【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，特别是涉及一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、组蛋白主要由h1、h2a、h2b、h3和h4等5种类型蛋白质亚基组成，组蛋白修饰是最重要、最复杂的表观遗传调控机制之一，包括组蛋白乙酰化、甲基化、磷酸化和泛素化等。组蛋白甲基化主要参与基因的表达调控、基因印记和x染色体失活，调节胚胎发育、细胞增生和分化，与细胞衰老以及肿瘤发生发展有着密切关系。组蛋白h3其基因位于1q42.12，编码136aa，分子量约15.4kda，是发生修饰最多的组蛋白。其第4、9、27、36和79位赖氨酸残基是甲基化修饰的位点，对基因表达发挥重要作用。h3k27me3是指组蛋白h3第27位赖氨酸三甲基化，是最为常见的组蛋白甲基化修饰之一。ezh2具有组蛋白甲基转移酶的作用，它使h3k27侧链的ε氨基发生三甲基化，h3k27me3将prc2复合物招募到特定的基因位点，沉默靶基因的表达。h3k27me3在表观遗传中是重要的基因沉默的标志，参与调节细胞分化和增殖之间的平衡，表达失衡会使细胞增殖分化失控，导致肿瘤的发生。
2、检测h3k27me3的方法主要有western blot、免疫组织化学(ihc)、染色质免疫沉淀-测序(chip-seq)、流式细胞术(fcm)等。可根据使用目的和样本特征选择相应方法，比如采用westernblot分析外周血细胞中h3k27me3的表达，ihc检测实体肿瘤组织中h3k27me3水平，chip-seq技术能够显示h3k27me3在整个基因组内结合特定基因和序列的信息，这些
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，解决了上述
技术介绍
中所提出的问题，能够提供一种与h3k27me3蛋白特异性结合的兔单克隆抗体，及其在制备用于检测h3k27me3蛋白的免疫检测工具中的应用。
2、本专利技术解决上述技术问题的方案如下：一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，包括兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体为otir6d5；
3、其制备方式包括以下步骤：
4、s1：合成h3蛋白的第25-44位氨基酸，在第27位的赖氨酸的氨基做三甲基化修饰，在肽链的n端偶联klh作为免疫原，氨基酸序列如seq id no.1，上述免疫原通过注射免疫新西兰大白兔；
5、s2：获取免疫动物的外周血单核细胞(pbmcs)，分选特异性b细胞；
6、s3：经分子克隆、重组载体转染至哺乳动物细胞中；
7、s4：培养细胞获得含分泌抗体的上清，将上清经亲和层析纯化获得抗h3k27me3的兔单克隆抗体。
8、在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
9、进一步，s2中所述分选是以seq id no.1序列对应的裸肽和该肽段野生型、27位点单甲基化(h3k27me)、二甲基化(h3k27me2)的肽段做elisa法筛选，以筛选特异性识别h3k27me3蛋白的克隆即特异性b细胞。
10、进一步，所述兔单克隆抗体的抗体轻链可变区(vl)含有107个氨基酸，其序列如seq id no.2所示，含有3个互补决定区：cdr1、cdr2和cdr3，互补决定区的区域分别为27-34aa、52-54aa、91-97aa；重链可变区(vh)含108个氨基酸，其序列如seq id no.6所示，含有3个互补决定区：cdr1、cdr2和cdr3，互补决定区的区域分别为25-32aa、50-56aa、94-97aa
11、进一步，所述兔单克隆抗体应用于标记正常组织细胞和肿瘤组织细胞试剂盒中。
12、进一步，所述的兔单克隆抗体otir6d5可以与h3k27me3蛋白高特异性结合，通过免疫检测工具验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
13、进一步，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸，用于检测h3k27me3蛋白。
14、进一步，所述正常组织包括扁桃体、甲状腺、阑尾、乳腺，所述肿瘤组织包括：乳腺癌、结肠癌和h3k27me3缺失表达的肿瘤。
15、本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，具有以下优点：
16、1、这样的抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体可与h3k27me3蛋白特异性结合，显著提高了h3k27me3蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，可适用于各类组织中h3k27me3蛋白的标记；
17、2、利用甲基化修饰的肽段作为免疫原，以非甲基化、单甲基化和二甲基化的肽段做交叉筛选，可以精确的筛选到特异性识别h3k27me3蛋白，不与非甲基化，h3k27me1、h3k27me2交叉的克隆。
18、3、利用分子重组的方法制备兔单抗周期短、可获得抗体序列，可实现对抗体的下游编辑功能。
19、4、利用哺乳动物细胞表达生产抗体，能够更好的实现抗体的糖基化等多种转录后翻译加工功能，使抗体更趋于天然状态，具有更高的亲和性。
20、上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例说明如后。本专利技术的具体实施方式由以下实施例详细给出。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，包括兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体为OTIR6D5；
2.根据权利要求1所述一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，S2中所述分选是以SEQ ID NO.1序列对应的裸肽和该肽段野生型、27位点单甲基化(H3K27me)、二甲基化(H3K27me2)的肽段做ELISA法筛选，以筛选特异性识别H3K27me3蛋白的克隆即特异性B细胞。
3.根据权利要求1所述一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，所述兔单克隆抗体的抗体轻链可变区(VL)含有107个氨基酸，其序列如SEQ ID NO.2所示，含有3个互补决定区：CDR1、CDR2和CDR3，互补决定区的区域分别为27-34aa、52-54aa、91-97aa；重链可变区(VH)含108个氨基酸，其序列如SEQ ID NO.6所示，含有3个互补决定区：CDR1、CDR2和CDR3，互补决定区的区域分别为25-32aa、50-56aa、94-97aa。
4.根据权利要求1～3所述一种抗人H3K
5.根据权利要求4所述一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，所述的兔单克隆抗体OTIR6D5可以与H3K27me3蛋白高特异性结合，通过免疫检测工具验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
6.根据权利要求5所述一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸，用于检测H3K27me3蛋白。
7.根据权利要求4所述一种抗人H3K27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，所述正常组织包括扁桃体、甲状腺、阑尾、乳腺，所述肿瘤组织包括：乳腺癌、结肠癌和H3K27me3缺失表达的肿瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，包括兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体为otir6d5；
2.根据权利要求1所述一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，s2中所述分选是以seq id no.1序列对应的裸肽和该肽段野生型、27位点单甲基化(h3k27me)、二甲基化(h3k27me2)的肽段做elisa法筛选，以筛选特异性识别h3k27me3蛋白的克隆即特异性b细胞。
3.根据权利要求1所述一种抗人h3k27me3蛋白兔单克隆抗体及其应用，其特征在于，所述兔单克隆抗体的抗体轻链可变区(vl)含有107个氨基酸，其序列如seq id no.2所示，含有3个互补决定区：cdr1、cdr2和cdr3，互补决定区的区域分别为27-34aa、52-54aa、91-97aa；重链可变区(vh)含108个氨基酸，其序列如seq id no.6所示，含有3个互补决定区：cdr1、...
【专利技术属性】
技术研发人员：张冉冉，扈晓敏，叶露，王晶晶，付伟，
申请(专利权)人：北京中杉金桥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。