【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及一种vegf和ang-2双特异性抗体及其应用，更具体地，本专利技术涉及一种双抗、抗体或抗原结合片段、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物、药物、试剂盒、制备试剂盒的用途、制药用途。
技术介绍
1、血管生成参与多种疾病的发病机理，包括实体瘤，眼内新生血管综合征(intraocular neovascular syndromes)，如增殖性视网膜病变(proliferativeretinopathies)、年龄相关性黄斑变性(age-related macular degenetarion，amd)，炎性疾病，如类风湿关节炎(rheumatoid arthritis)和牛皮癣等。
2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，在血管发生、维持及生成中发挥重要生理功能，具有诱导内皮细胞存活、增殖、迁移、血管增生和增加血管通透性等重要作用。因此，对vegf信号通路的抑制，可以治疗肿瘤、眼科等血管生成引起的相关的疾病。
3、在vegf抑制剂方面开展的工作包括：有抑制作用的抗vegf单克隆抗体，例如贝伐珠单抗(wo 98/45331)、兰尼单抗(wo98/45331)；和可溶性的vegf受体(vegfr)抑制剂，例如阿柏西普。
4、血管生成素-2(angiopoietin 2，ang-2)是一个分子量约为70kda的分泌型糖蛋白，在血管生成、炎症和血管发育中起
5、在ang-2抑制剂方面开展的工作包括：有抑制作用的抗ang-2单克隆抗体，和可溶性的ang-2受体抑制剂，例如可溶性tie2。与单一抑制剂相比，vegf、ang-2双抑制剂能够获得协同促进效果，在双抑制剂方面开展的工作包括：具有抑制作用的抗vegf与具有抑制作用的抗ang-2双特异性抗体，例如faricimab(商品名vabysmo)，是特异性结合人vegfa的第一抗原结合位点和特异性结合人ang-2的第二抗原结合位点的非对称crossmab结构双特异性二价抗体。
6、进一步地，开发出对vegf和ang-2具有更高结合活性的抗体对血管生成相关疾病的治疗具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一：
2、本申请中专利技术人设计了一种vegf和ang-2对称型四价双特异性抗体，经实验验证，意外地发现所述对称型四价双特异性抗体相较于市场上现有的vegf和ang-2双特异性抗体具有与vegf和ang-2更高的结合活性，可以有效阻断vegf、ang-2与其各自受体的结合，具有抑制血管生成和减少血管炎症的作用，且其制备以及功能稳定性也得到提高，能够有效治疗或预防血管生成导致的相关疾病。
3、因此，在本专利技术的的第一方面，本专利技术提出了一种双抗。根据本专利技术的实施例，所述双抗包括第一结合区，所述第一结合区包含单链抗体，所述单链抗体具有ang-2结合活性；第二结合区，所述第二结合区包括vegf受体片段。根据本专利技术实施例的所述双抗与vegf和ang-2均具有较高的结合活性，可以有效阻断vegf与vegf受体、ang-2与其受体，如tie2的结合，且所述双抗的稳定性较高，在制备和使用过程中均能够稳定发挥作用，能够有效治疗或预防血管生成导致的相关疾病。
4、根据本专利技术的实施例，上述双抗还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
5、根据本专利技术的实施例，所述双抗为对称双抗。根据本专利技术的一些具体实施例的对称结构vegf和ang-2双抗相较于非对称结构的faricimab具有更好的结合活性，当然，本领域技术人员可以理解，所述双抗可以是包括具有ang-2结合活性的单链抗体和vegf受体片段的不对称抗体。
6、根据本专利技术的实施例，所述单链抗体包括抗体重链可变区和抗体轻链可变区。
7、根据本专利技术的实施例，所述抗体重链可变区的c端与所述抗体轻链可变区的n端相连，或者所述抗体轻链可变区的c端与所述抗体重链可变区的n端相连。
8、根据本专利技术的实施例，所述单链抗体进一步包括第一连接肽。
9、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽具有氨基酸序列(ggggs)n，其中n为大于或等于1的整数，优选为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本领域技术人员可以理解，本领域常规连接肽均可使用，如常规的柔性氨基酸片段或刚性氨基酸片段。
10、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽具有seq id no:2所示的氨基酸序列。
11、根据本专利技术的实施例，所述第一连接肽的n端与所述抗体重链可变区的c端相连，所述第一连接肽的c端与所述抗体轻链可变区的n端相连；或者所述第一连接肽的n端与所述抗体轻链可变区的c端相连，所述第一连接肽的c端与所述抗体重链可变区的n端相连。
12、根据本专利技术的实施例，所述抗体轻链可变区具有seq id no:3、5和7中任一项所示的氨基酸序列。
13、根据本专利技术的实施例，所述抗体重链可变区具有seq id no:4、6和8中任一项所示的氨基酸序列。
14、根据本专利技术的实施例，所述抗体轻链可变区具有g104位或g105位氨基酸突变。本申请中，专利技术人以seq id no:5所示的氨基酸序列进行氨基酸位点的定位，对第105位的g进行突变，或者以seq id no:7所示的氨基酸序列进行氨基酸位点的定位，对第104位的g进行突变，经实验检测后，意外地发现具有g104位或g105氨基酸突变的抗体轻链可变区的双抗仍然具有较现有的vegf和ang-2双抗更高的vegf和ang-2结合活性，且其稳定性得到显著提高，在制备和使用过程中均能够稳定存在并发挥作用，治疗或预防血管生成相关疾病的效果优。
