【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及表达tcr和共刺激受体的免疫细胞，其是多功能的，即分泌2种或更多种蛋白质。示例性的免疫细胞表达：(i)对prame肽sllqhligl特异性的t细胞受体(tcr)或对ny-eso-1肽sllmwitqc特异性的tcr和(ii)包含源自pd-1(cd279)的胞外结构域和源自4-1bb(cd137)的胞内结构域的嵌合共刺激受体。
技术介绍
1、prame是在多种肿瘤，优选黑色素瘤中表达的肿瘤相关抗原。此外，prame已被描述为肿瘤转移(例如葡萄膜黑色素瘤)的独立生物标志物(fiedl et al.,clin cancer res2016march；22(5):1234-1242)和dlbcl的预后标志物(mitsuhashi et al.,hematology2014,1/2014)。除睾丸外，其不在正常组织中表达。这种表达模式与其他癌症-睾丸(ct)抗原(例如mage、bage和gage)的表达模式相似。编码的蛋白质充当视黄酸受体的阻遏蛋白，并可能通过此功能赋予癌细胞生长优势。选择性剪接引发多种转录本变体。还发现，三阴性乳腺癌中的prame过表达通过诱导上皮间质转化来促进癌细胞移动(al-khadairi et al.,journal of translational medicine 2019；17:9)。据报道，慢性淋巴细胞白血病中存在prame缺失，然而这与功能性无关，因为该基因不在b细胞中表达，并且缺失是生理性免疫球蛋白轻链重排的结果。根据所描述的ct抗原prame的特征，它构成了通过使用tcr定向的基于细
2、ny-eso-1和lage-1是属于癌症/睾丸抗原家族的重要免疫治疗靶抗原。癌症/睾丸抗原在各种恶性肿瘤和睾丸的生殖细胞中表达，但不在其他成体组织中表达。
3、tcr修饰的t细胞免疫疗法的成功不仅取决于靶抗原的选择，还取决于具有高抗原特异性和敏感性的tcr的选择。另一个挑战，特别是在实体瘤的治疗中，是免疫抑制性肿瘤微环境(tme)，它会对tcr修饰的t细胞的功效、适应性和持久性产生负面影响。除了抑制性细胞因子和必需代谢因子的缺乏之外，t细胞还面临tme中的抑制性检查点pd-1/pd-l1轴，这会减少t细胞浸润并导致其耗竭。因此，需要新的策略来使tcr修饰的t细胞具有克服抑制性免疫抑制性tme的特性。更具体地，需要对靶向特定抗原(例如ny-eso-1或prame)具有高特异性并具有增强的增殖、细胞因子释放和细胞毒性的tcr修饰的t细胞。
技术实现思路
1、为了满足这些需要，本专利技术提供了高亲和力tcr和嵌合共刺激受体的组合，其允许产生靶向抗原(例如prame或ny-eso-1)并具有增强的细胞因子释放、增殖和细胞毒性的高度特异性t细胞，特别是分泌2种或更多种细胞因子的多功能免疫细胞。
2、本专利技术涉及一种靶标特异性免疫细胞，其表达：
3、(a)抗原特异性tcr，和
4、(b)嵌合共刺激受体，
5、其中所述靶标特异性免疫细胞分泌至少两种蛋白质。
6、因此，本专利技术的一个实施方案是提供一种细胞，包含：
7、(a)ny-eso-1/lage-1特异性tcr，其包含
8、-tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:35的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:36的氨基酸序列的cdr 2和具有seq id no:37的序列的cdr 3；和
9、-tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:38的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:39的氨基酸序列的cdr 2和具有seq id no:40的序列的cdr 3，
10、(b)嵌合共刺激受体，其包含
11、-含有源自pd-1的多肽的胞外结构域，
12、-跨膜结构域，和
13、-含有源自4-1bb的多肽的胞内结构域，
14、所使用的ny-eso-1特异性tcr能够结合具有氨基酸序列sllmwitqc(seq id no:34)或其部分或其hla-a2结合形式的ny-eso-1肽。它提供了高功能性亲和力和有利的肿瘤细胞识别和杀伤特性。共刺激受体逆转抑制性检查点轴pd-1/pd-l1以改善t细胞功能，特别是在抑制性tme中。因此，本专利技术的tcr和嵌合共刺激受体的组合允许以高特异性改善ny-eso-1的靶向，并且具有增强的增殖、细胞因子释放和细胞毒性。
15、本专利技术的另一个实施方案是提供一种细胞，包含：
16、(a)prame特异性t细胞受体(tcr)，其包含
17、-tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:2的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:3的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:4的氨基酸序列的cdr3，和
18、-tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:5的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:6的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:7的氨基酸序列的cdr3；和
19、(b)嵌合共刺激受体，其包含
20、-含有源自pd-1的多肽的胞外结构域，
21、-跨膜结构域，和
22、-含有源自4-1bb的多肽的胞内结构域。
