基因。
10、进一步的，所述融合基因具有如seq id no.4所示的核苷酸序列。
11、进一步的，所述假病毒以pwpxl质粒载体为骨架。
12、本专利技术还提供了上述的假病毒的制备方法，包括将上述的假病毒引入工程细胞，培养所述工程细胞后，收集上清，得到所述假病毒。
13、进一步的，通过三质粒系统将所述假病毒引入工程细胞。
14、进一步的，所述三质粒系统包括pmd2.g、pspax2和pwpxl；
15、优选地，所述pmd2.g：pspax2：pwpxl质量比为1:3:4。
16、进一步的，所述工程细胞包括hek293t细胞。
17、本专利技术还提供了上述的假病毒或采用上述的制备方法制备得到的假病毒在制备诊断cv2117、hav和htlv-2的阳性对照品中应用。
18、此外，本专利技术还提供了一种诊断试剂盒，包括上述的假病毒或采用上述的制备方法制备得到的假病毒。
19、进一步地，所述试剂盒还包括用于检测cv2117、hav和htlv-2的引物组；
20、优选地，所述引物组包括第一引物组合和第二引物组合；
21、优选地，所述第一引物组合包括：
22、cv2117 for1的序列如seq id no.5所示；
23、cv2117 rev1的序列如seq id no.6所示；
24、cv2117 probe1的序列如seq id no.7所示；
25、hav for1的序列如seq id no.11所示；
26、hav rev1的序列如seq id no.12所示；
27、hav probe1的序列如seq id no.13所示；
28、htlv-2 f1的序列如seq id no.17所示；
29、htlv-2 r1的序列如seq id no.18所示；
30、hav probe1的序列如seq id no.19所示；
31、hav probe2的序列如seq id no.20所示；
32、优选地，所述第二引物组合包括：
33、cv2117 for2的序列如seq id no.8所示；
34、cv2117 rev2的序列如seq id no.9所示；
35、cv2117 probe2的序列如seq id no.10所示；
36、hav for2的序列如seq id no.14所示；
37、hav rev2的序列如seq id no.15所示；
38、hav probe2的序列如seq id no.16所示；
39、htlv-2 f1的序列如seq id no.17所示；
40、htlv-2 r1的序列如seq id no.18所示；
41、hav probe1的序列如seq id no.19所示；
42、hav probe2的序列如seq id no.20所示。
43、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
44、本专利技术提供的假病毒，可应用于cv2117、hav和htlv-2多种rna病毒检测，假病毒具有与病毒相似的结构，理论上更接近于真病毒，可替代质粒标准品作为外源病毒分子检测中的阳性对照；并且，多个基因在同一个假病毒体系，扩增得到的每个基因片段的理论值接近1：1，可更好地对pcr进行质控；同时，多个基因在一个假病毒体系中作为对照可降低假病毒生产的成本，提供了一种经济有效的分子检测对照体系。
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1.一种假病毒，其特征在于，所述假病毒内含有CV2117、HAV和HTLV-2的核酸片段，所述核酸片段用作检测所述CV2117、HAV和HTLV-2的靶标。
2. 根据权利要求1所述的假病毒，其特征在于，所述CV2117的核酸片段具有如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；
3.根据权利要求2所述的假病毒，其特征在于，所述CV2117、HAV和HTLV-2的核酸片段为融合基因；
4.根据权利要求1~3任一项所述的假病毒，其特征在于，所述假病毒以pWPXL质粒载体为骨架。
5.权利要求1~4任一项所述的假病毒的制备方法，其特征在于，包括将权利要求1~4任一项所述的假病毒引入工程细胞，培养所述工程细胞后，收集上清，得到所述假病毒。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，通过三质粒系统将所述假病毒引入工程细胞；
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述工程细胞包括HEK293T细胞。
8.权利要求1~4任一项所述的假病毒或采用权利要求5~7任一项所述的制备方法制备得到的假病毒在制备诊断
9.一种诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1~4任一项所述的假病毒或采用权利要求5~7任一项所述的制备方法制备得到的假病毒。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于检测CV2117、HAV和HTLV-2的引物组；
...【技术特征摘要】
1.一种假病毒，其特征在于，所述假病毒内含有cv2117、hav和htlv-2的核酸片段，所述核酸片段用作检测所述cv2117、hav和htlv-2的靶标。
2. 根据权利要求1所述的假病毒，其特征在于，所述cv2117的核酸片段具有如seq idno.1所示的核苷酸序列；
3.根据权利要求2所述的假病毒，其特征在于，所述cv2117、hav和htlv-2的核酸片段为融合基因；
4.根据权利要求1~3任一项所述的假病毒，其特征在于，所述假病毒以pwpxl质粒载体为骨架。
5.权利要求1~4任一项所述的假病毒的制备方法，其特征在于，包括将权利要求1~4任一项所述的假病毒引入工程细胞，培养所述工程细胞后，收集上清...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨英，魏夏杰，饶春明，王瑶，袁子维，李瑶玲，房吉庆，周金，孙云霞，李开通，汪宁，
申请(专利权)人：北京昭衍新药研究中心股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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