NK细胞冻存液、配置方法、冻存方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种NK细胞冻存液、配置方法、冻存方法及试剂盒，其中，所述NK细胞冻存液包括二甲基亚砜、甘油、羟乙基淀粉、海藻糖、棉子糖、D‑葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠、甘氨酸、维生素C、维生素B12、白藜芦醇、白桦脂酸、芹菜素和HEPES溶液。本发明专利技术在不影响冻存效果的前提下，将甘油和二甲基亚砜联合使用降低了二甲基亚砜用量，大大减弱了二甲基亚砜对细胞或人体的毒性，将渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂联合运用，内外兼顾的保护细胞，减少冻存过程中冰晶的机械损伤，亦可保护细胞复苏过程中因水分快速进入细胞内引起的细胞肿胀破裂损伤，提高了NK细胞复苏的存活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞冻存，尤其涉及一种nk细胞冻存液、配置方法、冻存方法及试剂盒。

技术介绍

1、nk细胞是人体防御肿瘤的第一道防线，在固有免疫系统具有重要的作用，不需要提前致敏就可以对肿瘤细胞进行直接杀伤，nk细胞已经被用于肿瘤免疫的细胞治疗，并在临床治疗肿瘤有很好的效果，目前97％以上的细胞治疗临床试验采用新鲜的细胞进行治疗，受地域限制较大，使得某些病人无法在第一时间接受有效的治疗，因此低温贮藏对于实现跨区域的细胞运输对细胞免疫疗法的临床应用至关重要。

2、低温贮藏技术是通过在超低温冷冻保存活细胞，降低细胞的代谢速度，调节和控制细胞生长代谢的各种酶的活性受到抑制，使细胞内在的生化反应十分缓慢，甚至停止生长，从而保持细胞活性延长细胞保存年限。现有含有二甲基亚砜的nk细胞冻存液，二甲基亚砜的用量偏高，毒性较大，且成份设计不合理，冻存过程容易对nk细胞造成损伤，影响nk细胞复苏时的存活率，对nk细胞进行表型检测，细胞表型内外的完整性也会产生较大的破坏，进而影响到复苏后nk细胞的杀伤活性。

3、因此，现有技术还有待于改进和发展。

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种NK细胞冻存液，其特征在于，包括渗透性冷冻保护剂、非渗透性保护剂、营养剂、中药单体成分以及PH缓冲剂；其中，所述渗透性冷冻保护剂包括二甲基亚砜和甘油；所述非渗透性保护剂包括羟乙基淀粉、海藻糖和棉子糖；所述营养剂包括D-葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠、甘氨酸、维生素C和维生素B12；所述中药单体成分包括白藜芦醇、白桦脂酸和芹菜素；所述PH缓冲剂包括HEPES溶液。

2.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液，其特征在于，在所述NK细胞冻存液中，二甲基亚砜为(1～10)mL/100mL、甘油为(1～10)mL/100mL、羟乙基淀粉为(5～30)g/100mL、海藻糖为(1～10...

【技术特征摘要】

1.一种nk细胞冻存液，其特征在于，包括渗透性冷冻保护剂、非渗透性保护剂、营养剂、中药单体成分以及ph缓冲剂；其中，所述渗透性冷冻保护剂包括二甲基亚砜和甘油；所述非渗透性保护剂包括羟乙基淀粉、海藻糖和棉子糖；所述营养剂包括d-葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠、甘氨酸、维生素c和维生素b12；所述中药单体成分包括白藜芦醇、白桦脂酸和芹菜素；所述ph缓冲剂包括hepes溶液。

2.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，在所述nk细胞冻存液中，二甲基亚砜为(1～10)ml/100ml、甘油为(1～10)ml/100ml、羟乙基淀粉为(5～30)g/100ml、海藻糖为(1～10)g/100ml、棉子糖为(1～10)g/100ml、d-葡萄糖为(1～5)g/100ml、谷氨酰胺为(0.1～1)g/100ml、丙酮酸钠为(0.1～1)g/100ml、甘氨酸为(0.001～0.01)g/100ml、维生素c为(0.1～5)g/100ml、维生素b12为(0.001～0.01)g/100ml、白藜芦醇为0.1～10μm、白桦脂酸为0.1～10μm、芹菜素为0.1～10μm、hepes溶液为10～25mm。

3.根据权利要求2所述的nk细胞冻存液，其特征在于，在所述nk细胞冻存液中，二甲基亚砜为5ml/100ml、甘油为5ml/100ml、羟乙基淀粉为10g/100ml、海藻糖为5g/100ml、棉子糖为5g/100ml、d-葡萄糖为3g/100ml、谷氨酰胺为0.5g/100ml、丙酮酸钠为0.5g/100ml、甘氨酸为0.005g/100ml、维生素c为1g/100ml、维生素b12为0.003g/100ml、白藜芦醇为0.6μm、白桦脂酸为0.3μm、芹菜素为0.5μm、hepes溶液为20...

【专利技术属性】
技术研发人员：白宗科，迈克尔·莱维特，陈复兴，张月圆，
申请(专利权)人：深圳泽医细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：