15、根据本专利技术的实施例，所述重链可变区具有g44位氨基酸突变。本申请中，专利技术人以seq id no:6所示的氨基酸序列进行氨基酸位点的定位，对第44位的g进行突变，或者以seq id no:8所示的氨基酸序列进行氨基酸位点的定位，对第44位的g进行突变，经实验检测后，意外地发现具有g44氨基酸突变的抗体重链可变区的双抗仍然具有较现有的vegf和ang-2双抗更高的vegf和ang-2结合活性，且其稳定性得到显著提高，在制备和使用过程中均能够稳定存在并发挥作用，治疗或预防血管生成相关疾病的效果优。
16、根据本专利技术的实施例，所述抗体轻链可变区具有g104c或g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双抗，其特征在于，包括：
2.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区具有G104位或G105位氨基酸突变。
3.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有G44位氨基酸突变。
4.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区具有G104位或G105位氨基酸突变，所述重链可变区具有G44位氨基酸突变。
5.根据权利要求2～4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区具有G104C或G105C突变；
6.根据权利要求4～5任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为单链抗体；
7.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的双抗或权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段。
8.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求7所述的核酸分子。
9.一种重组细胞，其特征在于，携带权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体，或者表达
10.一种组合物，其特征在于，包括：权利要求1所述的双抗，权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段，权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体或权利要求9所述的重组细胞。
11.一种药物，其特征在于，包括：权利要求1所述的双抗，权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段，权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体，权利要求9所述的重组细胞，或权利要求10所述的组合物。
12.一种试剂盒，其特征在于，包括：
13.权利要求1所述的双抗，权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段，权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体或权利要求9所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测ANG-2和/或VEGF。
14.权利要求1所述的双抗，权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段，权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体，权利要求9所述的重组细胞或权利要求10所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防血管生成引起的相关疾病；
...【技术特征摘要】
1.一种双抗，其特征在于，包括：
2.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区具有g104位或g105位氨基酸突变。
3.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有g44位氨基酸突变。
4.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区具有g104位或g105位氨基酸突变，所述重链可变区具有g44位氨基酸突变。
5.根据权利要求2～4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区具有g104c或g105c突变；
6.根据权利要求4～5任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为单链抗体；
7.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的双抗或权利要求2～6任一项所述的抗体或抗原结合片段。
8.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求7所述的核酸分子。
9.一种重组细胞，其特征在于，携带权利要求7所述的核酸分子，权利要求8所述的表达载体，或者表达权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：危喜玲，邱玉信，尚维，邓妃燕，秦锁富，
申请(专利权)人：科兴生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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