23、所使用的prame特异性tcr能够结合具有氨基酸序列sllqhligl(seq id no:1)或其部分或其hla-a2结合形式的prame肽。它提供了高功能性亲和力和有利的肿瘤细胞识别和杀伤特性。特别地，本专利技术的tcr比现有技术公开的tcr具有更高的功能性亲和力，其最佳地识别所测试的肿瘤细胞系，并且更有效地裂解prame阳性肿瘤细胞。共刺激受体逆转抑制性检查点轴pd-1/pd-l1以改善t细胞功能，特别是在抑制性tme中。因此，本专利技术的tcr和嵌合共刺激受体的组合允许以高特异性改善prame的靶向，并且具有增强的增殖、细胞因子释放和细胞毒性。
24、在一些实施方案中，prame特异性tcr能够结合sllqhligl的hla-a*02:01、hla-a*02:02、hla-a*02:04或hla-a*02:09结合形式。与prame表位sllqhligl或其部分或其hla-a2结合形式的结合尤其诱导转导或转染有tcr的细胞的ifn-γ分泌。
25、在一些实施方案中，tcr包含具有与seq id no:8至少80％相同的氨基酸序列的tcrα可变区和具有与seq id no:9至少80％相同的氨基酸序列的tcrβ可变区。在更具体的实施方案中，tcr包含具有seq id no:8的氨基酸序列的tcrα可变区和具有seq id no:9的氨基酸序列的tcrβ可变区。tcr可包含具有与seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞群，包含表达以下的细胞：
2.根据权利要求2所述的细胞群，其中所述嵌合共刺激受体包含：
3.根据权利要求2所述的细胞群，其中所述嵌合共刺激受体包含：
4.根据权利要求3所述的细胞群，包含表达以下的细胞：
5.根据权利要求1至3所述的细胞群，包含表达以下的细胞：
6.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少三种蛋白质的细胞。
7.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少四种蛋白质的细胞。
8.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少五种蛋白质的细胞。
9.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自效应蛋白、刺激性细胞因子和化学吸引性细胞因子的组。
10.根据权利要求9所述的细胞群，其中所述效应蛋白选自由Gzm-B、IFN-γ、穿孔素、TNF-α、TNF-β、MIP-1α组成的组。
11.根据权利要求10所述的细胞群，其中所述效应蛋白选自由Gzm-B、IFN-γ、穿孔素
12.根据权利要求9至11所述的细胞群，其中所述刺激性细胞因子选自由GM-CSF、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12组成的组。
13.根据权利要求9至12所述的细胞群，其中所述刺激性细胞因子选自由GM-CSF、IL-2、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12组成的组。
14.根据权利要求9至13所述的细胞群，其中所述化学吸引性细胞因子选自IP-10和MIP-1β。
15.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由Gzm-B、IFN-γ、穿孔素、TNF-α、TNF-β、MIP-1α、GM-CSF、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IP-10和MIP-1β组成的组。
16.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由Gzm-B、IFN-γ、穿孔素、TNF-α、TNF-β、GM-CSF、IL-2、IL-8、MIP-1β和IP-10组成的组。
17.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由Gzm-B、IFN-γ、穿孔素、TNF-α、TNF-β、GM-CSF、IL-2、MIP-1β组成的组。
18.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由IFN-γ、Gzm-B和IP-10组成的组。
19.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由IFN-γ和Gzm-B组成的组。
20.根据权利要求4和6至19中任一项所述的细胞群，其中所述TCR能够结合具有SEQ IDNO:34所示氨基酸序列或其部分的NY-ESO肽、优选其HLA-A2结合形式。
21.根据权利要求20所述的细胞群，其中所述HLA-A2是HLA-A*02:01、HLA-A*02:02、HLA-A*02:04或HLA-A*02:09编码的分子，优选HLA-A*2:01编码的分子。
22.根据权利要求5至19中任一项所述的细胞群，其中所述TCR能够结合具有氨基酸序列SLLQHLIGL(SEQ ID NO:1)或其部分的PRAME肽、优选其HLA-A2结合形式。
23.根据权利要求22所述的细胞群，其中所述HLA-A2是HLA-A*02:01、HLA-A*02:02、HLA-A*02:04或HLA-A*02:09编码的分子。
24.根据权利要求3至23中任一项所述的细胞群，其中所述含有源自PD-1的多肽的胞外结构域包括SEQ ID NO:28的序列，并且
25.根据权利要求3至24中任一项所述的细胞群，其中所述跨膜结构域源自PD-1，其中优选地所述含有源自PD-1的多肽的跨膜结构域包括SEQ ID NO:30的序列，优选地其中所述嵌合共刺激受体包括SEQ ID NO:26的序列。
26.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，用于在治疗癌症中使用。
27.一种靶标特异性免疫细胞，表达：
