【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫细胞培养，尤其涉及一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法及其应用。
技术介绍
1、树突状细胞(dc)是机体内最重要、功能最强的专职性抗原提呈细胞，dc按来源不同主要分为2个亚型:髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell，mdc)和浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells，pdc)。
2、pdc是人体内主要的干扰素(ifn)产生细胞，能产生体内95％以上的ⅰ型ifn(ifn-α)。pdc产生的ifn-α可以抑制病毒的复制和传播，是一种强力抗病毒干扰素。ifn-α还可以通过激活其他免疫细胞起到免疫调节作用。
3、现有关于pdc的体外培养、诱导主要依靠流式细胞技术从外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，pbmc)中分选，但pdc在人pbmc中数量极少，普遍仅占0.2％～0.8％甚至更少，存在个体差异，单纯分选难以获得足够数量的细胞用于体内外及临床应用研究，故限制了对pdc研究和应用的进一步发展。
技术实现思路
1、本专利技术为了克服现有技术中存在的不足，提供一种体外诱导pbmc分化为pdc细胞的方法及应用。
2、本专利技术提供一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，包括步骤：将pbmc置于培养基中进行培养，其中，所述培养基包括以下组分：1～100ng/ml gm-csf、10～1000ng/m
3、基于培养进度更换或补充所述培养基，直至到达预定的培养时间；
4、收集培养后的细胞。
5、其中，本专利技术采用pbmc作为培养对象，通过培养使pbmc中的dc前体细胞最终分化为pdc细胞。pbmc易获得且限制小，无需前期进行分选再进行扩增培养，无需多次更换不同培养基，本专利技术培养方法简单易操作，便于后续推广使用。
6、在一个优选实施例中，所述培养基包括以下组分：20ng/ml gm-csf、100ng/mlpoly(i:c)、50ng/ml flt3l、100ui/ml tnf-α、1μm odn2006、0.5μm compound 4、10％自体血浆、aim-v基础培养基。
7、在一个优选实施例中，所述pbmc为采用密度梯度离心法从人外周静脉血中分离所得。
8、在一个优选实施例中，所述预定的培养时间为7天。
9、在一个优选实施例中，所述将pbmc置于培养基中进行培养具体包括步骤：使用经37℃预热的aim-v基础培养基重悬pbmc细胞，并接种于6孔板中，置于37℃二氧化碳培养箱内贴壁培养2小时，洗弃未贴壁的细胞，更换完全培养基进行培养。
10、在一个优选实施例中，所述pbmc的接种密度为8×106个/ml。
11、作为本专利技术的第二方面，本专利技术请求保护一种用于体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的培养基，所述培养基包括以下组分：1～100ng/ml gm-csf、10～1000ng/mlpoly(i:c)、10～100ng/ml flt3l、10～1000ui/ml tnf-α、0.1～10μm odn2006、0.1～10μmcompound 4、1～10％自体血浆及aim-v基础培养基。
12、本专利技术的培养基，其作用对象为pbmc，易获得且限制小，通过体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化成pdc细胞，培养后得到的pdc细胞在总细胞中的占比大幅增加。
13、其中，所述的用于体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的培养基的优选方案为，所述培养基包括以下组分：20ng/ml gm-csf、100ng/ml poly(i:c)、50ng/mlflt3l、100ui/ml tnf-α、1μm odn2006、0.5μm compound 4、10％自体血浆。
14、进一步的，作为本专利技术的第三方面，请求保护一种试剂盒，所述试剂盒包括上述任意一项培养基，所述试剂盒用于体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的培养或/和外泌体制备。
15、本专利技术还请求保护基于上述方法所获得pdc细胞在抗病毒及抗肿瘤中的应用。其中，通过本专利技术在通过培养pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞，产生大量干扰素来响应病毒，在抗病毒及抗肿瘤免疫中发挥核心作用。
16、本专利技术提供的一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，以pbmc为培养对象，诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc，基于本专利技术的培养基培养7天后得到的pdc细胞占总细胞的21.24％，比例较培养前增加约193倍；且本专利技术培养方法简单，可实现体外方便、高效获得大量的pdc细胞，为pdc细胞的基础研究和临床应用提供保障。同时，本专利技术的培养基培养7天后得到的pdc细胞在无靶细胞刺激的情况下即可分泌较高水平的ifn-α，有利于其在抗病毒和抗肿瘤治疗中的应用。
17、本专利技术还提供用于体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的培养基及其应用，对应的培养基能使pbmc中的dc前体细胞有效诱导分化为pdc细胞，以使pdc细胞能在抗病毒或抗肿瘤治疗中发挥更大作用。其对应的试剂盒能够应用于pbmc中的dc前体细胞培养及分化、pdc细胞培养、外泌体等试剂盒中。
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1.一种体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，包括步骤：
2.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述培养基包括以下组分：20ng/mL GM-CSF、100ng/mL Poly(I:C)、50ng/mL Flt3l、100UI/mL TNF-α、1μM ODN2006、0.5μM Compound 4、10％自体血浆。
3.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述PBMC为采用密度梯度离心法从人外周静脉血中分离所得。
4.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述预定的培养时间为7天。
5.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述将PBMC置于培养基中进行培养具体包括步骤：使用经37℃预热的AIM-V基础培养基重悬PBMC细胞，并接种于6孔板中，置于37℃二氧化碳培养箱内贴壁培养2小时，洗弃未贴壁的细胞，更
6.如权利要求5所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述PBMC的接种密度为8×106个/mL。
7.一种用于体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：1～100ng/mL GM-CSF、10～1000ng/mL Poly(I:C)、10～100ng/mLFlt3l、10～1000UI/mL TNF-α、0.1～10μM ODN2006、0.1～10μM Compound 4、1～10％自体血浆及AIM-V基础培养基。
8.如权利要求7所述的用于体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：20ng/mL GM-CSF、100ng/mL Poly(I:C)、50ng/mLFlt3l、100UI/mL TNF-α、1μM ODN2006、0.5μM Compound 4、10％自体血浆。
9.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求7-8中任意一项培养基，所述试剂盒用于体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的培养或/和外泌体制备。
10.一种如权利要求1-6任一所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法获得的pDC细胞在抗病毒和抗肿瘤中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，包括步骤：
2.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述培养基包括以下组分：20ng/ml gm-csf、100ng/ml poly(i:c)、50ng/ml flt3l、100ui/ml tnf-α、1μm odn2006、0.5μm compound 4、10％自体血浆。
3.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述pbmc为采用密度梯度离心法从人外周静脉血中分离所得。
4.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述预定的培养时间为7天。
5.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述将pbmc置于培养基中进行培养具体包括步骤：使用经37℃预热的aim-v基础培养基重悬pbmc细胞，并接种于6孔板中，置于37℃二氧化碳培养箱内贴壁培养2小时，洗弃未贴壁的细胞，更换完全培养基进行培养。
6.如权利要求5所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：白宗科，陈复兴，何无霜，张月圆，
申请(专利权)人：深圳泽医细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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