一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂。所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂至少包括聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、辅料、注射用水；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子的浓度为5‑15mg/mL；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的pH值为4‑4.4。本发明专利技术提供的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子新制剂，避免使用聚山梨酯作为稳定剂，在人体内不会引起血压降低、心率加快、溶血等副作用。通过精氨酸替代聚山梨酯，对蛋白质结构起到稳定作用，显著降低了蛋白质聚集体的形成，对聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的稳定性作用得到显著的提升。

【技术实现步骤摘要】
一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂
本专利技术属于生物
，具体涉及一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂。
技术介绍
近年来，国内外生物药物行业的发展水平和速度均有大幅提高，越来越多的生物药应用于人类各类疾病，重组人粒细胞刺激因子(recombinanthumangranuLocytecoLony-stimuLatingfactor，rhG-CSF)能够应用于癌症化疗等原因导致中性粒细胞减少症，由于蛋白药物的自身特性，rhG-CSF具有短效性、易受体内酶解作用等缺点。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子是重组人粒细胞刺激因子与单甲氧基聚乙二醇共价缀合物，由重组人粒细胞刺激因子N端甲硫氨酸的氨基与单醇共价结合。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子用于非髓性恶性肿瘤患者在接受会发生有临床意义发热性中性粒细胞减少的抑制骨髓的抗肿瘤药治疗时，降低因发热性中性粒细胞减少而引起的感染发生率。目前国内外各种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子中常用的缓冲体系为醋酸-醋酸钠缓冲液，同时常添加聚山梨酯作为蛋白质稳定剂。聚山梨酯可帮助稳定蛋白质结构起到助溶作用，可以减少蛋白质聚集形成，增加制剂的稳定性。但是聚山梨酯在人体内可引起血压降低、心率加快、溶血等副作用。
技术实现思路
为了避免使用聚山梨酯作为稳定剂带来的副作用，本专利技术第一个方面提供了一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂至少包括聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、辅料、注射用水；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子的浓度为5-15mg/mL；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的pH值为4-4.4。作为一种优选的技术方案，所述辅料选自蛋白质稳定剂、渗透压调节剂、缓冲剂、冻存保护剂中的一种或多种。作为一种优选的技术方案，所述蛋白质稳定剂选自蔗糖、海藻糖、氨基酸、聚乙二醇、乙醇、甘露醇、甘油、乙二醇、聚山梨酯中的一种或多种。作为一种优选的技术方案，所述氨基酸选自精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸中的一种或多种。作为一种优选的技术方案，所述渗透压调节剂选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠、山梨醇、硫酸钾中的一种或几种。作为一种优选的技术方案，所述山梨醇的浓度为40-60mg/mL。作为一种优选的技术方案，所述缓冲剂选自邻苯二甲酸、邻苯二甲酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸、乙酸钠、甘氨酸、2-吗啉代乙磺酸中的至少两种。作为一种优选的技术方案，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂在35-39℃试验后蛋白质含量为9.5-10.5mg/mL、蛋白质纯度大于98％。作为一种优选的技术方案，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂在35-39℃试验后10μm及10μm以上的不溶性微粒数小于200个/mL，25μm以上的不溶性微粒数小于30个/mL。本专利技术第二个方面提供了一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的制备方法，包括如下步骤：将辅料加入注射用水，搅拌至混合均匀，再加入聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子，搅拌至混合均匀；再进行除菌、过滤，灌装，即得所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂。有益效果：本专利技术提供的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子新制剂，避免使用聚山梨酯作为稳定剂，在人体内不会引起血压降低、心率加快、溶血等副作用。通过精氨酸替代聚山梨酯，对蛋白质结构起到稳定作用，显著降低了蛋白质聚集体的形成，且柠檬酸缓冲液和渗透压调节剂共同作用，对聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的稳定性作用得到显著的提升。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“2至3”和“3至4”、“4至5”和“3至5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。此外，本专利技术要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。为了解决上述技术问题，本专利技术第一个方面提供了一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂至少包括聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、辅料、注射用水；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子的浓度为5-15mg/mL；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的pH值为4-4.4。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子本专利技术中，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)，是重组人粒细胞刺激因子与单甲氧基聚乙二醇共价缀合物，由重组人粒细胞刺激因子N端甲硫氨酸的氨基与单醇共价结合。单甲氧基聚乙二醇的分子量约为20kD，聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的平均分子量为39kD。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子用于非髓性恶性肿瘤患者在接受会发生有临床意义发热性中性粒细胞减少的抑制骨髓的抗肿瘤药治疗时降低因发热性中性粒细胞减少而引起的感染发生率。在一种实施方式中，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的平均分子量为39kD，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子自制。在一种实施方式中，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的制备方法，包括如下步骤：(1)rhG-CSF反应溶液(40mL，浓度为3mg/mL)，内含100mM磷酸钠，pH5.0，还含有120mM维生素B6，将其充分搅拌冷冻(4℃)后，加入5倍蛋白质量的甲氧聚乙二醇醛(平均分子量为20kDa)。反应混合物在相同温度下持续搅拌；(2)反应过程中蛋白质的修饰率用RP-HPLC来对其监测，RP-HPLC使用的是C18250×4.6mm5μm柱(phenomenex)，用0.1％三氟乙酸水溶液，0.1％三氟乙酸乙腈，以1.0mL/min流速进行梯度洗脱。本专利技术中，所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子只适用于非骨髓性癌症患者在接受易引起临床上显著的发热性中性粒细胞减少症发生的骨髓抑制性抗癌药物治疗，不用于造血干细胞移植的外周血祖细胞的动员。聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)的作用机理是粒细胞刺激因子与造血细胞的表面受体结合后作用于造血细胞，从而刺激增殖、分化、定型与成熟细胞功能活化。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂至少包括聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、辅料、注射用水；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子的浓度为5-15mg/mL；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的pH值为4-4.4。/n

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂至少包括聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子、辅料、注射用水；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子的浓度为5-15mg/mL；所述聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂的pH值为4-4.4。


2.根据权利要求1所述的聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述辅料选自蛋白质稳定剂、渗透压调节剂、缓冲剂、冻存保护剂中的一种或多种。


3.根据权利要求2所述的聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述蛋白质稳定剂选自蔗糖、海藻糖、氨基酸、聚乙二醇、乙醇、甘露醇、甘油、乙二醇、聚山梨酯中的一种或多种。


4.根据权利要求3所述的聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述氨基酸选自精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸中的一种或多种。


5.根据权利要求2所述的聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子新制剂，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠、山梨醇、硫酸钾中的一种或几种。


6.根据权利要求5所述的聚乙二醇修饰重组人粒细胞刺激因子...

【专利技术属性】
技术研发人员：马玉涛，孔凡楼，崔宁，董成涛，魏述亮，胡贵新，李思，
申请(专利权)人：科兴生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37