【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其是涉及一种杂交瘤细胞株、抗人pten单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、pten基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsometen，pten)是1997年首次被报道的一种抑癌基因，是人类发现的第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因。pten蛋白由于具有磷酸酶的活性，可以通过去除磷酸基对其他蛋白进行修饰，阻止细胞生长、分裂的速度过快或者分裂不受控制，使细胞停止分裂进入凋亡，从而实现对细胞分裂周期的调控，进而抑制肿瘤的形成。
2、pten基因的缺失或突变与多种肿瘤的发生高度相关。纯合缺失pten基因的小鼠胚胎致死，杂合缺失pten基因的小鼠则自发形成多种类型的肿瘤，例如子宫内膜癌、乳腺癌、肺癌、神经胶质瘤等。胞浆中pten蛋白的主要功能是通过其脂质磷酸酶活性，调节第二信使pip3的磷酸化水平，阻断akt/pkb通路，pten的失活将导致pi3k/akt通路处于持续性活化状态。核内pten蛋白可以与p53形成核内复合体，抑制p53降解并增强p53的转录活性；核内pten蛋白的缺失会促进肿瘤的发生发展，表明核内pten也主要发挥抑癌功能。
3、子宫内膜癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，pten表达缺失在该病的发病中起着重要作用。研究表明，pten表达缺失可见于30-50％的子宫内膜癌患者，同时约25％的伴非典型复杂增生的子宫内膜也会发生pten表达缺失。然而，pten表达缺失并不是恶性转化的特异性标记，其在正常增生期子
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种杂交瘤细胞株、抗人pten单克隆抗体及其应用，以提供一种与pten蛋白特异性结合的单克隆抗体，提高pten蛋白免疫检测的特异性和灵敏性。
2、为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供一种杂交瘤细胞株，命名为oti9b1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.45714，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年09月06日。
4、抗人pten单克隆抗体，由所述的一种杂交瘤细胞株oti9b1分泌产生。
5、本专利技术所述一种杂交瘤细胞株的筛选方法及单克隆抗体制备方法如下：
6、(1)重组表达载体的构建：根据pten的氨基酸序列特征，设计pten的第250-403位氨基酸片段为免疫原(其对应的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq idno.2所示)，设计引物，基因两侧分别引入限制性内切酶位点sgfi和mlui，插入表达载体pet23a-n-his，构建重组表达质粒pet23a-rpten。
7、(2)重组pten蛋白的表达与纯化：将构建的pten重组表达质粒转化e.coli细胞，裂解离心获得上清，镍亲和层析柱纯化，获得纯化的重组pten蛋白。
8、(3)单克隆抗体杂交瘤细胞株筛选及其分泌的单克隆抗体制备：采用上述重组pten蛋白免疫balb/c小鼠，取小鼠脾脏细胞分别与sp2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，elisa法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗人pten蛋白的特异性抗体杂交瘤细胞株，并进行亚型鉴定；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得抗人pten单克隆抗体。
9、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体，其轻链可变区含111aa，其氨基酸序列如seqid no.3所示；其重链可变区含115aa，其氨基酸序列如seq id no.7所示。
10、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体，其中轻链可变区包括cdr1、cdr2和cdr3，相应地分别为27aa-38aa，56aa-58aa和95aa-100aa，其氨基酸序列分别如seq id no.4-6所示。
11、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体，其中重链可变区包括cdr1、cdr2和cdr3，相应地分别为26aa-33aa，51aa-58aa和97aa-104aa，其氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示。
12、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体可以与pten蛋白高特异性结合，通过免疫检测方法，如免疫组织化学实验(ihc)，验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
13、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
14、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，免疫检测工具用于检测pten蛋白。
15、进一步地，所述抗人pten单克隆抗体在制备用于标记各种组织试剂盒中的应用；优选地，所述组织包括子宫内膜癌、肠癌、胰腺。
16、一种免疫组织化学检测试剂盒，包括如上所述的抗人pten单克隆抗体，可检测各种组织中pten蛋白的表达状况。
17、相对于现有技术，本专利技术所述的一种杂交瘤细胞株oti9b1、抗人pten单克隆抗体及其应用具有以下优势：
18、本专利技术所述的一种杂交瘤细胞株oti9b1可稳定分泌抗人pten单克隆抗体，且与pten蛋白特异性结合，显著提高了pten蛋白免疫检测的特异性、灵敏性、准确性和可靠性，可适用于各种组织中pten蛋白的标记。。
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1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株命名为OTI9B1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45714。
2.抗人PTEN单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株OTI9B1分泌产生。
3.根据权利要求2所述的抗人PTEN单克隆抗体，其特征在于，所述抗人PTEN单克隆抗体与PTEN蛋白特异性结合。
4.根据权利要求2所述的抗人PTEN单克隆抗体，其特征在于，所述抗人PTEN单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；重链可变区包括如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的抗人PTEN单克隆抗体，其特征在于，所述抗人PTEN单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列如SEQ IDNO.4-6所示。
6.根据权利要求2所述的抗人PTEN单克隆抗体，其特征在于，所述抗人PTEN单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，其CDR1
7.根据权利要求2-6任一项所述的抗人PTEN单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
8.根据权利要求7所述的抗人PTEN单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用，其特征在于，所述免疫检测工具用于检测PTEN蛋白。
9.根据权利要求2-6任一项所述的抗人PTEN单克隆抗体在制备用于标记各种组织试剂盒中的应用；优选地，所述组织包括子宫内膜癌、肠癌、胰腺。
10.一种免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2-6任一项所述的抗人PTEN单克隆抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株命名为oti9b1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.45714。
2.抗人pten单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株oti9b1分泌产生。
3.根据权利要求2所述的抗人pten单克隆抗体，其特征在于，所述抗人pten单克隆抗体与pten蛋白特异性结合。
4.根据权利要求2所述的抗人pten单克隆抗体，其特征在于，所述抗人pten单克隆抗体的轻链可变区包括如seq id no.3所示的氨基酸序列；重链可变区包括如seq id no.7所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的抗人pten单克隆抗体，其特征在于，所述抗人pten单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，其cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列如se...
【专利技术属性】
技术研发人员：张冉冉，王晶晶，叶露，任琪，付伟，
申请(专利权)人：北京中杉金桥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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