体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法及应用技术

本发明专利技术提供一种体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，包括步骤：将PBMC置于培养基中进行培养，所述培养基包括以下组分：GM‑CSF、Poly(I:C)、Flt3l、TNF‑α、ODN2006、Compound 4、自体血浆及AIM‑V基础培养基；基于培养进度更换或补充所述培养基，直至到达预定的培养时间；收集培养后的细胞。本发明专利技术的方法，以PBMC为培养对象，通过培养使PBMC中的DC前体细胞最终分化为pDC细胞，培养方法简单，可实现体外方便、高效获得大量的pDC细胞，为pDC细胞的基础研究和临床应用提供保障。同时，本发明专利技术的培养基培养7天后得到的pDC细胞在无靶细胞刺激的情况下即可分泌较高水平的IFN‑α，有利于其在抗病毒和抗肿瘤治疗中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫细胞培养，尤其涉及一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法及其应用。

技术介绍

1、树突状细胞(dc)是机体内最重要、功能最强的专职性抗原提呈细胞，dc按来源不同主要分为2个亚型:髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell，mdc)和浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells，pdc)。

2、pdc是人体内主要的干扰素(ifn)产生细胞，能产生体内95％以上的ⅰ型ifn(ifn-α)。pdc产生的ifn-α可以抑制病毒的复制和传播，是一种强力抗病毒干扰素。ifn-α还可以通过激活其他免疫细胞起到免疫调节作用。

3、现有关于pdc的体外培养、诱导主要依靠流式细胞技术从外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，pbmc)中分选，但pdc在人pbmc中数量极少，普遍仅占0.2％～0.8％甚至更少，存在个体差异，单纯分选难以获得足够数量的细胞用于体内外及临床应用研究，故限制了对pdc研究和应用的进一步发展。...

【技术保护点】

1.一种体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

2.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述培养基包括以下组分：20ng/mL GM-CSF、100ng/mL Poly(I:C)、50ng/mL Flt3l、100UI/mL TNF-α、1μM ODN2006、0.5μM Compound 4、10％自体血浆。

3.如权利要求1所述的体外诱导PBMC中的DC前体细胞分化为pDC细胞的方法，其特征在于，所述PBMC为采用密度梯度离心法从人外周静脉血中分离所得。

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【技术特征摘要】

1.一种体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

2.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述培养基包括以下组分：20ng/ml gm-csf、100ng/ml poly(i:c)、50ng/ml flt3l、100ui/ml tnf-α、1μm odn2006、0.5μm compound 4、10％自体血浆。

3.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述pbmc为采用密度梯度离心法从人外周静脉血中分离所得。

4.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述预定的培养时间为7天。

5.如权利要求1所述的体外诱导pbmc中的dc前体细胞分化为pdc细胞的方法，其特征在于，所述将pbmc置于培养基中进行培养具体包括步骤：使用经37℃预热的aim-v基础培养基重悬pbmc细胞，并接种于6孔板中，置于37℃二氧化碳培养箱内贴壁培养2小时，洗弃未贴壁的细胞，更换完全培养基进行培养。

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【专利技术属性】
技术研发人员：白宗科，陈复兴，张月圆，
申请(专利权)人：深圳泽医细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：