【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽医传染病快速诊断，具体涉及一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的rt-pcr检测引物及试剂盒。
技术介绍
1、我国是世界养鸭生产大国，2022年鸭出栏量达40.02亿只，产值达1203.07亿元，对禽业增效、农民增收发挥了重要作用；然而，随着养鸭集约化程度的不断提高和各种贸易活动的日益频繁等诸多原因，加上不同品种(系)禽同场饲养或同群混养乱象依然存在，疫病尤其是新发疫病已成为制约我国水禽业持续健康高质量发展的重要瓶颈。2021年3月以来，闽粤赣浙皖桂等地部分鸭场产蛋率较高的麻鸭群、樱桃谷种鸭群和种番鸭群发生以输卵管内乳糜性积液、黏膜出血水肿增厚及不同程度产蛋下降(如10％～30％不等)为特征的疫病，俗称种(蛋)鸭输卵管积液综合征(hydrosalpinxfluidsyndrome，hfs)，这一新发疫病无疑又给我国养鸭业带来了新的挑战。为了明确引起这种新发疫病的病原，我们对采集的样品【病(死)鸭输卵管内乳糜性积液、输卵管黏膜、卵巢和肝脾脏器】开展了细菌分离和引起种(蛋)鸭发生产蛋下降的常见病毒(比如禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭减蛋综合征病毒、鸭瘟病毒、禽副粘病毒、鸭星状病毒3型、巴泰病毒、鸭1型甲肝病毒、a型禽偏肺病毒和b型禽偏肺病毒等)的核酸检测，结果表明，没有分离到细菌；同时，引起种(蛋)鸭产蛋下降的常见病毒检测结果均为阴性。为此，我们将引起种(蛋)鸭产蛋下降的病料接种鸭胚进行病毒分离，并将获得的尿囊液进行二代宏基因组测序，获得鸭输卵管积液综合征新发病毒分离株的全基因组序列。该病毒分离株为副黏病毒科(paramyx
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的rt-pcr检测引物及试剂盒。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的rt-pcr检测引物，所述rt-pcr检测引物的序列为：hfs-f：5’-acagggcgtcacccaataag-3’，
4、hfs-r：5’-gtacctgtctggccaactcc-3’；
5、所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为c型禽偏肺病毒(avain metapneumoviurssubgroup c)ampv-fj21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.45872，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
6、上述一种rt-pcr检测引物在制备鸭输卵管积液综合征新发病毒的检测试剂盒中的应用，所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为c型禽偏肺病毒(avain metapneumoviurssubgroup c)ampv-fj21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.45872，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
7、一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的检测试剂盒，所述检测试剂盒含有上述的rt-pcr检测引物；
8、所述检测试剂盒还包括2×one-step reaction mix、trans scriptⅱone-stepenzyme mix以及灭菌去离子水；
9、所述检测试剂盒用于引起鸭输卵管积液综合征的c型禽偏肺病毒的检测时，提取待检样本rna作为模板，利用权利要求3所述的rt-pcr检测引物进行rt-pcr扩增，电泳鉴定扩增产物；
10、所述rt-pcr扩增的反应体系为：
11、
12、
13、所述rt-pcr扩增的反应条件为：
14、1)反转录：50℃30min；
15、2)预变性：95℃5min；
16、3)变性：95℃30s；退火：56℃30s；延伸：72℃50s；共进行35次循环；
17、4)延伸：72℃10min；
18、5)4℃保存备用。
19、本专利技术的显著优点在于：2021年3月以来，我国福建、广东、江西、浙江等养鸭主产区内产蛋率较高的麻鸭群、樱桃谷种鸭群和种番鸭群发生以输卵管内乳糜性积液、黏膜出血水肿增厚、不同程度产蛋下降(如10％～30％不等)为特征的疫病，俗称种(蛋)鸭输卵管积液综合征(hfs)。迄今，尚未见麻鸭发生类似于hfs的疫病报道，这给我国广大养鸭户带来了很大的困难，这也导致了我国产生了非常大的经济损失。为了尽快解决这一养殖难题，本专利技术首先明确引起种(蛋)鸭输卵管积液综合征的病原，发现该病原不同于以往报道的引起种(蛋)鸭产蛋异常的病原，所以以往的引起种(蛋)鸭产蛋异常常见病毒的检测方法均不能用于检测该疫病的病原，因此，迫切建立一种用于快速检测hfs疫病的方法。本专利技术设计特异性引物上游引物hfs-f和下游引物hfs-r，建立了引起种(蛋)鸭输卵管积液综合征新发病毒的rt-pcr检测方法，灵敏度高，特异性好，无需复杂繁琐的条件优化过程，为该类疫病的快速精准诊断、减少误诊误防误治和有效防控起到了关键作用。
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1.一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的RT-PCR检测引物，其特征在于：所述RT-PCR检测引物的序列为：
2.根据权利要求1所述的RT-PCR检测引物，其特征在于：所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为C型禽偏肺病毒（avain metapneumoviurs subgroup C）aMPV-FJ21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45872，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3.如权利要求1所述的RT-PCR检测引物在制备鸭输卵管积液综合征新发病毒的检测试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为C型禽偏肺病毒（avain metapneumoviurs subgroup C）aMPV-FJ21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45872，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
5.一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的检测试剂盒，
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒还包括2×One-Step Reaction Mix、Trans ScriptⅡ One-Step Enzyme Mix以及灭菌去离子水。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于引起鸭输卵管积液综合征的C型禽偏肺病毒的检测时，提取待检样本RNA作为模板，利用权利要求3所述的RT-PCR检测引物进行RT-PCR扩增，电泳鉴定扩增产物。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR扩增的反应体系为：
9.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR扩增的反应条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种鸭输卵管积液综合征新发病毒的rt-pcr检测引物，其特征在于：所述rt-pcr检测引物的序列为：
2.根据权利要求1所述的rt-pcr检测引物，其特征在于：所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为c型禽偏肺病毒（avain metapneumoviurs subgroup c）ampv-fj21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.45872，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3.如权利要求1所述的rt-pcr检测引物在制备鸭输卵管积液综合征新发病毒的检测试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述鸭输卵管积液综合征新发病毒为c型禽偏肺病毒（avain metapneumoviurs subgroup c）ampv-fj21株，其已于2024年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅秋玲，黄瑜，傅光华，万春和，江南松，梁齐章，施少华，程龙飞，陈红梅，刘荣昌，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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