28.根据权利要求27所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述嵌合共刺激受体包含
29.根据权利要求28所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述嵌合共刺激受体包含
30.根据权利要求27至29中任一项所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述靶标特异性免疫细胞表达：
31.根据权利要求27至29中任一项所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述靶标特异性...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞群，包含表达以下的细胞：
2.根据权利要求2所述的细胞群，其中所述嵌合共刺激受体包含：
3.根据权利要求2所述的细胞群，其中所述嵌合共刺激受体包含：
4.根据权利要求3所述的细胞群，包含表达以下的细胞：
5.根据权利要求1至3所述的细胞群，包含表达以下的细胞：
6.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少三种蛋白质的细胞。
7.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少四种蛋白质的细胞。
8.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述细胞群包含分泌至少五种蛋白质的细胞。
9.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自效应蛋白、刺激性细胞因子和化学吸引性细胞因子的组。
10.根据权利要求9所述的细胞群，其中所述效应蛋白选自由gzm-b、ifn-γ、穿孔素、tnf-α、tnf-β、mip-1α组成的组。
11.根据权利要求10所述的细胞群，其中所述效应蛋白选自由gzm-b、ifn-γ、穿孔素、tnf-α、tnf-β组成的组。
12.根据权利要求9至11所述的细胞群，其中所述刺激性细胞因子选自由gm-csf、il-2、il-5、il-7、il-8、il-9、il-12组成的组。
13.根据权利要求9至12所述的细胞群，其中所述刺激性细胞因子选自由gm-csf、il-2、il-7、il-8、il-9、il-12组成的组。
14.根据权利要求9至13所述的细胞群，其中所述化学吸引性细胞因子选自ip-10和mip-1β。
15.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由gzm-b、ifn-γ、穿孔素、tnf-α、tnf-β、mip-1α、gm-csf、il-2、il-5、il-7、il-8、il-9、il-12、ip-10和mip-1β组成的组。
16.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由gzm-b、ifn-γ、穿孔素、tnf-α、tnf-β、gm-csf、il-2、il-8、mip-1β和ip-10组成的组。
17.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由gzm-b、ifn-γ、穿孔素、tnf-α、tnf-β、gm-csf、il-2、mip-1β组成的组。
18.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由ifn-γ、gzm-b和ip-10组成的组。
19.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，其中所述蛋白质选自由ifn-γ和gzm-b组成的组。
20.根据权利要求4和6至19中任一项所述的细胞群，其中所述tcr能够结合具有seq idno:34所示氨基酸序列或其部分的ny-eso肽、优选其hla-a2结合形式。
21.根据权利要求20所述的细胞群，其中所述hla-a2是hla-a*02:01、hla-a*02:02、hla-a*02:04或hla-a*02:09编码的分子，优选hla-a*2:01编码的分子。
22.根据权利要求5至19中任一项所述的细胞群，其中所述tcr能够结合具有氨基酸序列sllqhligl(seq id no:1)或其部分的prame肽、优选其hla-a2结合形式。
23.根据权利要求22所述的细胞群，其中所述hla-a2是hla-a*02:01、hla-a*02:02、hla-a*02:04或hla-a*02:09编码的分子。
24.根据权利要求3至23中任一项所述的细胞群，其中所述含有源自pd-1的多肽的胞外结构域包括seq id no:28的序列，并且
25.根据权利要求3至24中任一项所述的细胞群，其中所述跨膜结构域源自pd-1，其中优选地所述含有源自pd-1的多肽的跨膜结构域包括seq id no:30的序列，优选地其中所述嵌合共刺激受体包括seq id no:26的序列。
26.根据前述权利要求中任一项所述的细胞群，用于在治疗癌症中使用。
27.一种靶标特异性免疫细胞，表达：
28.根据权利要求27所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述嵌合共刺激受体包含
29.根据权利要求28所述的靶标特异性免疫细胞，其中所述嵌合共刺激受体包含
30.根据权利要求27至29中任一项所述的靶标特异性免疫细...
【专利技术属性】
技术研发人员：玛娅·布尔德克，凯瑟琳·穆兹，佩特拉·普林茨，安吉利卡·赫尔姆布莱希特，
申请(专利权)人：基因医疗免疫疗法有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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