【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其是涉及一种杂交瘤细胞株、抗hp单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，简称hp)是一种革兰阴性杆菌，它的致病力强，感染率高，可以在人与人之间传播，已经成为世界性公共卫生问题。以家庭为基础的幽门螺杆菌hp流行病学研究表明，个体的平均幽门螺杆菌hp感染率为40.66％，其中成人为43.45％，儿童和青少年为20.55％。29个省份的家庭幽门螺杆菌hp感染率介于50.27％至85.06％之间，平均感染率71.21％。幽门螺杆菌hp感染与众多消化系统疾病的发生密切相关，如各种胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌等。它是预防胃癌最重要且最可控的危险因素。根据现有检测数据，胃溃疡中幽门螺杆菌hp的检出率为70％-80％，十二指肠溃疡中幽门螺杆菌hp的检出率约为90％。由幽门螺杆菌hp感染引起的胃炎中，15-20％会发生溃疡性病变。目前有多种方法可用于幽门螺杆菌hp感染的检测，但每种检测方法都具有其自身特点。幽门螺杆菌hp感染后，通常缺乏临床表现特征，诊断主要依靠实验检测，并且细菌培养是幽门螺杆菌hp感染诊断的金标准，但该培养方法和技术要求高，且经抗生素的治疗幽门螺杆菌hp会发生形态的改变，无法进行细菌培养。还可以用he(hematoxylin-eosin staining)、giemsa、w-s银染法、碱性品红染色等染色法，但这些染色方法菌体与周围组织背景对比不明显，幽门螺杆菌hp少时高倍镜下难以发现，阅片困难。相比之下，免疫组织化学ihc方法具有较高的敏感
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种杂交瘤细胞株、抗hp单克隆抗体及其应用，以提供一种与幽门螺杆菌hp特异性结合的单克隆抗体，提高幽门螺杆菌hp免疫检测的特异性和灵敏性。
2、为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供一种杂交瘤细胞株，命名为鼠抗人hp单克隆杂交瘤细胞株oti2c8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.45713，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年09月06日。
4、抗hp单克隆抗体，由所述的一种杂交瘤细胞株oti2c8分泌产生。
5、本专利技术所述一种杂交瘤细胞株的筛选方法及单克隆抗体制备方法如下：
6、(1)重组表达载体的构建：并非所有幽门螺杆菌hp都会表达尿素酶，所以寻找保守基因编码蛋白作为单抗开发的靶点至关重要。fla基因是所有幽门螺杆菌hp共同具有的保守基因，编码鞭毛蛋白，由flaa和flab两个亚单位组成。可以flaa为靶点开发单克隆抗体，分析flaa蛋白的抗原性、亲水性等特征，设计flaa原核全长蛋白作为免疫原(其对应的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示)，设计引物，基因两侧分别引入限制性内切酶位点sgfi和mlui，插入表达载体pet23a-n-his，构建重组表达质粒pet23a-rhp。
7、(2)幽门螺杆菌hp蛋白的表达与纯化：将构建的幽门螺杆菌hp重组表达质粒转化e.coli细胞，裂解离心获得上清，镍亲和层析柱纯化，获得纯化的重组幽门螺杆菌hp的flaa蛋白。
8、(3)单克隆抗体杂交瘤细胞株筛选及其分泌的单克隆抗体制备：采用上述重组幽门螺杆菌hp的flaa蛋白免疫balb/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与sp2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，elisa法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗幽门螺杆菌hp的flaa蛋白的特异性抗体杂交瘤细胞株，并进行亚型鉴定；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得抗hp单克隆抗体。
9、进一步地，所述抗hp单克隆抗体，其轻链可变区含105aa，其氨基酸序列如seq idno.3所示；其重链可变区含112aa，其氨基酸序列如seq id no.7所示。
10、进一步地，所述抗hp单克隆抗体，其中轻链可变区包括cdr1、cdr2和cdr3，相应地分别为27aa-32aa，50aa-52aa和89aa-94aa，其氨基酸序列分别如seq id no.4-6所示。
11、进一步地，所述抗hp单克隆抗体，其中重链可变区包括cdr1、cdr2和cdr3，相应地分别为26aa-33aa，51aa-58aa和91aa-101aa，其氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示。
12、进一步地，所述抗hp单克隆抗体可以与幽门螺杆菌hp高特异性结合，通过免疫检测方法，如免疫组织化学实验(ihc)，验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。
13、进一步地，所述抗hp单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
14、进一步地，所述抗hp单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，免疫检测工具用于检测幽门螺杆菌hp。
15、进一步地，所述抗hp单克隆抗体在制备用于标记幽门螺杆菌hp感染组织试剂盒中的应用；优选地，所述组织包含幽门螺杆菌hp感染的胃组织。
16、一种免疫组织化学检测试剂盒，包括如上所述的抗hp单克隆抗体，可检测各种组织中幽门螺杆菌hp的感染情况。
17、相对于现有技术，本专利技术所述的一种杂交瘤细胞株oti2c8、抗hp单克隆抗体及其应用具有以下优势：
18、本专利技术所述的一种杂交瘤细胞株oti2c8可稳定分泌抗hp单克隆抗体，且与幽门螺杆菌hp特异性结合，显著提高了幽门螺杆菌hp免疫检测的特异性、灵敏性、准确性和可靠性，可适用于各种组织中幽门螺杆菌hp感染的检测。
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1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株命名为OTI2C8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45713。
2.抗Hp单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株OTI2C8分泌产生。
3.根据权利要求2所述的抗Hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗Hp单克隆抗体与幽门螺杆菌Hp特异性结合。
4.根据权利要求2所述的抗Hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗Hp单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；重链可变区包括如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的抗Hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗Hp单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO.4-6所示。
6.根据权利要求2所述的抗Hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗Hp单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，其CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO
7.根据权利要求2-6任一项所述的抗Hp单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用；优选地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。
8.根据权利要求7所述的抗Hp单克隆抗体在制备免疫检测工具中的应用，其特征在于，所述免疫检测工具用于检测幽门螺杆菌Hp。
9.根据权利要求2-6任一项所述的抗Hp单克隆抗体在制备用于标记幽门螺杆菌Hp感染组织试剂盒中的应用；优选地，所述组织包含幽门螺杆菌Hp感染的胃组织。
10.一种免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2-6任一项所述的抗Hp单克隆抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株命名为oti2c8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.45713。
2.抗hp单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株oti2c8分泌产生。
3.根据权利要求2所述的抗hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗hp单克隆抗体与幽门螺杆菌hp特异性结合。
4.根据权利要求2所述的抗hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗hp单克隆抗体的轻链可变区包括如seq id no.3所示的氨基酸序列；重链可变区包括如seq id no.7所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的抗hp单克隆抗体，其特征在于，所述抗hp单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，其cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列如seq id no...
【专利技术属性】
技术研发人员：张冉冉，王晶晶，叶露，任琪，付伟，
申请(专利权)人：北京中杉金桥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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