【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂，具体为解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、支原体(mycoplasma)归属于柔膜体纲，支原体目，支原体科；其下分为支原体属、脲原体属。能够从人体分离出的支原体共有16种，其中7种对人体有致病性。常见的与泌尿生殖道感染有关的支原体有解脲支原体(u.urealyticum，uu)、人型支原体(m.hominis，mh)。
2、解脲支原体可分为两个亚型：parvo生物型和t960生物型。进一步可分为14个血清型：parvo生物型由解脲支原体血清型1、3、6、14组成；t960生物型则包括解脲支原体2、4、5、7、8、9、10、11、12、13血清型。这两种亚型培养形成的菌落外观一致，划分亚型主要依据基因组之间的差异，需要使用核酸检测的方法。具有parvo生物群特征的支原体又被称为微小脲原体(ureaplasma parvum，up)，up常见于临床无症状携带，在健康体检人群中常常是up的单一血清型检出，大多数人认为up属于正常菌群。有t960生物群特征的支原体仍被称为解脲支原体(ureaplasma urealyticum，uu)。
3、支原体的培养是目前国内医疗机构进行解脲支原体和人型支原体检测的主要手段，而且主要是使用液体培养基直接检测并同时进行支原体药敏试验。但是，这种方法有时候会受到细菌或真菌的污染导致假阳性，因此需要固体培养基确认菌落形态才能最后诊断。而且这种方法不能区分up和uu。区分uu和up主要使用核酸检测的方法。此外，各种各样的
4、《生殖道支原体感染诊治专家共识》中指出，检测uu、mh均可以采用16srrna保守区设计引物，并且采用核酸检测的方法还可以区分uu和up。现已上市的试剂盒中，绝大多数是采用以dna为靶标进行检测，仅有少数试剂盒采用恒温扩增法检测rna，且不能区分uu和up。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒及检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，检测试剂盒包括有pcr反应液和引物探针液，所述引物探针液包括有解脲支原体探针组、人型支原体探针组和微小支原体探针组。
3、作为本专利技术的进一步改进，所述解脲支原体探针组包括：
4、uu-f aacgggtgagtaacacgtatc；
5、uu-r cattgacttggtgagccattac；
6、uu-p-vic accctagtagtccacaccgtaaacgat。
7、作为本专利技术的进一步改进，所述人型支原体探针组包括：
8、mh-f gatgaacgctggctgtgt；
9、mh-r gccattgtttccaatgggtattc；
10、mh-p-rox tactaacattaagttgaggactcta。
11、作为本专利技术的进一步改进，所述微小支原体探针组包括：
12、up-f ggtgagtaacacgtatccaatct；
13、up-r gccattacctcaccaactatct；
14、up-p-fam aaggcgccaacttggactatcactgac。
15、作为本专利技术的进一步改进，所述引物探针液还包括有使用人源性actb基因内标，所述内标包括有：
16、ic-f accctgaagtaccccatcgag；
17、ic-r acatgatctgggtcatcttctcg；
18、ic-p-cy5 tcaccaactgggacgacatggagaaa。
19、作为本专利技术的进一步改进，所述pcr反应液引入dutp/udg防污染系统，udg酶能有效催化水解单链或双链dna中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的n-糖苷键，对rna无活性。
20、作为本专利技术的进一步改进，所述引物探针液浓度：
21、引物：uu 200nm、up 200nm、mh 100nm和ic 200nm；
22、探针：uu 200nm、up 100nm、mh 50nm和ic 100nm。
23、本专利技术还提供了解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒的应用，本应用包括模板制备、反应体系配置、荧光pcr反应和数据分析。
24、作为本专利技术的进一步改进，所述模板制备采用常规核酸提取纯化试剂盒，磁珠法或过柱法。
25、作为本专利技术的进一步改进，所述反应体系配置中总体系30μl，具体为：5×onestep u+mix、one step u+enzyme mix、正向引物、反向引物、taqman probe和模板rna。
26、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
27、本专利技术与以dna为靶标的pcr等技术相比，其灵敏度和准确性更高。由于rna只存在于活的细菌中，所以rna检测结果可以用于疗效判断，符合目前精准医疗的要求，由于up和uu在生物学特性、系统发生学等存在诸多差异，有必要单独考虑up在非淋菌性尿道炎中的作用及相应检测方法，本试剂盒引物探针经验证可区分解脲支原体和微小支原体，对于在临床工作中需要区分泌尿生殖道检出解脲支原体的具有辅助诊断作用。
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1.解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：检测试剂盒包括有PCR反应液和引物探针液，所述引物探针液包括有解脲支原体探针组、人型支原体探针组和微小支原体探针组。
2.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述解脲支原体探针组包括：
3.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述人型支原体探针组包括：
4.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述微小支原体探针组包括：
5.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述引物探针液还包括有使用人源性ACTB基因内标，所述内标包括有：
6.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液引入dUTP/UDG防污染系统，UDG酶能有效催化水解单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，对RNA无活性。
7.根据权利要求1所述的解脲支原体、
8.根据权利要求1-7任意一项所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒的应用，其特征在于：本应用包括模板制备、反应体系配置、荧光PCR反应和数据分析。
9.根据权利要求8所述的模板的制备方法，其特征在于：所述模板制备采用常规核酸提取纯化试剂盒，磁珠法或过柱法。
10.根据权利要求8所述的反应体系的配置方法，其特征在于：所述反应体系配置中总体系30μL，具体为：5×One Step U+Mix、One Step U+Enzyme Mix、正向引物、反向引物、TaqMan Probe和模板RNA。
...【技术特征摘要】
1.解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：检测试剂盒包括有pcr反应液和引物探针液，所述引物探针液包括有解脲支原体探针组、人型支原体探针组和微小支原体探针组。
2.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述解脲支原体探针组包括：
3.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述人型支原体探针组包括：
4.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述微小支原体探针组包括：
5.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所述引物探针液还包括有使用人源性actb基因内标，所述内标包括有：
6.根据权利要求1所述的解脲支原体、人型支原体、微小支原体检测试剂盒，其特征在于：所...
【专利技术属性】
技术研发人员：何伟，杨义兵，陈世兴，谯梦婷，
申请(专利权)人：江苏格诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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