【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及神经酰胺的检测，尤其涉及一种酱油渣中神经酰胺的检测方法。
技术介绍
1、神经酰胺（ceramides）是一种脂质类分子，是皮肤屏障中重要的组成部分。它们在皮肤细胞间隙中存在，帮助维持皮肤的健康和功能。神经酰胺起到保护皮肤屏障、减少水分流失、调节皮肤保湿、抵御外部环境刺激等作用。神经酰胺在皮肤中的主要功能之一是维持皮肤屏障的完整性。它们通过填充皮肤细胞间的间隙，减少水分蒸发和外部刺激物质的渗透，防止皮肤干燥和敏感。此外，神经酰胺还参与调节角质层的细胞分化和更新，有助于维持皮肤的健康状态。随着人们对护肤和美容的关注度提高，护肤品市场呈现出稳定的增长趋势。神经酰胺作为一种具有保湿和修复功能的成分，受到了护肤品制造商和消费者的广泛关注。随着科技的不断进步，神经酰胺的提取和合成技术也在不断改进。制造商通过开发新的提取方法、改进合成工艺和优化配方，努力提高神经酰胺成分的质量和效果，以满足市场的需求。越来越多的消费者对产品成分的关注度提高，更倾向于选择天然和有机的护肤品。天然来源的神经酰胺成分，如植物神经酰胺，受到一些消费者的青睐。于是其定性和定量的方法在天然提取的神经酰胺研究中显得尤其重要。
2、神经酰胺的定性与定量目前已经有许多记载，但目前大部分信息集中在人的血液或者城市淤泥中的神经酰胺定性与定量。现有技术中有使用不同方法检查神经酰胺，分别是使用红外光谱法检测皮肤中神经酰胺的方法，利用红外吸收谱来确认神经酰胺的存在；使用nmr测定神经酰胺含量的方法，核磁共振波谱法（nmr）通过分析样品在nmr谱图中的峰位和峰形来
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种酱油渣中神经酰胺的检测方法，通过高效液相色谱-蒸发光检测、tlc薄层色谱法、液相质谱联用和制备液相分离法相互配合，实现对酱油渣中植物性神经酰胺的定性和定量检测分析，操作简单、相互配合可信度高。
2、为实现上述目的，本专利技术所提供的酱油渣中神经酰胺的检测方法采用如下技术方案：
3、一种酱油渣中神经酰胺的检测方法，酱油渣提取液经液相色谱蒸发光检测，测得出峰位置范围，与神经酰胺标品出峰位置范围对比，所述神经酰胺标品出峰位置与酱油渣提取液出峰位置有重叠，判定所述酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液使用tlc薄层色谱方法检测，观测层析板上的层析杠，与神经酰胺标品在层析板上的层析杠对比，位置匹配，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液经液相质谱联用检测，检测图谱与神经酰胺标品图谱对比保留时间，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺，根据液相质谱图谱出峰面积计算酱油渣中神经酰胺含量；建立液相法提取分离酱油渣，利用tlc薄层色谱技术找到硅胶柱上分离的目标植物性神经酰胺，称重后与所述液相质谱图谱出峰面积计算得到的神经酰胺重量对比，验证检测方法的准确性。
4、可选的，所述酱油渣提取液是用四氢呋喃在室温下超声提取的，酱油渣在四氢呋喃中的浓度是25mg/ml，所述超声提取的时间是15min。
5、可选的，所述神经酰胺标品在试验前，用四氢呋喃配置成5mg/ml的溶液。
6、可选的，所述液相质谱联用检测，四氢呋喃配置的神经酰胺标品溶液上机前：用氮气吹干，然后用色谱级甲醇复溶到0.1mg/ml，超声溶解。
7、可选的，液相质谱联用检测，所述酱油渣提取液上机前：用氮气吹干，先用等量色谱级甲醇复溶，再用色谱级甲醇稀释10倍，用氮气吹干后，再次用色谱级甲醇复溶稀释10倍。
8、可选的，所述液相质谱联用时，流动相a乙腈，b异丙醇；流动相配比：初始a:b=7:3，25min后a:b=1:9，30min 后a:b=1:9，32min后a:b=7:3，流速0.25ml/min；质谱条件：扫描范围50-1000，柱子：c18。
9、可选的，所述液相法是用85%~90%的乙醇溶液提取酱油渣，得到醇提取物后，旋转蒸发干燥，使用干法上样，在c30硅胶柱上进行分离。
10、可选的，所述液相条件是：流动相a乙腈，b异丙醇；流动相配比：初始a:b=7:3，25min后a:b=1:9，30min 后a:b=1:9，32min后a:b=7:3，流速5ml/min。
11、可选的，液相色谱蒸发光检测器流动相a乙腈、b异丙醇，柱子c30，流速1ml/min；检测器温度：40℃，3.5bar，增益6；进样量：10μl。
12、可选的，所述tlc薄层色谱方法是在正向硅胶板上画线上样，样品展开剂为氯仿、甲醇和水，所述氯仿、甲醇和水的体积比是：91:9:1，展开时间30min。
13、本专利技术主要构建了高效液相色谱-蒸发光检测器方法、tlc薄层色谱法、液相质谱联用法、制备液相分离法对酱油渣中的植物性神经酰胺进行准确定性和定量。先使用高效液相色谱-蒸发光检测方法，找到酱油渣中的目标物神经酰胺；通过lc-ms定性和tlc薄层色谱法与标品匹配，确定和验证高效液相色谱-蒸发光检测器找到目标物质神经酰胺的准确性；最后液相分离法分离称重记录得到的纯品重量，再与高效液相色谱-蒸发光检测法和lc-ms对比，得出相对准确的含量。
14、高效液相色谱-蒸发光检测器方法主要针对酱油渣中神经酰胺的定性与定量。蒸发光检测器是一种常用于hplc分析中的通用检测器，它可用于检测不具有紫外吸收或荧光性质的样品；蒸发光检测器的工作原理是利用样品溶剂中的挥发性成分在喷雾室中蒸发，形成细小的颗粒，这些颗粒会与光源产生散射，散射光会被检测器接收并转换为电信号，然后转化为对应的响应信号。神经酰胺是一类具有特定结构的脂质类化合物，它们通常不适合通过紫外-可见光谱检测器（uv-vis detector）进行直接检测；这是因为神经酰胺在紫外-可见光谱范围内缺乏吸收峰或具有较弱的吸收特性；然而，蒸发光检测器利用样品溶剂中的挥发性成分在喷雾室中蒸发，然后通过检测散射光来定量分析目标化合物，基于化合物在特定波长下发射荧光信号的原理，通过测量发射光强度来进行检测。
15、tlc薄层色谱法是主要用在酱油渣中植物性神经酰胺的定性检测上的，根据自购的标品对比，找到位置相同的一类化合物；该方法具有操作简便、成本低廉、分离速度快的优点，因此在化学、生物化学、药学等领域中被广泛应用；它常用于分离混合物、检测杂质、监测反应进程和确认本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，酱油渣提取液经液相色谱蒸发光检测，测得出峰位置范围，与神经酰胺标品出峰位置范围对比，所述神经酰胺标品出峰位置与酱油渣提取液出峰位置有重叠，判定所述酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液使用TLC薄层色谱方法检测，观测层析板上的层析杠，与神经酰胺标品在层析板上的层析杠对比，位置匹配，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液经液相质谱联用检测，检测图谱与神经酰胺标品图谱对比保留时间，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺，根据液相质谱图谱出峰面积计算酱油渣中神经酰胺含量；建立液相色谱法提取分离酱油渣，利用TLC薄层色谱技术找到硅胶柱上分离的目标植物性神经酰胺，称重后与所述液相质谱图谱出峰面积计算得到的神经酰胺重量对比，验证检测方法的准确性。
2.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述酱油渣提取液是用四氢呋喃在室温下超声提取的，酱油渣在四氢呋喃中的浓度是25mg/mL，所述超声提取的时间是15min。
3.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述神经酰胺标品在试
4.根据权利要求3所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述液相质谱联用检测，四氢呋喃配置的神经酰胺标品溶液上机前：用氮气吹干，然后用色谱级甲醇复溶到0.1mg/mL，超声溶解。
5.根据权利要求3所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，液相质谱联用检测，所述酱油渣提取液上机前：用氮气吹干，先用等量色谱级甲醇复溶，再用色谱级甲醇稀释10倍，用氮气吹干后，再次用色谱级甲醇复溶稀释10倍。
6.根据权利要求4或5所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述液相质谱联用时，流动相A乙腈，B异丙醇；流动相配比：初始A:B=7:3，25min后A:B=1:9，30min 后A:B=1:9，32min后A:B=7:3，流速0.25mL/min；质谱条件：扫描范围50-1000，柱子:C18。
7.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法是用85%~90%的乙醇溶液提取酱油渣，得到醇提取物后，旋转蒸发干燥，使用干法上样，在C30硅胶柱上进行分离。
8. 根据权利要求7所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的条件是：流动相A乙腈，B异丙醇；流动相配比：初始A:B=7:3，25min后A:B=1:9，30min 后A:B=1:9，32min后A:B=7:3，流速5mL/min。
9.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，液相色谱蒸发光检测器流动相A乙腈、B异丙醇，柱子C30，流速1mL/min；检测器温度：40℃，3.5bar，增益6；进样量：10μL。
10.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述TLC薄层色谱方法是在正向硅胶板上画线上样，样品展开剂为氯仿、甲醇和水，所述氯仿、甲醇和水的体积比是：91:9:1，展开时间30min。
...【技术特征摘要】
1.一种酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，酱油渣提取液经液相色谱蒸发光检测，测得出峰位置范围，与神经酰胺标品出峰位置范围对比，所述神经酰胺标品出峰位置与酱油渣提取液出峰位置有重叠，判定所述酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液使用tlc薄层色谱方法检测，观测层析板上的层析杠，与神经酰胺标品在层析板上的层析杠对比，位置匹配，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺；酱油渣提取液经液相质谱联用检测，检测图谱与神经酰胺标品图谱对比保留时间，进一步判定酱油渣中存在所述神经酰胺，根据液相质谱图谱出峰面积计算酱油渣中神经酰胺含量；建立液相色谱法提取分离酱油渣，利用tlc薄层色谱技术找到硅胶柱上分离的目标植物性神经酰胺，称重后与所述液相质谱图谱出峰面积计算得到的神经酰胺重量对比，验证检测方法的准确性。
2.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述酱油渣提取液是用四氢呋喃在室温下超声提取的，酱油渣在四氢呋喃中的浓度是25mg/ml，所述超声提取的时间是15min。
3.根据权利要求1所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述神经酰胺标品在试验前，用四氢呋喃配置成5mg/ml的溶液。
4.根据权利要求3所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，所述液相质谱联用检测，四氢呋喃配置的神经酰胺标品溶液上机前：用氮气吹干，然后用色谱级甲醇复溶到0.1mg/ml，超声溶解。
5.根据权利要求3所述的酱油渣中神经酰胺的检测方法，其特征在于，液相质谱联用检测，所述酱油渣...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹庸，李一峰，曾志安，阚启鑫，刘果，陈丽梅，戴伟杰，
申请(专利权)人：广东惠尔泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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